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伏马毒素B1对猪体外成熟卵母细胞凋亡与自噬的影响
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作者 李文慧 贺依静 +5 位作者 姜瑶 赵红宇 彭磊 李佳 芮荣 剧世强 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期1241-1252,共12页
【目的】探究伏马毒素 B_(1)(fumonisin B_(1),FB_(1))对猪卵母细胞体外成熟的影响及其潜在的作用机制, 为临床有效防治FB_(1)所致的生殖毒性损伤提供理论参考。【方法】采集猪卵丘-卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs)进... 【目的】探究伏马毒素 B_(1)(fumonisin B_(1),FB_(1))对猪卵母细胞体外成熟的影响及其潜在的作用机制, 为临床有效防治FB_(1)所致的生殖毒性损伤提供理论参考。【方法】采集猪卵丘-卵母细胞复合体(cumulus oocyte complexes, COCs)进行随机分组,在体外成熟培养过程中分别用不同浓度 FB_(1)(0、10、20 和 30 μg·mL^(-1))处理 44 h 后,统计卵母细胞第一极体(first polar body, PB1)排出和激活后胚胎发育情况;通过免疫荧光染色结合共聚焦显微镜技术进一步检测 FB_(1)对卵母细胞减数分裂进程和细胞骨架结构的影响;为进一步探究 FB_(1)对猪卵母细胞毒性损伤的作用机制,分别采用 JC-1、Annexin V-FITC和 LC3A/B 荧光染色检测各组卵母细胞内线粒体功能、早期凋亡和自噬水平,并在此基础上,进一步通过 Western blotting分析了凋亡/自噬相关蛋白的表达情况。【结果】FB_(1)处理对卵母细胞成熟具有明显的抑制作用,PB1 排出率呈浓度依赖性下降,当 FB_(1)浓度达到 20 μg·mL^(-1)以上时,PB1 排出率显著降低(P<0.01),并使卵母细胞孤雌激活后胚胎的卵裂率及囊胚率均显著降低(P<0.01),对卵母细胞的发育潜力有一定的损伤作用。细胞周期分析结果表明,FB_(1)处理还会导致减数分裂周期进程紊乱,使阻滞在生发泡破裂期(germinal vesicle breakdown,GVBD)的卵母细胞比例显著升高(P<0.01)成功发育至第二次减数分裂中期(metaphase II,MII)细胞比例明显下降(P<0.01),同时,卵母细胞中纺锤体异常的比例显著升高(P<0.01)、胞膜上的微丝分布显著减少(P<0.05)。进一步的研究结果表明,与对照组相比,FB_(1)处理组卵母细胞线粒体膜电位明显降低(P<0.05),线粒体功能受损,同时,FB_(1)处理组卵母细胞早期凋亡率显著增加(P<0.01),细胞自噬水平也显著升高(P<0.01)。Western blotting 分析结果显示,FB_(1)处理组卵母细胞中促凋亡蛋白 BAX 和自噬蛋白 LC3A/B II的� 展开更多
关键词 猪卵母细胞 伏马毒素b_(1)细胞骨架 凋亡 自噬
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