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发酵乳中植物乳杆菌依赖解旋酶恒温基因扩增检测方法的建立
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作者 张雅伦 李永波 +4 位作者 张涛 陈晨 张捷 周巍 张岩 《乳业科学与技术》 2023年第1期30-34,共5页
通过依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)技术建立一种快速检测发酵乳中植物乳杆菌的方法。根据植物乳杆菌scrB基因序列(基因号为AJ579541.1)设计特异性引物,通过实验筛选出检测体系中UvrD解... 通过依赖解旋酶恒温基因扩增(helicase-dependent isothermal DNA amplification,HDA)技术建立一种快速检测发酵乳中植物乳杆菌的方法。根据植物乳杆菌scrB基因序列(基因号为AJ579541.1)设计特异性引物,通过实验筛选出检测体系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的较优含量,达到最优反应条件。所建立的HDA方法通过人工添加植物乳杆菌确定检出限,通过多种菌株扩增验证方法特异性,通过扩增产物电泳和序列比对分析验证方法一致性和稳定性。结果表明:采用HDA法检测发酵乳中植物乳杆菌,反应体系中UvrD解旋酶和T4 gp32蛋白的适宜添加量分别为0.15μg和5.0μg,特异性良好,与涉及的其他菌株均未发生扩增,检出限为2.8×10^(1) CFU/g,扩增序列与设计序列长度(273 bp)一致且序列同源性为100%;本研究建立的方法可以快速检测发酵乳中植物乳杆菌,具有灵敏度高、操作简单、应用前景广等特点。 展开更多
关键词 依赖解旋酶恒温扩增技术 发酵乳 植物乳杆菌 快速检测
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实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术和实时荧光RT-PCR在手足口病中的应用价值 被引量:2
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作者 张蕾 张秀娟 张云帆 《临床医学研究与实践》 2021年第13期117-119,共3页
目的研究实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术和实时荧光RT-PCR在手足口病中的应用价值。方法回顾性分析106例疑似手足口病患儿的临床资料。所有患儿均进行实时荧光RT-PCR检测、实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术检测,以临床表现、实验室检查... 目的研究实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术和实时荧光RT-PCR在手足口病中的应用价值。方法回顾性分析106例疑似手足口病患儿的临床资料。所有患儿均进行实时荧光RT-PCR检测、实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术检测,以临床表现、实验室检查、血清和病原学的综合诊断结果为临床诊断金标准,比较不同检测方法的诊断结果及效能。结果实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术检测EV通用型、EV71、CoxA16的窗口期及平均用时均短于实时荧光RT-PCR检测,诊断效能均优于实时荧光RT-PCR检测,阳性综合诊断率高于实时荧光RT-PCR检测(P<0.05)。结论实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术在检测手足口病中具有快速、高效、诊断效能高等优势,临床推广应用价值高。 展开更多
关键词 手足口病 实时荧光依赖解旋酶恒温扩增技术 实时荧光RT-PCR
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应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测副溶血性弧菌 被引量:10
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作者 石琰璟 王建广 +6 位作者 房保海 张健 祝素珍 刘云国 姜英辉 雷质文 杨大伟 《青岛科技大学学报(自然科学版)》 CAS 2011年第1期42-45,共4页
以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·... 以副溶血性弧菌的tlh基因为目的片段设计特异性引物,成功建立了恒温条件下快速检测副溶血性弧菌的依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(HDA)的检测法,进行了特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行了比较。该HDA检测方法最低检测限为19.9ng·mL-1,与普通PCR方法相当。副溶血性弧菌的HDA检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。 展开更多
关键词 副溶血性弧菌 检测 依赖解旋酶DNA恒温扩增技术
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大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测方法的建立 被引量:5
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作者 王建广 雷质文 +7 位作者 石琰璟 付静芸 房保海 祝素珍 姜英辉 刘云国 张健 杨大伟 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期271-274,共4页
采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性... 采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明:所建立起的检测法,灵敏度为4.3×103 cfu·mL-1,灵敏度与普通PCR方法相当。大肠埃希氏菌O157:H7的依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。具有广阔的推广前景。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌O157:H7 检测 依赖解旋酶DNA恒温扩增技术
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应用依赖解旋酶DNA恒温扩增技术检测沙门菌的研究 被引量:5
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作者 王建广 姜英辉 +3 位作者 雷质文 石琰璟 房保海 刘云国 《中国卫生检验杂志》 CAS 2010年第12期3289-3291,共3页
目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependent Isothermal DNA Amplification,HDA),建立一种快速检测沙门菌(Salmonella)的新方法。方法:以沙门菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,根据设计的HDA的扩增条件,进行沙门菌的... 目的:基于依赖解旋酶DNA恒温扩增技术(Helicase-dependent Isothermal DNA Amplification,HDA),建立一种快速检测沙门菌(Salmonella)的新方法。方法:以沙门菌的invA基因为目的片段设计特异性引物,根据设计的HDA的扩增条件,进行沙门菌的快速检测,进行特异性和灵敏度实验,并与普通PCR方法进行比较。结果:成功建立起沙门菌HDA检测法,最低检测限为460 pg/tube,与普通PCR方法相当。结论:HDA法检测沙门菌具有快速、简便、特异、灵敏等特点,极适合基层实验室使用,具有广阔的应用前景。 展开更多
关键词 沙门菌 检测 依赖解旋酶DNA恒温扩增技术
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依赖解旋酶恒温扩增技术快速检测麻疹病毒核酸 被引量:7
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作者 马丽敏 卢亦愚 +1 位作者 徐昌平 冯燕 《中国疫苗和免疫》 CAS 2012年第6期493-495,540,共4页
目的建立依赖解旋酶恒温扩增[Helicase-dependent Isothermal Deoxyribonucleic Acid(DNA)Amplification,HDA]技术快速检测麻疹病毒核酸。方法 在麻疹病毒的血凝素基因上设计特异性引物,采用逆转录-依赖耐热解旋酶恒温扩增(Reverse Tra... 目的建立依赖解旋酶恒温扩增[Helicase-dependent Isothermal Deoxyribonucleic Acid(DNA)Amplification,HDA]技术快速检测麻疹病毒核酸。方法 在麻疹病毒的血凝素基因上设计特异性引物,采用逆转录-依赖耐热解旋酶恒温扩增(Reverse Transcription-therm ophilic HDA,RT-tHDA)技术进行恒温扩增,并对反应条件进行优化。结果采用RT-tHDA技术检测麻疹病毒核酸,对风疹病毒、流行性腮腺炎病毒、肠道病毒71型、呼吸道合胞病毒均无交叉反应,具有良好的特异性;且最低检测限可达5.012×10-10摩尔/升(mol/L),敏感度与普通RT-聚合酶链反应方法 无明显差别。结论麻疹病毒RT-tHDA检测方法 具有简便、特异、敏感以及对仪器要求低的特点,为麻疹病毒的核酸检测,提供了一种新方法 。 展开更多
关键词 麻疹病毒 逆转录-依赖耐热解旋酶恒温扩增技术 检测
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