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信号肽酶复合体催化亚基SPC18敲除细胞系的建立与鉴定
被引量：
1
1
作者
张子豪
李慧
+2 位作者
刘萌
曹涵钰
董宁征
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2019年第11期146-149,186,共5页
信号肽酶复合体(SPC)通过水解切除信号肽调控蛋白分泌,实验旨在研究信号肽酶复合体催化亚基SPC18对细胞行为、蛋白分泌功能的影响,探究其在乳腺生物反应器中的应用。本研究在人胚肾细胞HEK293细胞中,采用CRISPR-Cas9基因编辑技术使SPC18...
信号肽酶复合体(SPC)通过水解切除信号肽调控蛋白分泌,实验旨在研究信号肽酶复合体催化亚基SPC18对细胞行为、蛋白分泌功能的影响,探究其在乳腺生物反应器中的应用。本研究在人胚肾细胞HEK293细胞中,采用CRISPR-Cas9基因编辑技术使SPC18的2号外显子缺失碱基GGAAG,导致移码突变,建立SPC18敲除细胞系,检测SPC18缺失对细胞形态、细胞增殖和内源分泌蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌的影响。靶基因测序及SPC18蛋白检测显示,成功构建了SPC18敲除细胞系,细胞形态与野生型HEK293细胞无显著差异,但细胞增殖能力显著下降;SPC18缺失不影响内源性MMP9的表达,但蛋白分泌受到抑制。本研究建立了SPC18敲除细胞系,SPC18的缺失会影响SPC功能,为SPC在乳腺生物反应器中的应用提供了依据。
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关键词
乳腺生物反应器
信号肽酶
复合体
催化亚基SPC18
CRISPR-Cas9
HEK293
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职称材料
细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析
被引量：
1
2
作者
史慧君
董文丽
+5 位作者
郭妍婷
袁圆圆
陈俊贞
杨莉
冉多良
付强
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期1870-1876,共7页
旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1,SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的作用。使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA,克隆至慢病毒载体lentiCRISPR ...
旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1,SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的作用。使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA,克隆至慢病毒载体lentiCRISPR v2,连同包装质粒pSPAX2和pMD2.G转染至人胚肾细胞HEK-293T中,包装慢病毒并感染MDBK细胞,用嘌呤霉素筛选5代后获得敲低SPCS1蛋白后稳定表达的细胞,用Western blot检测SPCS1蛋白表达的情况;使用荧光定量PCR和免疫荧光分析检测BVDV感染SPCS1蛋白敲低细胞不同时间后5′非翻译区(untranslated region,UTR)mRNA的水平和双链RNA(double-stranded,dsRNA)积累,利用倒置显微镜观察BVDV致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,根据Reed-Muench方法测定病毒滴度变化情况。结果:Western blot检测SPCS1蛋白表达量明显下降,成功构建SPCS1敲低(knockdown,KD)细胞;BVDV感染SPCS1 KD细胞后与对照Scramble相比,BVDV 5′UTR mRNA水平和dsRNA量均显著性降低(P<0.01),CPE现象推迟并减弱,子代病毒滴度显著性下降(P<0.01),最高降低95.8%。SPCS1敲低后显著性影响BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供理论依据。
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关键词
信号肽酶
复合体
亚基1
牛病毒性腹泻病毒
5′非翻译区
双链RNA
复制
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职称材料
题名
信号肽酶复合体催化亚基SPC18敲除细胞系的建立与鉴定
被引量：
1
1
作者
张子豪
李慧
刘萌
曹涵钰
董宁征
机构
江苏省血液研究所
苏州大学唐仲英血液学研究中心
出处
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2019年第11期146-149,186,共5页
基金
国家自然科学基金项目（81570457）
文摘
信号肽酶复合体(SPC)通过水解切除信号肽调控蛋白分泌,实验旨在研究信号肽酶复合体催化亚基SPC18对细胞行为、蛋白分泌功能的影响,探究其在乳腺生物反应器中的应用。本研究在人胚肾细胞HEK293细胞中,采用CRISPR-Cas9基因编辑技术使SPC18的2号外显子缺失碱基GGAAG,导致移码突变,建立SPC18敲除细胞系,检测SPC18缺失对细胞形态、细胞增殖和内源分泌蛋白基质金属蛋白酶9(MMP9)表达和分泌的影响。靶基因测序及SPC18蛋白检测显示,成功构建了SPC18敲除细胞系,细胞形态与野生型HEK293细胞无显著差异,但细胞增殖能力显著下降;SPC18缺失不影响内源性MMP9的表达,但蛋白分泌受到抑制。本研究建立了SPC18敲除细胞系,SPC18的缺失会影响SPC功能,为SPC在乳腺生物反应器中的应用提供了依据。
关键词
乳腺生物反应器
信号肽酶
复合体
催化亚基SPC18
CRISPR-Cas9
HEK293
分类号
S814 [农业科学—畜牧学]
下载PDF
职称材料
题名
细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析
被引量：
1
2
作者
史慧君
董文丽
郭妍婷
袁圆圆
陈俊贞
杨莉
冉多良
付强
机构
新疆农业大学动物医学学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022年第6期1870-1876,共7页
基金
国家自然科学基金项目(31902271,32160829)
自治区天山创新团队(2020D14005)
自治区百名博士引进计划。
文摘
旨在探明信号肽酶复合体亚基1(signal peptidase complex subunit 1,SPCS1)影响牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus,BVDV)复制的作用。使用Benchling和CHOPCHOP等平台设计靶向SPCS1基因的sgRNA,克隆至慢病毒载体lentiCRISPR v2,连同包装质粒pSPAX2和pMD2.G转染至人胚肾细胞HEK-293T中,包装慢病毒并感染MDBK细胞,用嘌呤霉素筛选5代后获得敲低SPCS1蛋白后稳定表达的细胞,用Western blot检测SPCS1蛋白表达的情况;使用荧光定量PCR和免疫荧光分析检测BVDV感染SPCS1蛋白敲低细胞不同时间后5′非翻译区(untranslated region,UTR)mRNA的水平和双链RNA(double-stranded,dsRNA)积累,利用倒置显微镜观察BVDV致细胞病变(cytopathic effect,CPE)情况,根据Reed-Muench方法测定病毒滴度变化情况。结果:Western blot检测SPCS1蛋白表达量明显下降,成功构建SPCS1敲低(knockdown,KD)细胞;BVDV感染SPCS1 KD细胞后与对照Scramble相比,BVDV 5′UTR mRNA水平和dsRNA量均显著性降低(P<0.01),CPE现象推迟并减弱,子代病毒滴度显著性下降(P<0.01),最高降低95.8%。SPCS1敲低后显著性影响BVDV复制,为BVDV防控新技术的建立提供理论依据。
关键词
信号肽酶
复合体
亚基1
牛病毒性腹泻病毒
5′非翻译区
双链RNA
复制
Keywords
signal peptidase complex subunit 1
bovine viral diarrhea virus
5′untranslated region
double-stranded RNA
replication
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
S852.659.6 [农业科学—兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
信号肽酶复合体催化亚基SPC18敲除细胞系的建立与鉴定
张子豪
李慧
刘萌
曹涵钰
董宁征
《中国畜牧杂志》
CAS
北大核心
2019
1
下载PDF
职称材料
2
细胞信号肽酶复合体亚基1与牛病毒性腹泻病毒复制的相关性分析
史慧君
董文丽
郭妍婷
袁圆圆
陈俊贞
杨莉
冉多良
付强
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2022
1
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职称材料
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