生物固氮

1

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第3期55-56,共2页

关键词 质粒转移 豌豆根瘤菌 结瘤 田桂英 大豆根 固氮酶活性 大豆基因 共生固氮 大豆植株 克隆位点

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Cosmids的十年史

2

作者 Barbara Hohn John Collins 郭殿瑞 《生物技术通报》 CAS CSCD 1989年第8期1-5,27,共6页

1977年3月,在巴塞尔生物:中心(那次 John 作了一个关于质粒克隆载体发展的学术报告)首次相见时,我们俩就确信,寻找一个能高效克隆大型 DNA 片段(】10kb)的全新的方法,是基因技术能否广泛应用的重要一环。当时,John 需要(这个需要就是发... 1977年3月,在巴塞尔生物:中心(那次 John 作了一个关于质粒克隆载体发展的学术报告)首次相见时,我们俩就确信,寻找一个能高效克隆大型 DNA 片段(】10kb)的全新的方法,是基因技术能否广泛应用的重要一环。当时,John 需要(这个需要就是发明的原动力)从细菌克隆出青霉素酰基转移酶基因。这用传统的载体是难以办到的(那时象 EcoRI、SmaI、HindⅢ和 Sau3A 这些限制性酶只能由自己制备)。John 展开更多

关键词 质粒克隆载体 基因技术 ECORI 人类染色体 Cosmids 我们俩 巴塞尔 克隆位点 DNA 拷贝数

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疫苗

3

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第12期37-40,共4页

关键词 融合蛋白 黄热病毒 编码区 克隆位点 重组体 抗原决定基 载体表达 载体转化 启动子 读框

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质粒研究与载体构建

4

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第4期20-23,共4页

关键词 载体构建 穿梭载体 克隆位点 启动子调控 拷贝数 编码序列 革兰氏阴性细菌 电激法 克隆载体 翻译起始区

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质粒研究与载体构建

5

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第5期23-27,共5页

关键词 载体构建 克隆位点 启动子 乳球菌 拷贝数 转座子 复制起点 操纵基因 克隆基因 异源蛋白

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质粒研究与载体构建

6

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第7期21-26,共6页

932157嗜热性梭菌的质粒[会,英]/Kalyuzhnyi,S.V.…//Appl.Biochem.Biotechno1.-1992,34-35.-383～389[译自 DBA,1993,12（2）,93-00629]为了应用目的讨论了一些梭菌,特别是热解糖梭菌 DSM571的质粒可用性及其特性。样本包括热纤梭菌的... 932157嗜热性梭菌的质粒[会,英]/Kalyuzhnyi,S.V.…//Appl.Biochem.Biotechno1.-1992,34-35.-383～389[译自 DBA,1993,12（2）,93-00629]为了应用目的讨论了一些梭菌,特别是热解糖梭菌 DSM571的质粒可用性及其特性。样本包括热纤梭菌的质粒 pCT₁、pFA₇、pFB₇、pFA₁ 展开更多

关键词 载体构建 融合蛋白 穿梭载体 克隆位点 启动子调控 基因克隆 梭菌 克隆载体 外源基因 表达载体

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基因工程

7

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第3期27-42,共16页

910674 通过向小样品高效热转移法减少DNA扩增过程所需时间[英]/Witter,C.T.…//Anal.Biochem.-1990,186(2).-328～331[译自DBA,1990,9(15),90-08579]讨论了在PCR过程中利用空气循环体系对变性、退火及延伸阶段进行快速(几秒种)温度循环.

关键词 穿梭载体 启动子调控 克隆位点 转化子 酵母人工染色体 复制起点 DNA 选择标记 酿酒酵母 起始位点

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质粒研究与载体构建

8

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第12期22-25,共4页

关键词 载体构建 穿梭载体 启动子 基因克隆 克隆位点 RNA 电激法 枯草芽抱杆菌 转座子 选择标记

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Ig重、轻链联合基因文库制备基因工程抗体

9

作者 陈桦 马宝骊 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 1991年第4期249-252,220,共5页

单克隆抗体技术自问世以来,在疾病诊断、治疗和预防方面都取得了很大进展,但这种鼠类单抗在用于人体内治疗时则面临着巨大的挑战。病人会产生人抗鼠抗体而降低疗效,甚或出现类似血清病的严重反应。而人-人杂交瘤技术至今尚无重大突破,... 单克隆抗体技术自问世以来,在疾病诊断、治疗和预防方面都取得了很大进展,但这种鼠类单抗在用于人体内治疗时则面临着巨大的挑战。病人会产生人抗鼠抗体而降低疗效,甚或出现类似血清病的严重反应。而人-人杂交瘤技术至今尚无重大突破,故近年来诸多学者转向采用基因工程技术制备单克隆抗体。现已成功的有:①嵌合抗体; 展开更多

关键词 基因文库 IG 轻链 基因工程抗体 人抗鼠抗体 重链 限制性酶切位点 克隆位点 嵌合抗体 序列分析

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基因工程

10

《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第9期26-44,共19页

912807 利用聚合酶链反应的通用而快速的诱变法[英]/Her1itze,S.…/Gene.-1990,91(1).-143～147[译自DBA,1991,10(1),91-00021] 新方法可用来将突变引入到一种大鼠肌肉乙酰胆碱受体α、γ及ε亚基的cDNA中.

关键词 细胞转染 启动子调控 DNA 聚合酶链反应 乳糖操纵子 外源基因 限制性位点 核糖体结合位点 克隆位点 转化子

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DNA分析与扩增

11

《生物技术通报》 CAS CSCD 1993年第12期27-30,共4页

933967倍增 PCR 菌落徽量制备法[英]/Hawker, K.J。…∥BioTechaiques.-1993,14(5).-764～765[译自DBA,1993,12(13),93-073303为了筛选含有意义取向的所需插入片段的单拷贝重组载体,将倍增 PCR 技术与 PCR 菌落微量制备法结合使用。利... 933967倍增 PCR 菌落徽量制备法[英]/Hawker, K.J。…∥BioTechaiques.-1993,14(5).-764～765[译自DBA,1993,12(13),93-073303为了筛选含有意义取向的所需插入片段的单拷贝重组载体,将倍增 PCR 技术与 PCR 菌落微量制备法结合使用。利用单个 PCR 展开更多

关键词 DNA分析 重组载体 插入片段 单拷贝 克隆位点 制备法 聚合酶链反应 基因表达产物 包涵体 克隆载体

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质粒研究与载体构建

12

《生物技术通报》 CAS CSCD 1992年第3期21-25,共5页

关键词 载体构建 逆病毒载体 自主复制序列 克隆位点 劳氏肉瘤病毒 穿梭载体 启动子调控 转座子 病毒包装 拷贝数

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基因工程

13

《生物技术通报》 CAS CSCD 1994年第1期33-52,共20页

关键词 启动子调控 电激法 基因文库 DNA 基因组计划 克隆位点 编码区 红霉素抗性基因 选择标记 酵母人工染色体

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新型噬菌粒展示载体pCANTAB5L的构建 被引量：7

14

作者 沈毅珺 潘卫 +7 位作者 易进华 徐容 陈秋莉 潘欣 冯春芝 邓松华 戚中田 刘彦君 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期298-302,共5页

目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ... 目的 :将柔性多肽接头和多克隆位点引入噬菌粒载体 pCANTAB5X中 ,构建适用于展示各种随机肽库、功能靶蛋白、功能靶蛋白变异体库和大分子量 (>30 0个氨基酸 )功能蛋白的新型噬菌粒展示载体。 方法 :应用 5′端含XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ识别序列的引物 ,PCR扩增获得XbaⅠ StuⅠ SalⅠ KpnⅠ [G4S]3 NotⅠ衔接片段 ,将该PCR产物克隆到pMD 18T中 ,再将该片段插入 pCANTAB 5X中构建成新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L。 结果 :限制性内切酶酶谱及DNA序列分析证明[G4S]3多肽接头和限制性内酶切位点XbaⅠ、StuⅠ、SalⅠ、KpnⅠ序列被引入到新构建的噬菌粒载体pCANTAB 5L中。 结论 :成功构建了新型噬菌粒展示载体 pCANTAB5L ,并能有效展示功能靶蛋白。 展开更多

关键词 噬菌体展示 噬菌粒载体 多克隆位点 多肽接头

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真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B的改构与应用 被引量：6

15

作者 钱晓龙 周建光 《生物技术通讯》 CAS 2010年第2期158-162,共5页

目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A... 目的:对真核表达载体pcDNA3.1-myc-his(-)B进行改构,以简化目的基因克隆的步骤。方法:用事先设计好的2条寡核苷酸链互相退火,替换pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中NotⅠ与HindⅢ间的部分;利用改构的真核表达载体,分别构建亲环蛋白A、胆绿素还原酶B和过氧化氢酶基因的重组真核表达载体,瞬时转染293T细胞后,用His标签抗体验证其表达。结果:测序结果证实已将预想的序列替换至pcDNA3.1-myc-his(-)B的多克隆位点中相应位置,改构为质粒pcDNA3.1(-)reconstruct;利用改构的真核表达载体表达了相应的目的基因。结论:改构的真核表达载体pcDNA3.1(-)reconstruct可以简化融合myc和His标签的目的基因克隆的过程,并且增加了限制性位点的可选择性。 展开更多

关键词 pcDNA3.1-myc-his(-)B 改构 多克隆位点 pcDNA3.1(-)reconstruct 限制酶位点 目的基因

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含多克隆位点的可诱导型真核表达载体的构建 被引量：4

16

作者 张杰 彭玮丹 +2 位作者 惠宏襄 金明 王成济 《第四军医大学学报》 1998年第2期229-230,共2页

我们利用MT-Ⅱ启动子的特性,构建了含多克隆位点的可诱导型真核表达载体pMDNA3-neo.

关键词 基因载体 基因治疗 多克隆位点 构建

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pET3c衍生载体的构建及应用研究 被引量：4

17

作者 熊盛 林剑 +4 位作者 洪岸 刘杰森 张玲 李志英 姚汝华 《药物生物技术》 CAS CSCD 2001年第1期4-7,共4页

对原核表达载体 pET3c进行改建 ,消去载体上非必需的EcoRⅠ、HindⅢ限制酶位点 ,然后在克隆位点BamHⅠ处引入LacZ片段 ,经此二步改建后的载体命名为 pJN982。该载体保留了 pET3c高效表达外源基因的能力 ,同时 ,其融合克隆位点由 1个增... 对原核表达载体 pET3c进行改建 ,消去载体上非必需的EcoRⅠ、HindⅢ限制酶位点 ,然后在克隆位点BamHⅠ处引入LacZ片段 ,经此二步改建后的载体命名为 pJN982。该载体保留了 pET3c高效表达外源基因的能力 ,同时 ,其融合克隆位点由 1个增至 7个 ,并获得以目视法筛选重组子的能力。应用该载体在E coliBL2 1(DE3)pLysS中融合表达牛碱性成纤维细胞生长因子 ,表达量占菌体总蛋白 30 0 4%。破碎菌体上清经阳离子交换和肝素亲和两步层析 ,得纯度为 95 %的重组蛋白 ,活性检测显示 ,重组蛋白具有与参照品一致的促有丝分裂活性。 展开更多

关键词 pET载体 多克隆位点 目视法筛选 牛碱性成纤维细胞生长因子 pET3C BBFGF

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一种改造载体多克隆位点的新方法 被引量：4

18

作者 李磊 薛芗 +7 位作者 左示敏 陈宗祥 张亚芳 李前前 潘存红 朱俊凯 马玉银 潘学彪 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期40-43,共4页

目的:探寻一种快速的、便捷的改造已知载体多克隆位点的方法。方法:应用一对5’末端分别添加了多个酶切位点的引物扩增任一已知DNA片段,用两端的限制性酶酶切后连接至载体多克隆位点中,从而引入两个新的酶切位点。我们将这一方法称为衔... 目的:探寻一种快速的、便捷的改造已知载体多克隆位点的方法。方法:应用一对5’末端分别添加了多个酶切位点的引物扩增任一已知DNA片段,用两端的限制性酶酶切后连接至载体多克隆位点中,从而引入两个新的酶切位点。我们将这一方法称为衔接子引物-PCR引入法。结果:两个研究实例的酶切结果证实:结果预先设计的酶切位点已替换至载体的多克隆位点,且引入的酶切位点能被顺利切割。结论:衔接子引物-PCR引入法是一种改造已知载体多克隆位点的可行方法。 展开更多

关键词 多克隆位点 改造 衔接子引物

原文传递

鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其原核表达 被引量：4

19

作者 郑海洲 柏佳宁 +1 位作者 边艳青 赵宝华 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期343-345,共3页

根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌... 根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌DH5α中,得到阳性重组菌株DH5α(pBV-gB)。该菌株在温控诱导下,SDS-PAGE电泳可见表达的特异蛋白。ELISA检测证明,表达的蛋白具有较好的反应原性。 展开更多

关键词 鸡传染性喉气管炎病毒 原核表达 GB基因 SDS-PAGE电泳 ELISA检测 多克隆位点 B基因序列 PCR扩增 ILTV 基因片段 表达载体 定向克隆 重组质粒 质粒转化 重组菌株 特异蛋白 反应原性 基因组 疫苗株 受体菌

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TA载体pEASY-T1 Simple在基因克隆中的新应用 被引量：4

20

作者 杨文丽 丁博 +3 位作者 王俊斌 李明 吕芳芳 谢晓东 《天津农学院学报》 CAS 2011年第2期13-15,19,共4页

在基因克隆操作中,由于常用克隆载体多克隆位点的酶切位点数目有限,造成一些DNA片段的克隆、连接受限。为解决这一问题,本文利用pEASY-T1 S imp le载体无酶切位点的特点,通过TA克隆的方法引入多个单一酶切位点,并对所构建的克隆载体进... 在基因克隆操作中,由于常用克隆载体多克隆位点的酶切位点数目有限,造成一些DNA片段的克隆、连接受限。为解决这一问题,本文利用pEASY-T1 S imp le载体无酶切位点的特点,通过TA克隆的方法引入多个单一酶切位点,并对所构建的克隆载体进行了验证。最后证明,这种方法可高效构建含有不同多克隆位点的载体,克服了对常用克隆载体的依赖,大大提高了基因操作的灵活性和有效性。 展开更多

关键词 TA克隆 pEASY-T1 SIMPLE 多克隆位点

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