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杆状病毒表面展示系统研究进展 被引量：2
1
作者 沈佳 吕正兵 +1 位作者 陈健 张耀洲 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期421-425,共5页
杆状病毒表面展示系统是近年发展起来的一种新的真核生物表面展示系统。通过与病毒衣壳或囊膜蛋白融合表达,可以将外源肽展示在杆状病毒表面,形成刺猬状"伪病毒"。该文结合作者本人的实际工作,简要介绍此系统的原理、特点,并... 杆状病毒表面展示系统是近年发展起来的一种新的真核生物表面展示系统。通过与病毒衣壳或囊膜蛋白融合表达,可以将外源肽展示在杆状病毒表面,形成刺猬状"伪病毒"。该文结合作者本人的实际工作,简要介绍此系统的原理、特点,并综述其在单抗制备、新型疫苗研制、基因转导与基因治疗等领域的最新研究进展。相信经过改进与优化,其可展现出更广阔的应用前景。 展开更多
关键词 杆状病毒 表面展示 伪病毒 融合表达
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HPV16的新型伪病毒对DNA特异性B细胞的靶向实验研究
2
作者 杨曌 王惠明 《现代医药卫生》 2008年第11期1581-1582,共2页
目的:构建人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞(R4A)的靶向性。方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP表达型质粒,形成伪病... 目的:构建人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞(R4A)的靶向性。方法:利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装绿色荧蛋白EGFP表达型质粒,形成伪病毒。透射电镜观察病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结构,并转染R4A细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其转染效率。结果:透射电镜观察证实病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染R4A细胞后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到荧光的表达。结论:HPV16的新型伪病毒能成功转染R4A细胞,为系统性红斑狼疮(SLE)的靶向治疗提供了理想的策略。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒16型 伪病毒 靶向性
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基于HPV16的新型伪病毒对DNA特异性B细胞的杀伤研究
3
作者 吴佩泽 杨明会 《中国现代医药杂志》 2008年第5期1-3,共3页
目的构建基于人乳头状病毒（humanpa pilloma virus,HPV）16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞（R4A）的杀伤效应。方法利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装B细胞特异性启动子Igκ控制... 目的构建基于人乳头状病毒（humanpa pilloma virus,HPV）16型的新型伪病毒,并检测其对DNA特异性B细胞（R4A）的杀伤效应。方法利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外变性与复性过程中将病毒蛋白包装B细胞特异性启动子Igκ控制下的白喉毒素（Diphtheriatoxin,DT）A链（DT-A）基因表达型质粒DNA,形成伪病毒。转染R4A细胞,荧光显微镜和流式细胞仪检测其杀伤效应,酶联免疫法检测R4A细胞分泌抗ds-DNA抗体的滴度。结果转染R4A细胞48h后,荧光显微镜和流式细胞仪成功检测到新型伪病毒对R4A细胞的杀伤效应,R4A细胞分泌抗ds-DNA抗体的滴度明显降低。结论基于HPV16的新型伪病毒能有效特异杀伤R4A细胞,并降低抗ds-DNA抗体的滴度,为系统性红斑狼疮的治疗提供了理想的策略。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒16型 伪病毒 系统性红斑狼疮
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整合埃博拉病毒囊膜蛋白的伪病毒的构建
4
作者 王玉杰 王斌 +3 位作者 时静 胡丹 于群 郑永辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期926-929,共4页
埃博拉病毒(EBOV)是一种能够引起人类和灵长类动物的烈性出血热的病原体,致死率高达90%。对该病毒活病毒的操作仅能够在生物安全4级实验室进行,高级别的生物安全要求限制了病毒的研究。为建立一个能够表达EBOV囊膜蛋白(GP)的伪病毒,本... 埃博拉病毒(EBOV)是一种能够引起人类和灵长类动物的烈性出血热的病原体,致死率高达90%。对该病毒活病毒的操作仅能够在生物安全4级实验室进行,高级别的生物安全要求限制了病毒的研究。为建立一个能够表达EBOV囊膜蛋白(GP)的伪病毒,本研究利用表达GP基因的重组质粒,与囊膜蛋白缺失、表达绿色荧光蛋白(GFP)的人免疫缺陷病病毒1型(HIV-1)基因组的重组质粒共转染人胚胎肾细胞(293T),以包装整合含有囊膜蛋白的伪型EBOV。结果表明,EBOV GP蛋白能够正确组装至HIV-1病毒表面;利用组装的伪型病毒粒子感染293T、人宫颈癌细胞(Hela)、人骨肉瘤细胞(Ghost)和非洲绿猴肾细胞(Vero)几种细胞系,结果显示在不同细胞系中均可检测到GFP蛋白的表达,表明组装的伪型病毒可以模拟野生型病毒感染相关细胞。本研究构建的伪型EBOV作为活病毒的替代工具,为研究EBOV的感染机制及中和抗体的筛选提供了一个良好的平台。 展开更多
关键词 埃博拉病毒 伪病毒 囊膜蛋白
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人乳头状瘤病毒16型伪病毒载体对肝癌细胞系HepG2细胞的杀伤研究
5
作者 闫涛 刘荣 +1 位作者 李海英 李峰生 《肝脏》 2009年第3期204-205,共2页
目的构建基于人乳头状瘤病毒(HPV)16型的伪病毒载体,并检测其对肝癌细胞系HepG2细胞的杀伤活性。方法利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外将病毒蛋白包装白喉毒(DT)A链表达型质粒,形成伪病毒。透射电镜观察病毒样颗粒(VLP)的结... 目的构建基于人乳头状瘤病毒(HPV)16型的伪病毒载体,并检测其对肝癌细胞系HepG2细胞的杀伤活性。方法利用昆虫杆状病毒表达系统表达病毒蛋白,在体外将病毒蛋白包装白喉毒(DT)A链表达型质粒,形成伪病毒。透射电镜观察病毒样颗粒(VLP)的结构,并转染肝癌细胞系HepG2,乳酸脱氢酶释放法检测对肝癌细胞系HepG2的杀伤能力。结果透射电镜观察显示病毒蛋白可自我组装成VLP,在转染肝癌细胞系HepG2后,乳酸脱氢酶释放法成功检测到伪病毒对肝癌细胞系HepG2的杀伤作用。结论基于HPV16的新型伪病毒载体能成功转染肝癌细胞系HepG2,并产生杀伤活性,为肝癌的基因治疗提供了一种可选择的方法。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒16型 伪病毒 载体 杀伤活性
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基于HPV16的新型伪病毒治疗MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的实验研究
6
作者 杨曌 王惠明 《中国现代医药杂志》 2008年第2期1-3,共3页
目的构建基于人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,探讨对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用,为临床治疗系统性红斑狼疮提供实验依据。方法将12只3月龄MRL/lpr狼疮小鼠随机均分为治疗组和对照组,治疗前后测定尿蛋... 目的构建基于人乳头状病毒(human papilloma virus,HPV)16型的新型伪病毒,探讨对MRL/lpr小鼠狼疮性肾炎的治疗作用,为临床治疗系统性红斑狼疮提供实验依据。方法将12只3月龄MRL/lpr狼疮小鼠随机均分为治疗组和对照组,治疗前后测定尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体滴度。结果治疗组小鼠治疗后的尿蛋白、血清尿素氮、肌酐及抗ds-DNA抗体均下降,与治疗前有显著性差异(P<0.05),而对照组治疗前后无显著性差异(P>0.05),并且治疗组小鼠的平均生存期比对照组明显延长(P<0.05)。结论基于人乳头状病毒16型的新型伪病毒可显著改善MRL/lpr小鼠的免疫状况和肾脏功能,提高平均生存期。该研究结果为临床治疗系统性红斑狼疮提供了新的启示。 展开更多
关键词 伪病毒 MRL/lpr狼疮小鼠 系统性红斑狼疮
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猪伪狂犬病病毒新流行株的分离鉴定及抗原差异性分析 被引量：195
7
作者 彭金美 安同庆 +7 位作者 赵鸿远 刘益民 陈家锃 冷超粮 孙艳 常丹 田志军 童光志 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期1-4,共4页
2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分... 2011年以来我国多个省份的规模化猪场发生了新生仔猪出现神经症状和死亡的现象,为确定其是否为猪伪狂犬病病毒(PRV)感染所引发,我们利用PCR方法从死亡的新生仔猪脑组织中扩增PRV的gE基因,发现被检猪场均存在PRV野毒感染。gE基因序列分析表明,从5个省14个猪场的病料中扩增的gE基因高度同源,与以往发表的相关序列比对显示,这些分离株均属于一个相对独立的分支。病料接种Vero细胞能够产生典型的细胞病变,将命名为PRV HeN1分离株接种小鼠能够引起瘙痒、死亡等伪狂犬病症状,并且对小鼠的LD50(102.37TCID50)显著低于经典强毒PRV双城株(103.83TCID50)。此外,中和试验结果显示,PRV Bartha k61活疫苗免疫猪仅能诱导对HeN1分离株低水平的中和抗体,而HeN1分离株能够诱导较高水平的中和抗体,并具有更强的交叉中和能力。根据本实验结果推测,近期各猪场流行的PRV可能存在一定的抗原变异。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鉴定 抗原差异
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猪伪狂犬病病毒鄂A株的分离鉴定 被引量：90
8
作者 陈焕春 方六荣 +3 位作者 何启盖 金梅林 索绪峰 吴美洲 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第2期156-161,共6页
从湖北省某些猪场大批死亡的新生仔猪的脑及内脏中分离到多株病毒，并用其中一代表毒株进行了全面鉴定。该病毒株在仓鼠肾传代细胞上连传１５代均出现典型细胞病变，用适应ＢＨＫ－２１细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、Ｈｅｌａ细胞、Ｖ... 从湖北省某些猪场大批死亡的新生仔猪的脑及内脏中分离到多株病毒，并用其中一代表毒株进行了全面鉴定。该病毒株在仓鼠肾传代细胞上连传１５代均出现典型细胞病变，用适应ＢＨＫ－２１细胞的病毒接种鸡胚成纤维细胞、Ｈｅｌａ细胞、Ｖｅｒｏ细胞、犊牛睾丸原代细胞、猪肾传代细胞ＩＢＲＳ－２均出现典型细胞病变。在电镜下可见到典型的伪狂犬病病毒粒子。病毒对５－碘脱氧尿核苷、氯仿、胰蛋白酶、乙醚敏感，在ｐＨ５．０～９．０下稳定，５６℃３０ｍｉｎ灭活，病毒能被伪狂犬病病毒标准阳性血清中和。病毒接种家兔和小白鼠均出现典型伪狂犬病症状。进而用所分离病毒的ＤＮＡ作为模板，应用特异性引物，通过聚合酶链式反应扩增出伪狂犬病病毒ｇｐ５０基因中４３３－６５１之间２１７ｂｐ长的特异性片段，用地高辛标记的伪狂犬病病毒ＤＮＡＢａｍＨＩ－７片段作探针与所分离病毒的ＤＮＡ进行斑点杂交，出现特异性杂交斑点。结果表明所分离病毒为伪狂犬病病毒，并将该毒株命名为猪伪狂犬病病毒鄂Ａ株。 展开更多
关键词 猪 伪狂犬病病毒 分离鉴定
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免疫后发病仔猪中伪狂犬病毒的分离和鉴定 被引量：101
9
作者 童武 张青占 +5 位作者 郑浩 刘飞 姜一峰 单同领 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2013年第3期1-7,共7页
从2011年开始,全国多个省份发生了新生仔猪疑似伪狂犬病的典型症状。2012年下半年,我们从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔... 从2011年开始,全国多个省份发生了新生仔猪疑似伪狂犬病的典型症状。2012年下半年,我们从江苏省某伪狂犬病疫苗免疫猪场中发病仔猪的脑组织中分离到一株伪狂犬病毒(Pseudorabies virus,PRV),并进行了部分生物学特性分析。从发病死亡仔猪脑组织中,利用PCR技术针对PRV的gB基因和gE基因分别扩增出了两条特异性片段,经序列分析初步确定为伪狂犬病毒感染。随后,将病料上清接种Vero细胞,24 h后细胞发生变圆、空泡、合胞体等典型的细胞病变,将分离的病毒经过6轮蚀斑纯化后,用PRV抗体IFA检测显示,感染细胞产生阳性荧光反应。分离的病毒在Vero细胞上的生长滴度可以达到107.43TCID50/mL。将病毒接种小鼠很快出现了奇痒并最终死亡等伪狂犬症状,且比经典的PRV(S株)对小鼠的LD50低。对gE毒力基因序列的比对分析表明,该毒株与经典PRV强毒和疫苗株有明显差异。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 分离 鉴定
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猪伪狂犬病病毒变异株的分离鉴定及其gE基因的分子特征 被引量：89
10
作者 赵鸿远 彭金美 +9 位作者 安同庆 李琳 冷超粮 陈家锃 王倩 常丹 张秋月 蔡雪辉 童光志 田志军 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期506-509,共4页
2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d... 2014年猪伪狂犬病(PR)在我国规模化猪场大范围发生,本实验室在吉林和黑龙江省发病猪场分离到2株PRV,命名为PRV-JL1和PRV-HLJ1。病毒在Vero细胞中能够产生典型的PRV细胞病变,将PRV-JL1以103LD50的剂量感染3只6月龄绵羊,接种羊在5 d^8 d内全部死亡,均出现典型的PR症状及组织病理学变化。将PRV-JL1及PRV-HLJ1与近3年来本实验室分离鉴定的及GenBank中登录的来源于国内10多个省份的32个PRV株和17个经典PRV株的gE核苷酸序列进行比对分析,结果表明:近3年分离的PRVs与本实验室之前分离的变异株PRV-HeN1的同源性在97.1%~99.5%,而与经典株PRV双城株(PRV-S)的同源性在96.6%~99.1%。以gE氨基酸序列建立的进化树分析结果显示,近3年分离的PRVs形成一个相对独立于经典株的新分支。以上结果表明变异株已成为我国主要流行的病毒株,而且变异株均在gE蛋白的第48位和第492位各存在1个天冬氨酸的插入。该插入突变可以作为鉴定PRV变异株的分子特征,其生物学意义有待于进一步研究。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 变异 鉴定 gE 分子特征
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2012—2013年我国部分地区猪伪狂犬病流行病学调查 被引量：53
11
作者 邹敏 杨旭兵 +6 位作者 郑辉 王红 李陆梅 孙健 王福军 吴发兴 范根成 《中国动物检疫》 CAS 2015年第4期1-5,共5页
[目的]了解我国主要生猪养殖地区猪群中猪伪狂犬病毒感染情况。[方法]分别采用PCR和gEELISA检测方法,对2012-2013年采集/送检的1127份发病猪群组织样品、14801份猪血清样品进行了病原学、血清学检测。[结果]检出PRV野毒感染病原学样品98... [目的]了解我国主要生猪养殖地区猪群中猪伪狂犬病毒感染情况。[方法]分别采用PCR和gEELISA检测方法,对2012-2013年采集/送检的1127份发病猪群组织样品、14801份猪血清样品进行了病原学、血清学检测。[结果]检出PRV野毒感染病原学样品98份,总体检出率8.69%,猪场的PCR检出率为22.49%;共检测14801份血清样品,野毒感染抗体阳性样品2388份,总体阳性率为16.13%,场的阳性率为44.02%。对检测数据进行分类统计,发现华东、华中等生猪主产区猪群中均存在不同程度的PRV野毒感染,感染率呈逐年上升趋势;分析不同日龄猪群的野毒感染抗体检测数据,发现种猪的感染率较高,其次是哺乳仔猪、育肥猪。[结论]猪伪狂犬病在我国主要生猪养殖地区仍不同程度存在,提示应进一步提升猪伪狂犬病的免疫预防水平,定期进行病原学、血清学检测,做好综合防治工作。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 GE基因 PCR gE-ELISA 流行病学调查
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应用微量中和试验进行猪伪狂犬病血清学调查 被引量：32
12
作者 方六荣 陈焕春 +3 位作者 何启盖 吴斌 金梅林 吴美洲 《中国畜禽传染病》 CSCD 1998年第3期151-153,共3页
应用细胞培养微量中和试验（固定病毒稀释血清法）对来自２４个猪场共４２６份血清进行了猪伪狂犬病血清学调查。共检出阳性血清１７１份，血清阳性率达４０．１％，出现血清阳性的猪场有２０个，占所检测猪场的８３．３％，说明伪狂犬... 应用细胞培养微量中和试验（固定病毒稀释血清法）对来自２４个猪场共４２６份血清进行了猪伪狂犬病血清学调查。共检出阳性血清１７１份，血清阳性率达４０．１％，出现血清阳性的猪场有２０个，占所检测猪场的８３．３％，说明伪狂犬病在我省及我国流行相当严重。对其中５０份血清的中和指数（固定血清稀释病毒法）进行了检测，结果中和效价大于１∶２血清的中和指数都在１０２．５以上。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒抗本 微量中和试验 猪
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PCR技术检测猪伪狂犬病毒及其潜伏感染部位的研究 被引量：40
13
作者 周复春 陈焕春 +3 位作者 李学伍 方六荣 吴斌怀 济森 《动物医学进展》 CSCD 1997年第2期22-25,共4页
本研究合成了伪狂犬病毒糖蛋白ｇｐ５０基因引物，该引物能够扩增糖蛋白ｇｐ５０基因中４３４～６５１之间的２１７ｂｐＤＮＡ片段，该片段含ＳａｌⅠ酶切位点，应用引物对几种不同的伪狂犬病毒株多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增结果全为... 本研究合成了伪狂犬病毒糖蛋白ｇｐ５０基因引物，该引物能够扩增糖蛋白ｇｐ５０基因中４３４～６５１之间的２１７ｂｐＤＮＡ片段，该片段含ＳａｌⅠ酶切位点，应用引物对几种不同的伪狂犬病毒株多聚酶链式反应（ＰＣＲ）扩增结果全为阳性。对自然发病猪、潜伏感染猪、伪狂犬病毒引起的死胎等４６头猪１６１个样品进行了ＰＣＲ扩增，其中４６头猪７１个样品ＰＣＲ扩增结果为阳性。羊口疮病毒（ＯＲＦＶ）、牛传染性鼻气管炎病毒（ＩＢＲＶ）。 展开更多
关键词 PCR 检测 伪狂犬病毒 病毒
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多重PCR检测猪瘟病毒、猪细小病毒、猪伪狂犬病病毒 被引量：43
14
作者 刘建柱 崔玉东 +3 位作者 李鹏 王志强 石星明 朴范泽 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期535-537,共3页
根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 ... 根据猪瘟病毒 ( CSFV)、猪细小病毒 ( PPV)和猪伪狂犬病病毒 ( PRV) 3种病原体的基因保守序列 ,分别设计了与CSFV的 E2基因、PPV的 VP2基因和 PRV的 g 基因序列互补的 3对引物。用这 3对引物对人为混合的样品中的PPV和 PRV的 DNA模板及 CSFV反转录后的 c DNA模板进行多重 PCR扩增和多重 PCR反应条件的优化 ,结果同时得到 3条与试验设计相符的 2 88bp( CSFV)、5 75 bp( PPV)和 70 0 bp( PRV)特异性条带 ;敏感性检测结果表明 ,该多重 PCR可以检测到 14 .5 ng/ L 的 CSFV、2 7.1pg/ L 的 PPV、31.4 ng/ L 的 展开更多
关键词 猪瘟病毒 细小病毒 伪狂犬病病毒 检测 多重PCR 早期诊断
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猪伪狂犬病病毒新流行变异毒株的研究进展 被引量：42
15
作者 华利忠 刘剑锋 +2 位作者 冯志新 杨若松 邵国青 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2017年第2期-,共5页
近30年内,猪伪狂犬活疫苗的应用对中国猪伪狂犬病的防控贡献巨大。2011年以来,中国许多免疫猪场相继暴发猪伪狂犬疫情,给养猪业造成了巨大的损失。研究显示最新流行的PRV毒株为变异株,部分商品化活疫苗不能对其提供完全的保护。本文详... 近30年内,猪伪狂犬活疫苗的应用对中国猪伪狂犬病的防控贡献巨大。2011年以来,中国许多免疫猪场相继暴发猪伪狂犬疫情,给养猪业造成了巨大的损失。研究显示最新流行的PRV毒株为变异株,部分商品化活疫苗不能对其提供完全的保护。本文详细介绍了2011年以来中国猪伪狂犬病的发病情况及其分子流行病学调查结果,分析了猪伪狂犬新变异株的分子生物学特性及其变异株来源,同时论述了针对PRV突变株新型疫苗的研究进展,最后对深入开展中国猪伪狂犬病控制与净化研究进行了展望。 展开更多
关键词 猪伪狂犬病毒 变异株 分子生物学 疫苗
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伪狂犬病病毒鄂A株TK^-/gG^-/LacZ^+突变株的构建 被引量：34
16
作者 陈焕春 周复春 +3 位作者 方六荣 何启盖 吴斌 洪文洲 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期69-74,共6页
为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用E... 为了以国内地方分离株鄂A株为亲本构建伪狂犬病病毒双基因缺失株 ,采用外切酶Ⅲ和绿豆核酸酶酶切 ,构建了缺失主要毒力基因TK基因部分编码区的重组质粒 pSTK1-4 ,进一步改造成为转移质粒 pUCPB4。用HindⅢ将质粒pUCPB4线性化 ,然后与用EcoRI消化的伪狂犬病病毒鄂A株TK-/LacZ+ 突变株基因组DNA共转染PK- 15细胞 ,待完全病变后 ,收毒作空斑试验 ,PCR筛选TK缺失的重组病毒。重组病毒空斑纯化 3次 ,随机挑取空斑进行PCR扩增 ,证实所获得的病毒为均一的无TK-/LacZ+ 突变株污染的TK缺失的重组病毒。分别以TK缺失株病毒与鄂A野毒株为模板对TK基因进行PCR扩增 ,扩增产物经酶切分析和测序后发现 :TK缺失重组病毒的TK基因缺失了 2 0 5个碱基 ,XhoI和SalI位点消失 ,SmaI酶切片段发生变化。两种病毒在PK - 15细胞上形成空斑的大小和增殖的滴度无明显的差别。进一步提取TK缺失突变株基因组DNA ,与含gG -LacZ的转移质粒pUSKZ通过磷酸钙法共转染PK - 15细胞 ,待完全病变后 ,在X - gal存在下筛选蓝斑 ,将挑取的蓝斑纯化 3次后 ,对纯化的重组病毒进行TK、LacZ扩增 ,结果既能扩增出较以鄂A野毒株为模板扩增的要小的TK基因片段 ,同时又能扩增出LacZ基因 ,证实所得到的重组病毒为TK-/ gG-/LacZ+ 突变株。此双缺失突变株的构? 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 鄂A野毒株 TK^-/LacZ^+突变株 TK缺失突变株 TK^-/gG^-/LacZ^+突变株
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2013年河南省猪伪狂犬野毒感染血清学调查 被引量：40
17
作者 解伟涛 乔松林 +5 位作者 王寅彪 郝慧芳 梁跃 张桂悦 郭成留 张改平 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第6期66-70,共5页
伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性... 伪狂犬病是一种严重威胁养猪业的重要传染病,2012年以来该病在河南省大面积流行,对养猪业造成了巨大影响。本研究利用g E-ELISA方法,对2013年来自河南省不同区域不同规模347个猪场的13 275份血清样本进行检测分析。结果显示血清样本阳性率31.3%,猪场阳性率83.6%。种猪群带毒率高,育肥阶段伪狂犬病毒感染情况尤其严重。但一些生产管理较好的规模化猪场通过采取强化免疫,不断补入阴性后备种猪,加强生物安全等综合措施,成功防控了伪狂犬疫情。本研究对于了解当前河南省伪狂犬疫情,制订正确的防控策略提供了依据。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 感染 血清学调查
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三种猪繁殖障碍性病毒混合感染的分子生物学调查 被引量：34
18
作者 许立华 王玲 +1 位作者 芦银华 陈溥言 《中国兽医科技》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期40-43,共4页
根据GenBank登录的PRRSVORF7、PCV 2ORF1基因及PRVTK基因的核苷酸序列设计合成引物 ,建立了分别用于检测PRRSV、PRV及PCV 2的RT PCR及PCR方法。应用该方法对 77份可疑病料进行了检测 ,以调查猪群中PCV 2与PRRSV和 (或 )PRV混合感染情况... 根据GenBank登录的PRRSVORF7、PCV 2ORF1基因及PRVTK基因的核苷酸序列设计合成引物 ,建立了分别用于检测PRRSV、PRV及PCV 2的RT PCR及PCR方法。应用该方法对 77份可疑病料进行了检测 ,以调查猪群中PCV 2与PRRSV和 (或 )PRV混合感染情况。结果表明 ,2 4份样品表现为PRRSV与PCV 2混合感染 ,占样品总数的 31.2 % ;17份样品检测为PRRSV与PRV混合感染 ;9份样品表现为PCV 2与PRV混合感染 ,占 11.7% ;另外 ,还有一定比例的三重感染 ,共 8个样品 ,占 10 .4 %。结果显示 ,猪群中PRRSV、PRV与PCV 展开更多
关键词 猪繁殖障碍 混合感染 猪生殖与呼吸综合征病毒 伪狂犬病病毒 猪圆环病毒
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伪狂犬病毒变异株(JS-2012)对仔猪的致病性研究 被引量：37
19
作者 童武 郑浩 +8 位作者 单同领 刘飞 梁超 李国新 姜一峰 于海 高飞 周艳君 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2014年第5期10-14,共5页
本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头... 本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组(每组5头猪)分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头猪做空白对照。接种病毒的仔猪在攻毒后24 h体温均开始升高,4 d后开始死亡,死亡率为100%。临床观察发现,滴鼻组仔猪发病死亡明显快于肌肉注射组。对病死猪进行剖解,均可见大脑血管扩张并出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片显示猪的脑蛛网膜下腔严重出血,其他各脏器也均有严重病理变化。结果表明该变异株JS-2012为伪狂犬强毒毒株。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 JS-2012 仔猪 致病性
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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5的重组伪狂犬病毒TK^-/gG^-/GP5^+的构建及其生物学特性初步探讨 被引量：26
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作者 方六荣 肖少波 +3 位作者 江云波 牛传双 张辉 陈焕春 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第3期249-254,共6页
以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK-/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+。经PCR、Southern杂交、Westernblot证实构建正确,并能表达GP5。同时,... 以伪狂犬病毒基因缺失标志疫苗株TK-/gG-/LacZ+为亲本株,通过同源重组,构建了表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)主要免疫原性蛋白GP5的重组伪狂犬病毒TK-/gG-/GP5+。经PCR、Southern杂交、Westernblot证实构建正确,并能表达GP5。同时,对重组病毒在PK-15细胞中的增殖特性进行了检测,结果与亲本株相比,增殖滴度无显著性差异。将重组病毒免疫BALB/c小鼠,2次免疫后4周,50%(3/6)小鼠产生了低水平的GP5特异性ELISA抗体,但中和抗体均小于1:4。 展开更多
关键词 伪狂犬病毒 猪繁殖与呼吸综合征 生物学特性 重组病毒 表达
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