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小鼠骨髓树突状细胞改良培养及体外生物学特性的比较 被引量:8
1
作者 王全楚 冯志华 +3 位作者 周永兴 聂青和 郝春秋 王九平 《世界华人消化杂志》 CAS 2003年第2期219-223,共5页
目的:探讨小鼠骨髓树突状细胞体外生物学特性及用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长的可能性.方法:无菌取小鼠的骨髓分离、培养DC前体,分别以小鼠腹膜分泌液和重组细胞因子mGM-CSF,mIL-4刺激培养使DC前体转化为DC,再用... 目的:探讨小鼠骨髓树突状细胞体外生物学特性及用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长的可能性.方法:无菌取小鼠的骨髓分离、培养DC前体,分别以小鼠腹膜分泌液和重组细胞因子mGM-CSF,mIL-4刺激培养使DC前体转化为DC,再用混合淋巴细胞增生反应(MLR)、细胞免疫组织化学染色及光镜、扫描电镜观察二种DC生物特性及免疫活性的差异.结果:培养6-8d,二种方法培养的骨髓DC(BM-DC)均有大量细胞从集落中释放,并呈成熟状态,重组mGM-CSF,mIL-4刺激培养的DC得率稍高(6×106)于腹膜培养组(3×106),但无显著性差异;培养7dBM-DC的B7-2表达较高,呈强阳性,混合淋巴细胞反应(MLR)中均表现出有强烈刺激同种T细胞增生的能力;尤以重组mGM-CSF,mIL-4组明显高于腹膜培养组,未加任何处理的空白对照组中DC前体具有非成熟DC的形态及功能特征,且无刺激同种T细胞增生的能力.结论:实验结果提示用自体腹膜培养基代替细胞因子刺激树突状细胞体外生长可获得一定数量的树突状细胞并具有相应的生物学特性及功能,基本能满足实验研究的需要,为基层单位开展树突状细胞的研究提供了可能性. 展开更多
关键词 小鼠 骨髓 树突状细胞 细胞培养 体外生物学特性 比较
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不同类型人软骨细胞体外生物学特性比较 被引量:7
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作者 张艳 柴岗 +2 位作者 崔磊 刘伟 曹谊林 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期497-498,共2页
目的 通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法 取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细... 目的 通过研究人耳软骨和肋软骨两种不同类型软骨细胞体外分离、增殖、老化规律 ,为选择合适的组织工程种子细胞提供依据。方法 取小耳畸形残耳软骨和肋软骨 ,体外分别用0 .0 5 %和 0 .15 %Ⅱ型胶原酶消化 16h分离 ,台盼蓝染色计活细胞数 ,得原代细胞获得率。体外单层培养 6代 ,观察形态学改变 ,群体倍增时间 (PDT ) ,免疫细胞化学染色及逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)检测Ⅱ型胶原和Aggrecan评定软骨细胞老化规律。 结果 人残耳软骨组织平均细胞获得率为 ( 1.5 4± 0 .14 )× 10 6/ g ,肋软骨平均获得率为 ( 0 .46± 0 .0 9)× 10 6/ g ,两类软骨细胞P1的PDT最短 ,前 3代增殖力较强 ,P3 以后PDT明显延长 ,P6代细胞不再增殖。免疫细胞化学及RT PCR均证实耳软骨细胞 3代内、肋软骨细胞 4代内软骨细胞表型稳定。结论 第 2代的耳软骨细胞与第 3代肋软骨细胞可作为人体内组织工程化软骨构建的种子细胞。 展开更多
关键词 软骨细胞 体外生物学特性 组织工程 种子细胞
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人神经干细胞的体外生物学特性 被引量:5
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作者 刘奔 李兰英 庞智玲 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2002年第4期245-249,T002,共6页
本实验利用有丝分裂因子,体外诱导生成人神 经干细胞(NSCs),观察其生长特性并进行鉴定。取胎龄10-22周的大脑半球,分散细胞后种于添加表皮生长因子(EGF,20ng/ml)和/或碱性成纤维生长因子(bFGF,20ng/ml)的培养基中。利用免疫组织化学方... 本实验利用有丝分裂因子,体外诱导生成人神 经干细胞(NSCs),观察其生长特性并进行鉴定。取胎龄10-22周的大脑半球,分散细胞后种于添加表皮生长因子(EGF,20ng/ml)和/或碱性成纤维生长因子(bFGF,20ng/ml)的培养基中。利用免疫组织化学方法鉴定分化后的细胞类型。同时,进行细胞克隆分析、传代培养及端粒酶活性检测。结果显示:NSCs呈悬浮生长的干细胞球,其特异性抗原nestin阳性。NSCs具有增殖能力,可连续传代而不丢失其增殖和多分化潜能的干细胞特性。撤除EGF和bFGF的作用,细胞停止分裂,并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞。克隆分析显示NSCs生长呈密度依赖性。人NSCs表达较低的端粒酶水平,并随培养时间延长而下调。研究表明,利用有丝分裂因子,可在体外成功诱导生成人NSCs,其生长,分化受内外源因素的调节,相关的机制还有待阐明。 展开更多
关键词 人神经干细胞 体外生物学特性 细胞因子 诱导分化
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腺病毒介导mIFN-β基因转染的小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性 被引量:1
4
作者 吴云 徐容 +5 位作者 曹广文 潘卫 陈秋莉 沈毅 蔡春晓 邓松华 《安徽医科大学学报》 CAS 2004年第2期97-100,共4页
目的 研究腺病毒 (Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性。方法 用Ad为载体将mIFN β基因导入B16细胞 ,观察mIFN β基因转染的B16细胞的体外增殖能力及免疫原性的改变。结果 当MOI为 5 0~ 10 0 ,即可获得... 目的 研究腺病毒 (Ad)介导mIFN β基因转染的B16小鼠黑色素瘤细胞的体外生物学特性。方法 用Ad为载体将mIFN β基因导入B16细胞 ,观察mIFN β基因转染的B16细胞的体外增殖能力及免疫原性的改变。结果 当MOI为 5 0~ 10 0 ,即可获得较高的转染效率 ,达 90 %± 1% ,转染细胞能表达分泌mIFN β并具有生物学活性 ;AdmIFN β感染对B16细胞的增殖能力无影响 ,但能显著提高细胞表面MHC Ⅰ类抗原的表达。结论 Ad载体具有较高的转移效率 ,并能使其携带的mIFN β基因有效表达 ;AdmIFN β转染的B16细胞的免疫原性显著增强。提示利用Ad载体携带有效的目的基因来治疗肿瘤甚至开发瘤苗是可行的。 展开更多
关键词 腺病毒 mIFN-β基因转染 小鼠 黑色素瘤 体外生物学特性 瘤细胞
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人IL-2重组腺病毒转染人肺腺癌细胞的体外生物学特性的研究(英文) 被引量:1
5
作者 刘辉 李殿俊 +1 位作者 田长富 刘旭 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 2002年第3期202-206,共5页
目的 在利用COS TPC同源重组法高效制备hIL 2重组腺病毒基础上 ,对感染人IL 2重组腺病毒的人肺腺癌细胞 (Anip973)的体外生物学特性进行研究。方法 将携带有人IL 2基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2 )感染人肺腺癌细胞系 ,通过细胞生长实... 目的 在利用COS TPC同源重组法高效制备hIL 2重组腺病毒基础上 ,对感染人IL 2重组腺病毒的人肺腺癌细胞 (Anip973)的体外生物学特性进行研究。方法 将携带有人IL 2基因的重组腺病毒 (rAd hIL 2 )感染人肺腺癌细胞系 ,通过细胞生长实验、克隆形成实验、流式细胞分析、形态学检查等观察其对Anip973肿瘤细胞的作用 ;利用PCR和琼脂糖电泳对肺癌中人IL 2基因进行了检测。结果 rAd hIL 2经扩增、纯化后 ,滴度可达 10 1 0 PFU ml,当病毒为 30MOI时 ,对Anip973细胞的转染率达 90 %以上。转染的Anip973肿瘤细胞除表面结构和超微结构有轻微变化外 ,其生长能力、克隆形成率及细胞周期等无明显变化。结论 腺病毒介导的细胞因子基因hIL 2转染的Anip973肿瘤细胞未见明显变化。 展开更多
关键词 肺腺癌细胞 体外生物学特性 IL-2重组腺病毒 基因治疗 细胞因子 肺肿瘤
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P16基因转染对人膀胱癌细胞生物学特性的影响
6
作者 王林辉 孙颖浩 +1 位作者 杨庆 钱松溪 《现代泌尿外科杂志》 CAS 2001年第1期7-10,24,共5页
目的 探讨P16基因修饰后人膀胱癌细胞体外培养生物学特性的变化。方法 将携带P16基因的腺病毒体外转染人膀胱癌T24细胞,观察腺病毒对T24细胞的转染效率以及P16基因修饰的T24细胞体外生物学特性的改变。结果 在多重感染度(MOI)值为50,转... 目的 探讨P16基因修饰后人膀胱癌细胞体外培养生物学特性的变化。方法 将携带P16基因的腺病毒体外转染人膀胱癌T24细胞,观察腺病毒对T24细胞的转染效率以及P16基因修饰的T24细胞体外生物学特性的改变。结果 在多重感染度(MOI)值为50,转染时间为12h时,能够达到75%~80%的转染效率,并获得目的基因P16蛋白的高效表达。转染P16基因的T24细胞生长明显受到抑制,Fas和MHCI类抗原表达增高。细胞周期分析显示细胞阻滞于G_0/G_1期的比例明显高于对照组(85%比62%)。结论 人膀胱癌细胞中外源P16基因的表达不仅直接抑制肿瘤细胞的恶性增殖,还可诱导细胞发生凋亡,同时能增强肿瘤细胞的自身免疫原性。 展开更多
关键词 P16基因 人膀胱癌细胞 转染效率 T24细胞 腺病毒 瘤细胞 体外生物学特性 高效表达 目的基因 体外转染
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血液系统疾病
7
《中国医学文摘(儿科学)》 2008年第4期333-336,共4页
关键词 血液系统疾病 再生障碍性贫血 Α地中海贫血 骨髓问充质干细胞 体外生物学特性 相关因素分析 临床研究 免疫抑制
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重组腺病毒介导mIL-4基因转染的G422胶质母细胞瘤体外生物学特性及体内致瘤性的改变
8
作者 洪波 曹雪涛 +4 位作者 朱诚 王文仲 于益芝 章卫平 雷虹 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1996年第4期292-294,共3页
以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖... 以重组的复制缺陷性腺病毒为载体将鼠IL-4基因转染G422小鼠脑胶质母细胞瘤细胞,观察其体外生物学特性和体内致瘤性的变化。结果显示:基因转染的肿瘤细胞有目的基因mRNA的表达,分泌高水平的mIL-4,和野生型G422细胞相比,其体外的细胞增殖能力无显著差异,而接种皮下后肿瘤生长延缓、小鼠的存活期延长。 展开更多
关键词 重组腺病毒 介导 mIL-4 基因转染 G422胶质母细胞瘤 体外生物学特性 体内致瘤性
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转基因人胃腺癌细胞(MKN45/IL-2)的体外生物学特性及体内抗肿瘤作用研究
9
作者 李莹 王志华 +3 位作者 李殿俊 张春艳 马占好 杨悦 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2004年第1期22-24,共3页
目的 研究转hIL - 2基因的人胃腺癌细胞 (MKN4 5 /IL - 2 )的体外生物学特性及小鼠体内抗肿瘤作用。方法 以逆转录病毒PLXSN为载体 ,人白细胞介素 2基因 (hIL - 2 )为目的基因转染人胃腺癌细胞系 ,利用PCR技术对转染后的细胞进行检测... 目的 研究转hIL - 2基因的人胃腺癌细胞 (MKN4 5 /IL - 2 )的体外生物学特性及小鼠体内抗肿瘤作用。方法 以逆转录病毒PLXSN为载体 ,人白细胞介素 2基因 (hIL - 2 )为目的基因转染人胃腺癌细胞系 ,利用PCR技术对转染后的细胞进行检测并应用ELISA试剂盒检测转染后的细胞IL - 2的分泌量 ;利用MTT法绘制生长曲线 ;然后建立人胃腺癌细胞株裸鼠皮下移植瘤模型 ,以肿瘤体积、抑瘤率、生存期等指标观察MKN4 5 /IL - 2对移植瘤的抑制作用。结果 转染后的MKN4 5肿瘤细胞体外生长能力无明显变化。 2 4小时细胞培养上清IL - 2的分泌量为 1 0 0~ 2 0 0u/ 1 0 6细胞 ,体内实验表明MKN4 5 /IL -2治疗组的移植瘤生长速度缓慢 ,体积明显小于生理盐水对照组 (P <0 .0 5 ) ,生存期显著延长 (P <0 .0 5 )。结论 逆转录病毒介导的hIL - 2转染的MKN4 5肿瘤细胞体外生物学特性未见明显变化 。 展开更多
关键词 胃腺癌 体外生物学特性 基因治疗 基因转染 PCR 细胞培养
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腺病毒介导M-CSF、IFN-γ基因分别转染黑色素瘤细胞体外生物学特性的研究
10
作者 雷虹 曹雪涛 +3 位作者 于益芝 周正芳 章卫平 郑玲莉 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 1995年第4期295-295,共1页
肿瘤的基因治疗是目前肿瘤研究领域中的一大热点,其方法之一是将细胞因子的基因转移至肿瘤细胞使之表达,提高局部作用的浓度,减少全身应用重组细胞因子带来的副作用,达到低毒高效的目的,巨噬细胞集落刺激因子(M-CSD最基本的功能是... 肿瘤的基因治疗是目前肿瘤研究领域中的一大热点,其方法之一是将细胞因子的基因转移至肿瘤细胞使之表达,提高局部作用的浓度,减少全身应用重组细胞因子带来的副作用,达到低毒高效的目的,巨噬细胞集落刺激因子(M-CSD最基本的功能是维持巨噬祖细胞增殖、分化、成熟,对于成熟的巨噬细胞(Mφ)也有调节作用, 展开更多
关键词 腺病毒介导 体外生物学特性 M-CSF Γ基因 IFN-Γ 转染 黑色素瘤细胞 重组细胞因子 基因转移 分化
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