目的:检测信号转导和转录活化蛋白5a(signal transducer and activator of transcription 5a,STAT5a)在浸润性乳腺癌组织中的表达情况,探索STAT5a在乳腺癌患者中潜在的临床意义。方法:采用免疫组织化学染色的方法检测100例浸润性乳腺癌...目的:检测信号转导和转录活化蛋白5a(signal transducer and activator of transcription 5a,STAT5a)在浸润性乳腺癌组织中的表达情况,探索STAT5a在乳腺癌患者中潜在的临床意义。方法:采用免疫组织化学染色的方法检测100例浸润性乳腺癌组织及10例正常乳腺组织标本中STAT5a的表达情况;收集入组乳腺癌患者的临床病理资料,并对所有入组乳腺癌患者进行至少5年的随访;分析STAT5a表达情况与乳腺癌患者临床病理特征、预后的关系。结果:(1)100例浸润性乳腺癌中STAT5a的阳性表达率为46%,显著高于正常乳腺组织(P<0.05),乳腺癌中STAT5a的表达与肿瘤分级、激素受体状况显著相关(P<0.05)。(2)生存分析显示,STAT5a阳性组乳腺癌患者5年生存率较STAT5a阴性组高,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)单因素分析发现临床分期、淋巴结转移情况、STAT5a与患者5年生存率之间存在关联,并有统计学意义(P<0.05)。(4)Cox回归模型显示:STAT5a、淋巴结转移情况及临床分期是影响乳腺癌患者生存的独立预后因素。结论:高分化、激素受体阳性乳腺癌组织高表达STAT5a。STAT5a阴性表达的乳腺癌患者预后较差,STAT5a可作为判断乳腺癌患者预后的指标。展开更多
信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6...信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6细胞胰岛素分泌的影响及作用机制。电穿孔法转染小干扰RNA(siRNA)敲减STAT5基因表达后,实时定量PCR和蛋白质印迹法显示,与对照干扰RNA转染的细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞的mRNA及蛋白质表达水平分别约70%和67%(P<0.01),提示成功构建了Stat5基因沉默模型。酶联免疫吸附法结合蛋白质印迹法显示,与对照组细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞在不同浓度葡萄糖刺激下,胰岛素分泌能力提高大约1倍(P<0.05);同时,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)的磷酸化水平亦随之加强。加入Ca MKⅡ抑制剂AIPⅡ(auto camtide-2 related inhibitory peptideⅡ)可明显抑制Stat5 siRNA转染导致的细胞胰岛素分泌水平增加(P<0.01)。上述结果表明,沉默Stat5基因后可通过增强Ca MKⅡ的磷酸化促进MIN6细胞胰岛素的分泌。展开更多
本研究旨在探讨信号转导和转录活化蛋白4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)受白介素-12(in-terleukin-12,IL-12)刺激后移位入细胞核的机制。对STATs家族成员进行同源性比对分析结果显示,STAT4的DNA结合域的39...本研究旨在探讨信号转导和转录活化蛋白4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)受白介素-12(in-terleukin-12,IL-12)刺激后移位入细胞核的机制。对STATs家族成员进行同源性比对分析结果显示,STAT4的DNA结合域的395～416位氨基酸残基序列可能具有二聚体特异性核定位信号(dimer-specific nuclear localization signal,dsNLS)功能。有鉴于此,本研究以pEGFP-C1为表达载体,分别构建了pEGFP-STAT4质粒、缺失395～416位氨基酸残基序列的缺失型STAT4质粒(pEGFP-STAT4-Del)、将SV40大T抗原上经典的NLS核酸序列插入表达载体的阳性对照质粒(pEGFP-NLS)和将缺失型STAT4插入pEGFP-NLS的pEGFP-NLS-STAT4-Del质粒。将这些质粒瞬时转染宫颈癌腺癌细胞系Caski细胞,经过IL-12刺激,发现野生型STAT4移位入细胞核,而缺失型STAT4分布在细胞浆中;进一步用leptomycinB处理,IL-12再刺激后野生型STAT4被滞留于细胞核中,而缺失型STAT4仍然分布在胞浆中;将NLS插入缺失型STAT4,能恢复缺失型STAT4的核移位。以上结果说明野生型STAT4在IL-12刺激下能移位入细胞核,其入核机制是在其DNA结合域的395～416位氨基酸残基序列具有dsNLS功能,能介导活化的STAT4移位入细胞核。展开更多
文摘目的:检测信号转导和转录活化蛋白5a(signal transducer and activator of transcription 5a,STAT5a)在浸润性乳腺癌组织中的表达情况,探索STAT5a在乳腺癌患者中潜在的临床意义。方法:采用免疫组织化学染色的方法检测100例浸润性乳腺癌组织及10例正常乳腺组织标本中STAT5a的表达情况;收集入组乳腺癌患者的临床病理资料,并对所有入组乳腺癌患者进行至少5年的随访;分析STAT5a表达情况与乳腺癌患者临床病理特征、预后的关系。结果:(1)100例浸润性乳腺癌中STAT5a的阳性表达率为46%,显著高于正常乳腺组织(P<0.05),乳腺癌中STAT5a的表达与肿瘤分级、激素受体状况显著相关(P<0.05)。(2)生存分析显示,STAT5a阳性组乳腺癌患者5年生存率较STAT5a阴性组高,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(3)单因素分析发现临床分期、淋巴结转移情况、STAT5a与患者5年生存率之间存在关联,并有统计学意义(P<0.05)。(4)Cox回归模型显示:STAT5a、淋巴结转移情况及临床分期是影响乳腺癌患者生存的独立预后因素。结论:高分化、激素受体阳性乳腺癌组织高表达STAT5a。STAT5a阴性表达的乳腺癌患者预后较差,STAT5a可作为判断乳腺癌患者预后的指标。
文摘信号转导及转录活化蛋白5(signal transducer and activator of transcription 5,STAT5)在乳腺发育、免疫应答、细胞代谢、造血及肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但对胰岛细胞功能影响研究甚少。本研究旨在探讨STAT5对小鼠胰岛肿瘤MIN6细胞胰岛素分泌的影响及作用机制。电穿孔法转染小干扰RNA(siRNA)敲减STAT5基因表达后,实时定量PCR和蛋白质印迹法显示,与对照干扰RNA转染的细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞的mRNA及蛋白质表达水平分别约70%和67%(P<0.01),提示成功构建了Stat5基因沉默模型。酶联免疫吸附法结合蛋白质印迹法显示,与对照组细胞比较,Stat5 siRNA转染细胞在不同浓度葡萄糖刺激下,胰岛素分泌能力提高大约1倍(P<0.05);同时,钙调蛋白依赖的蛋白激酶Ⅱ(calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,Ca MKⅡ)的磷酸化水平亦随之加强。加入Ca MKⅡ抑制剂AIPⅡ(auto camtide-2 related inhibitory peptideⅡ)可明显抑制Stat5 siRNA转染导致的细胞胰岛素分泌水平增加(P<0.01)。上述结果表明,沉默Stat5基因后可通过增强Ca MKⅡ的磷酸化促进MIN6细胞胰岛素的分泌。
基金supported by the National Natural Scientific Foundation of China (No. 30771122)National Undergraduate Innovation Training Project of Ministry of Education,China (No.AE11528)
文摘本研究旨在探讨信号转导和转录活化蛋白4(signal transducer and activator of transcription 4,STAT4)受白介素-12(in-terleukin-12,IL-12)刺激后移位入细胞核的机制。对STATs家族成员进行同源性比对分析结果显示,STAT4的DNA结合域的395～416位氨基酸残基序列可能具有二聚体特异性核定位信号(dimer-specific nuclear localization signal,dsNLS)功能。有鉴于此,本研究以pEGFP-C1为表达载体,分别构建了pEGFP-STAT4质粒、缺失395～416位氨基酸残基序列的缺失型STAT4质粒(pEGFP-STAT4-Del)、将SV40大T抗原上经典的NLS核酸序列插入表达载体的阳性对照质粒(pEGFP-NLS)和将缺失型STAT4插入pEGFP-NLS的pEGFP-NLS-STAT4-Del质粒。将这些质粒瞬时转染宫颈癌腺癌细胞系Caski细胞,经过IL-12刺激,发现野生型STAT4移位入细胞核,而缺失型STAT4分布在细胞浆中;进一步用leptomycinB处理,IL-12再刺激后野生型STAT4被滞留于细胞核中,而缺失型STAT4仍然分布在胞浆中;将NLS插入缺失型STAT4,能恢复缺失型STAT4的核移位。以上结果说明野生型STAT4在IL-12刺激下能移位入细胞核,其入核机制是在其DNA结合域的395～416位氨基酸残基序列具有dsNLS功能,能介导活化的STAT4移位入细胞核。
