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大口黑鲈肝脾肿大病病原研究 被引量：11
1
作者 马冬梅 邓国成 +3 位作者 白俊杰 李胜杰 江小燕 杨小静 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期654-660,共7页
为了查明2009年10月广东省佛山地区养殖大口黑鲈（Micropterus salmoides）中暴发的传染性疾病的病原，对病鱼的肝脏、脾脏和腹隔膜进行切片电镜观察，发现细胞质中有大量病毒颗粒，切面为六角形，直径约145～150nm，病毒为二十面体对... 为了查明2009年10月广东省佛山地区养殖大口黑鲈（Micropterus salmoides）中暴发的传染性疾病的病原，对病鱼的肝脏、脾脏和腹隔膜进行切片电镜观察，发现细胞质中有大量病毒颗粒，切面为六角形，直径约145～150nm，病毒为二十面体对称结构、无囊膜、似虹彩病毒的病毒粒子。用除菌的病鱼组织滤液感染健康大口黑鲈，被感染鱼死亡率达90％以上。根据已知虹彩病毒主要衣壳蛋白（MCP）基因序列设计特异引物，提取人工感染发病鱼的肝脏、脾脏、肾脏组织的DNA进行PCR扩增，将扩增片段进行序列测定与分析，结果表明该序列与已报道的鳜（Sinipercachua~0传染性脾肾坏死病毒（InfectiousSpleenandKidneyNecrosisVirus，ISKNV）MCP基因同源性为98％。电镜观察和MCP基因测序分析结果显示，该病毒的分类地位为虹彩病毒科（Iridoviridae）细胞肿大病毒属（Megalocytivirus）。 展开更多
关键词 大口黑鲈 病原 肝脾肿大病 传染性脾肾坏死病毒(isknv)
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鳜鱼传染性脾肾坏死病和弹状病毒病二联灭活疫苗毒种及种子批的研究 被引量：1
2
作者 罗霞 付小哲 +4 位作者 林强 刘礼辉 牛银杰 梁红茹 李宁求 《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第1期1-9,共9页
【目的】建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批。【方法】以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1~F10)后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对... 【目的】建立鳜鱼传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)和弹状病毒(SCRV)二联灭活疫苗毒种库及种子批。【方法】以ISKNV-QY0910株和SCRV-GM1503株为原始毒种,扩繁10代(F1~F10)后检测各代病毒对鳜鱼脑组织细胞系(CPB)的致病性及其滴度,并检测其对鳜鱼的毒力。PCR扩增ISKNV的主衣壳蛋白(MCP)基因、RT-PCR法扩增SCRV G蛋白基因序列,检测ISKNV和SCRV毒种的特异性。对F1、F5和F10代ISKNV、SCRV毒种进行细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒(RANA)和神经坏死病毒(NNV)检测,检验毒种的纯粹性。分别将F1、F5和F10代ISKNV、SCRV病毒液用甲醛灭活后制备灭活疫苗,免疫鳜鱼21 d后攻毒,连续观察14 d,待鱼体稳定后统计死亡率并计算免疫保护率(RPS)。将ISKNV和SCRV毒种湿毒保存于-80℃冰箱,每6个月取3支检测病毒滴度,以确定毒种的保存期。【结果】各代次毒株感染CPB细胞后产生的CPE形态及病变速度基本相同,SCRV滴度为10^(8.58)~10^(8.875) TCID_(50)/mL,ISKNV滴度为10^(7.38)~10^(7.625) TCID_(50)/mL。F1、F5和F10代ISKNV按10^(4) TCID_(50)/mL、SCRV按10^(6.5) TCID_(50)/mL对鳜鱼攻毒(每尾0.1 mL),致死率均超过90%。ISKNV和SCRV各代次毒种可分别扩增出1300 bp的MCP基因和1500 bp的G基因,特异性良好。ISKNV、SCRV毒种无细菌、霉菌、支原体及鳜鱼蛙病毒和神经坏死病毒污染。各代次病毒灭活疫苗对鳜鱼安全有效,免疫保护率ISKNV可达92%以上,SCRV可达84%以上;湿毒-80℃保存,保存期为36个月。【结论】10代以内ISKNV和SCRV的生物学特性稳定,可用于鳜鱼ISKNV和SCRV二联灭活疫苗的制备与检验。 展开更多
关键词 鳜鱼病毒病 传染性脾肾坏死病毒(isknv) 弹状病毒(SCRV) 毒种库 种子批 二联灭活疫苗
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传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF086基因的表达·纯化及其抗体的制备
3
作者 彭媛媛 付小哲 +3 位作者 石存斌 余露军 李宁求 吴淑勤 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2009年第11期4920-4922,共3页
[目的]构建传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF086基因的融合表达载体,制备抗体为进一步研究ORF086蛋白的免疫保护性提供前提条件。[方法]PCR扩增目的基因,构建重组质粒,经酶切鉴定,PCR和核酸序列分析后,IPTG诱导表达,Ni-柱纯化,注射新西兰... [目的]构建传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)ORF086基因的融合表达载体,制备抗体为进一步研究ORF086蛋白的免疫保护性提供前提条件。[方法]PCR扩增目的基因,构建重组质粒,经酶切鉴定,PCR和核酸序列分析后,IPTG诱导表达,Ni-柱纯化,注射新西兰白兔获得抗血清。[结果]扩增出ORF086基因,成功构建了重组质粒pET32a-ORF086,SDS-PAGE电泳和Western-blot分析显示,获得一条36.0 kD的融合蛋白。[结论]成功构建了原核表达载体,融合蛋白主要以包涵体的形式存在,经柱层析纯化蛋白,纯度达90%以上。 展开更多
关键词 传染性脾肾坏死病毒(isknv) 表达 纯化 抗体
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