基于戊二醛的氨基微球上DNA编码和抗体蛋白固定

1

作者 王媛媛 侯彩玲 王志民 《上海交通大学学报（农业科学版）》 2018年第5期1-6,13,共7页

用戊二醛和EDC/sulfo-NHS分别活化表面修饰了氨基和羧基的微球,在2种微球上分别固定相等摩尔浓度的氨基标记的发卡DNA和未经修饰的人TNF α捕获抗体,结果表明戊二醛的交联效果优于EDC/sulfo-NHS。从而选择戊二醛为交联剂将Cy3标记的发卡... 用戊二醛和EDC/sulfo-NHS分别活化表面修饰了氨基和羧基的微球,在2种微球上分别固定相等摩尔浓度的氨基标记的发卡DNA和未经修饰的人TNF α捕获抗体,结果表明戊二醛的交联效果优于EDC/sulfo-NHS。从而选择戊二醛为交联剂将Cy3标记的发卡DNA和未经修饰的藻红蛋白(RPE)分别固定到微米球表面并进行了荧光观察,再通过调整蛋白和DNA的比例将FAM标记的发卡DNA和RPE同时固定到微米球上并观察荧光,为实现用DNA序列编码的微米球上多种生物标志物酶联免疫吸附检测奠定了基础。用RPE为荧光标记物采用双抗体夹心法在微球上进行荧光免疫反应,为商品化诊断试剂的研究提供一定的参考。 展开更多

关键词 戊二醛 EDC/sulfo-NHS 发卡DNA 人tnf α 藻红蛋白

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用一种新型的PCR方法快速制备人TNF-α缺失突变体 被引量：5

2

作者 张巍 沈倍奋 +2 位作者 黎燕 郭宁 冯健男 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期600-604,共5页

人肿瘤坏死因子 α(hTNF α)的 2个Loop区 2 9～ 36、141～ 146是受体的主要结合部位 .应用一种新型的PCR方法 ,快速制备了这 2个Loop区的缺失突变体 ,并对其活性进行了研究 .结果表明 :这种新型的PCR方法在制备缺失突变体中具有快速... 人肿瘤坏死因子 α(hTNF α)的 2个Loop区 2 9～ 36、141～ 146是受体的主要结合部位 .应用一种新型的PCR方法 ,快速制备了这 2个Loop区的缺失突变体 ,并对其活性进行了研究 .结果表明 :这种新型的PCR方法在制备缺失突变体中具有快速、简便、经济等优点 ,值得推广 ;缺失蛋白对L92 9细胞的毒性作用明显降低 ,表明这 2个区域为hTNF 展开更多

关键词 PCR方法 快速制备 人tnf-α缺失突变体

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抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证 被引量：4

3

作者 桂芳 杨兰兰 +2 位作者 潘勇兵 张雅婷 张银川 《药物分析杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期51-63,共13页

目的:建立液相色谱-质谱联用肽图分析方法用于抗人肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)单抗的专属性鉴别。方法:TNF-α单抗样品经盐酸胍变性、还原,释放出的游离半胱氨酸残基进行烷化,还原剂中和过量的烷化剂。超滤置... 目的:建立液相色谱-质谱联用肽图分析方法用于抗人肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)单抗的专属性鉴别。方法:TNF-α单抗样品经盐酸胍变性、还原,释放出的游离半胱氨酸残基进行烷化,还原剂中和过量的烷化剂。超滤置换酶切缓冲液后进行胰酶酶切并终止。色谱条件:采用Waters UPLC BEH 300 C_(18)(2.1 mm×150mm,1.7μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱(5-120 min,2%B→45%B),流速为0.2 mL·min^(-1),检测波长为214 nm;质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子模式,数据采集范围m/z为100~1990。结果:TNF-α单抗重链及轻链的6个互补决定区(CDR)对应肽段由质谱鉴定出,HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中共流出;利妥昔单抗用于评估本方法的专属性,结果显示本方法专属性强,且不受基质的干扰;选定m/z 1 344(M^(+5))的色谱峰为参考峰,根据CDR的相对保留时间考察该方法的变异程度,5次重复测定CDR相对保留时间的RSD在0.57%~1.19%之间;中间精密度考察测定的相对保留时间的RSD在0.00%~1.08%之间;胰酶酶切比例在20:1~30:1,酶切时间在17~23h范围内变化时,相对保留时间的均较小,符合方法耐用性的要求;样品消化后在8℃储存24h以及-20℃储存5d的稳定性良好。结论:基于CDR相关肽段鉴别的液质联用肽图分析方法可定性鉴定出TNF-α单抗,方法学验证结果显示该方法适用于抗人TNF-α单抗的专属性鉴别,可用于其质量控制及批检验放行。 展开更多

关键词 单克隆抗体 肿瘤坏死因子α(tnf-α) 抗人tnf-α单抗 液质联用 肽图分析 互补决定区(CDR) 鉴别试验 方法学验证

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抗人TNF-α单抗基因的克隆及鉴定 被引量：3

4

作者 骆训懿 王琰 +1 位作者 王欲晓 王卓智 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期166-168,共3页

目的克隆抗人ＴＮＦ－α鼠单抗得可变区基因以构建人－鼠嵌合抗体表达载体。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，以前导肽序列的引物从１个分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因（Ｖκ，ＶＨ），在大肠杆菌中... 目的克隆抗人ＴＮＦ－α鼠单抗得可变区基因以构建人－鼠嵌合抗体表达载体。方法采用ＲＴ－ＰＣＲ技术，以前导肽序列的引物从１个分泌抗人ＴＮＦ－α的鼠单抗杂交瘤细胞系中克隆抗体轻链、重链可变区基因（Ｖκ，ＶＨ），在大肠杆菌中表达Ｆａｂ段核实其功能活性。结果分别得到了２个Ｖκ和２个ＶＨ基因。ＤＮＡ序列测定表明，其中１个轻链可变区基因为骨髓瘤细胞系中固有的无功能基因。１个重链可变区基因经原核系统表达测活表明无抗体活性。另一个轻链和重链可变区基因的成熟蛋白编码部分与从第一骨架区引物所克隆的、可在大肠杆菌表达出抗体活性的Ｖκ、ＶＨ序列相符。将该轻链、重链基因分别克隆到了人－鼠嵌合轻链、重链表达载体中。结论通过原核表达系统核实。 展开更多

关键词 人tnf-Α 基因 单克隆抗体 鉴定

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抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用 被引量：1

5

作者 陈萍 邓健蓓 +2 位作者 韩骅 药立波 苏成芝 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第4期430-433,共4页

为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检... 为了在大肠杆菌中表达纯化抗人 TNF- α单链抗体并检测其结合活性与中和活性 .利用GST融合蛋白系统在大肠杆菌中表达抗人 TNF- α单链抗体 E6Sc Fv;分离包含体后进行变性和复性 ,再用亲和层析法进行纯化 ;用 ELISA法和酵母双杂交系统检测 E6Sc Fv与配体的结合 ;用 L92 9细胞检测 E6Sc Fv对人 TNF- α细胞毒作用的中和活性 .经变性 ,复性与亲和层析 ,E6Sc Fv被纯化 ,在 SDS- PAGE上为单一蛋白带 ;体外结合与中和实验表明 ,表达纯化的 E6Sc Fv可与人 TNF-α结合并中和其细胞毒活性 ;进一步用酵母双杂交系统证明当表达于细胞内时 ,E6Sc Fv仍保持了与TNF-α相结合的能力 . 展开更多

关键词 人tnf-Α 单链抗体 酵母双杂交 E6ScFV 胞内抗体

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小鼠抗人TNF-α Fab基因的定点突变及其在大肠杆菌中的表达 被引量：1

6

作者 张巍 沈倍奋 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期338-340,共3页

目的 :对小鼠抗人TNF αFab基因进行人源化改造 ,并获得人源化Fab段的可溶性表达产物。方法 :应用一步反向PCR法 ,分别对小鼠VH、VL 基因进行定点突变。将突变基因克隆入载体pComb3H并诱导表达。结果 :成功地将鼠抗VH88位Ser突变为Ala ,... 目的 :对小鼠抗人TNF αFab基因进行人源化改造 ,并获得人源化Fab段的可溶性表达产物。方法 :应用一步反向PCR法 ,分别对小鼠VH、VL 基因进行定点突变。将突变基因克隆入载体pComb3H并诱导表达。结果 :成功地将鼠抗VH88位Ser突变为Ala ,VL17位Glu和 18位Lys分别突变为Asp和Arg。成功地构建了人源化Fab的可溶性表达质粒 ,并用Western blot检测到其在上清液中有表达。结论 :得到人源化Fab的可溶性表达产物 。 展开更多

关键词 人tnf—α 单克隆抗体 定点突变 基因表达

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依那西普治疗斑块状银屑病随机对照试验的系统评价 被引量：1

7

作者 陈声利 闫军 +2 位作者 刘毅 徐秀莲 孙建方 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期180-181,共2页

近年开发的生物制剂依那西普（Etanercept）是一种重组人TNF-α与IgG Fc段形成的融合蛋白，通过竞争性抑制TNF-α与细胞表面受体的结合而拮抗内源性TNF-α的作用。2004年美国FDA批准依那西普用于治疗成人中、重度斑块状银屑病。本文对... 近年开发的生物制剂依那西普（Etanercept）是一种重组人TNF-α与IgG Fc段形成的融合蛋白，通过竞争性抑制TNF-α与细胞表面受体的结合而拮抗内源性TNF-α的作用。2004年美国FDA批准依那西普用于治疗成人中、重度斑块状银屑病。本文对依那西普治疗斑块状银屑病的疗效和不良作用进行了系统评价，以期为临床医生和卫生决策者提供更多可靠信息。 展开更多

关键词 斑块状银屑病 依那西普 随机对照试验 治疗 系统 重组人tnf-α 内源性tnf-α 细胞表面受体

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噬菌体展示技术构建重组人TNF-α单链抗体库 被引量：2

8

作者 柴蔚然 杨涛 +1 位作者 胡晓年 牛勃 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期155-158,共4页

目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L in... 目的应用噬菌体展示技术构建抗重组人肿瘤坏死因子-α(rhTNF-α)的单链抗体库。方法利用噬菌体表面展示技术、绕过杂交瘤技术,提取经免疫BALB/c小鼠淋巴细胞总RNA,用相应引物扩增小鼠免疫球蛋白VH基因和VL基因,构建VH、VL抗体库。由L inker-prim erm ix经重叠延伸反应将重链可变区基因与轻链可变区基因拼接成单链抗体。再用RS prim erm ix以单链抗体为模板进行第二次聚合酶链反应,从而获得全套抗rhTNF-α的单链抗体基因。以SfiⅠ/NotⅠ,位点定向插入pCANTAB-5E噬菌粒载体,转化大肠杆菌TG1后,经M13KO7辅助噬菌体拯救,构建成全套抗rhTNF-α单链抗体表面展示文库。结果成功构建了rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库。经M13KO7超感染后,噬斑计数滴度为2.1×1011pfu。结论rhTNF-α全套单链抗体噬菌体表面展示文库的构建,为研究rhTNF-α抗体结合位点,了解其结构与功能的关系以及研究用于临床免疫治疗的新型抗体打下了基础。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子-Α 单链抗体 噬菌体展示技术 重组人tnf-α单链抗体库

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抗人TNF-α单克隆抗体对银屑病患者血清TNF-α的中和研究

9

作者 冯峥 王建平 +2 位作者 葛萍 李恒进 黎燕 《军医进修学院学报》 CAS 北大核心 2005年第3期225-227,共3页

目的:研究抗人TNF-α单克隆抗体对寻常型银屑病患者血清TNF-α的中和效应。方法:应用双抗体夹心ELISA方法检测正常人及患者血清应用单克隆抗体中和前后TNF-α的浓度改变。应用L929细胞检测正常人和患者血清抗体中和前后的生物学活性变... 目的:研究抗人TNF-α单克隆抗体对寻常型银屑病患者血清TNF-α的中和效应。方法:应用双抗体夹心ELISA方法检测正常人及患者血清应用单克隆抗体中和前后TNF-α的浓度改变。应用L929细胞检测正常人和患者血清抗体中和前后的生物学活性变化情况。结果:正常人与银屑病患者血清TNF-α的浓度分别为:(3.146±6.184)pg/ml及(62.723±38.379)pg/ml;其生物学活性分别为:(6.817±5.086)%及(57.498±9.125)%。抗体中和后患者血清TNF-α的浓度为:(0.503±1.178)pg/ml;中和后的生物学活性为:(25.378±14.863)%。结论:寻常型银屑病患者血清中TNF-α的浓度及生物学活性均高于正常对照,而抗人TNF-α单克隆抗体在体外可以很好地中和患者血清中TNFα的浓度及其生物学活性。 展开更多

关键词 肿瘤坏死因子 抗人tnf-α 单克隆抗体 中和试验 银屑病 血清tnf-Α 血清抗体

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注射用人源化抗人TNF-α单克隆抗体在中国健康成年志愿者中抗药性抗体的产生对其药代动力学行为的影响

10

作者 张坦 祖丽安 +14 位作者 谢新遥 韩敏 王茜 吴全睿 习娜娜 臧彦楠 陈适 王梅 汪进 陶涛 廖庆平 郑青山 栗占国 宋海峰 方翼 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期385-388,共4页

目的研究人源化抗人TNF-α单克隆抗体在中国健康成年志愿者中单次皮下注射后,产生的抗药性抗体(ADA)对其药代动力学的影响。方法 60例健康志愿者分为6个递增剂量组,每组依次单次腹部皮下注射人源化抗人TNF-α单克隆抗体5,15,30,50,75或1... 目的研究人源化抗人TNF-α单克隆抗体在中国健康成年志愿者中单次皮下注射后,产生的抗药性抗体(ADA)对其药代动力学的影响。方法 60例健康志愿者分为6个递增剂量组,每组依次单次腹部皮下注射人源化抗人TNF-α单克隆抗体5,15,30,50,75或100 mg,测定给药前、给药后第4,12,24,36,48,60,72,96,120,144,168,216,264,312,360,408,456,504,576和672 h的血药浓度,以及给药前、给药后168、360、504和672 h的ADA。结果 5～100 mg剂量组ADA阳性率分别为100%,100%,100%,80%,90%和70%,总体阳性率高达90%。检出ADA后,ADA+者的血药浓度迅速下降,其平均血药浓度均低于ADA-者,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。ADA+者半衰期(t_(1/2))显著低于ADA-者,75～100 mg组ADA+者的清除率(CL)高于ADA-者。结论注射用人源化抗人TNF-α单克隆抗体的ADA阳性率较高,血药浓度、t_(1/2)的降低,CL的升高可能与ADA的产生有关。 展开更多

关键词 人源化抗人tnf-α单克隆抗体 抗药性抗体 药代动力学

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rhTNF-α对TB-LCL趋化作用的研究

11

作者 闵密克 马超武 +2 位作者 徐建中 孙浩 金伯泉 《临床军医杂志》 CAS 2006年第1期4-7,共4页

目的研究重组人TNF-α(recomb inant hum an tumor necrosis factor-,αrhTNF-α)对扁桃体B原淋巴细胞(tonsil B lymphob lastoid cellline,TB-LCL)的趋化作用,建立一个模型以研究细胞因子与B细胞相互间的作用。方法用EB病毒(Epste in-B... 目的研究重组人TNF-α(recomb inant hum an tumor necrosis factor-,αrhTNF-α)对扁桃体B原淋巴细胞(tonsil B lymphob lastoid cellline,TB-LCL)的趋化作用,建立一个模型以研究细胞因子与B细胞相互间的作用。方法用EB病毒(Epste in-Bar virus,EBV)转化扁桃体B细胞建立TB-LCL系,以小室法研究rhTNF-α)对TB-LCL的趋化作用。结果rhTNF-α对TB-LCL有明显趋化作用,并呈剂量依赖关系。这种作用能为抗TNF-α的单抗E6所阻断。结论以上为研究细胞与细胞因子间的相互作用提供了有用而简便的模型。 展开更多

关键词 重组人tnf-α 扁桃体B原淋巴细胞 趋化

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生物制剂治疗强直性脊柱炎的近期疗效与安全性研究进展 被引量：7

12

作者 孟岩 魏丽 《医药导报》 CAS 2010年第4期501-504,共4页

目前,临床上治疗强直性脊柱炎(AS)的方法主要为使用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物拮抗药治疗,且取得较好的疗效,但该类药物均有一定的不良反应。近年来,国内外治疗AS的生物制剂主要有TNF-α单克隆抗体(英夫利昔单抗,infliximab)和重组人... 目前,临床上治疗强直性脊柱炎(AS)的方法主要为使用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)生物拮抗药治疗,且取得较好的疗效,但该类药物均有一定的不良反应。近年来,国内外治疗AS的生物制剂主要有TNF-α单克隆抗体(英夫利昔单抗,infliximab)和重组人Ⅱ型TNF受体-抗体融合蛋白(rhTNFR:Fc),对它们的使用剂量、近期疗效、安全性进行评价。 展开更多

关键词 英夫利昔单抗 重组人Ⅱ型tnf受体-抗体融合蛋白 tnf-α生物拮抗药 脊柱炎 强直性

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重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质残留夹心ELISA检测方法的建立及验证 被引量：3

13

作者 邓春平 梅雄 +2 位作者 陈航 何水华 刘翠华 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2020年第8期925-928,933,共5页

目的建立检测重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)残留的夹心ELISA法,并进行验证。方法采用二维电泳-Western blot(2D-Western blot)法筛选兔抗CHO HCP多克隆抗体(产品号:AB000103-A、AB000103-C)及羊抗CH... 目的建立检测重组人抗TNFα单抗制品中CHO宿主细胞蛋白质(host cell protein,HCP)残留的夹心ELISA法,并进行验证。方法采用二维电泳-Western blot(2D-Western blot)法筛选兔抗CHO HCP多克隆抗体(产品号:AB000103-A、AB000103-C)及羊抗CHO HCP多克隆抗体(批号:3G-0016-PA)中识别重组人抗TNFα单抗特异性CHO HCP覆盖率最高的一种作为检测抗体,建立检测样品中残余HCP的夹心ELISA法,并验证方法的线性、基质干扰、稀释线性、灵敏度、精密度及准确性。结果以覆盖率达57%的AB000103-C号兔抗CHO HCP多克隆抗体作为检测抗体;样品基质干扰HCP检测,样品需稀释6倍;HCP标准品浓度在3.33~810 ng/mL范围与A450值曲线拟合良好,R2=1,试验内及试验间精密性验证的CV均小于12%,检测限及定量限分别为2.4和20 ng/mL;20、150及300 ng/mL的加标样品回收率分别为99.5%、97.1%及100.3%。结论成功建立了重组人抗TNFα单抗HCP残留的夹心ELISA检测方法,该方法灵敏度高,准确性、精密性及线性良好,适用于重组人抗TNFα单抗制品的残留HCP检测。 展开更多

关键词 重组人抗tnfα单抗 CHO细胞 宿主细胞蛋白质 酶联免疫吸附测定

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人可溶性TNF受体(sTNFRI)在大肠杆菌中的表达及其活性鉴定 被引量：1

14

作者 叶飞 李卓娅 +5 位作者 尹丙姣 龚非力 姜晓丹 冯玮 徐勇 熊平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第11期743-746,共4页

目的 :构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :用RT PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段 ,将其插入到表达载体pET 2 8a ,并转入大肠杆菌进行表达。结果 :在IPTG诱导下 ,转入外源基因的大肠杆菌BL 2 ... 目的 :构建人可溶性TNF受体I(sTNFRI)基因表达载体 ,并在大肠杆菌中高效表达。方法 :用RT PCR扩增编码人TNFRI胞外段基因片段 ,将其插入到表达载体pET 2 8a ,并转入大肠杆菌进行表达。结果 :在IPTG诱导下 ,转入外源基因的大肠杆菌BL 2 1可高效表达sTNFRI蛋白 ,SDS PAGE显示在 2 7kD处有一特异表达条带 ,其表达量占菌体蛋白总量的 31%。纯化的sTNFRI可有效封闭TNF对L92 9细胞的胞毒效应 ;间接免疫荧光显示它可特异性抑制TNF与靶细胞TNFR的结合。结论 :通过基因工程技术获得了人sTNFRI重组蛋白。 展开更多

关键词 人可溶性tnf受体 大肠杆菌 表达 活性鉴定 胞毒效应

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信号转导抑制剂对TNFβ诱导L929细胞凋亡的研究 被引量：1

15

作者 李芳芳 杨帆 +4 位作者 周晴 马志章 丁仁瑞 邱莲女 周永列 《浙江大学学报（理学版）》 CAS CSCD 2001年第2期189-195,共7页

本文采用 FDA- PI荧光染色 ,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验室自行重组并纯化的人 TNFβ对 L92 9细胞的细胞毒效应 ,结果表明 TNFβ主要是诱导 L92 9细胞以凋亡的形式死亡 .实验还采用 8种信号转导抑制剂 ,观察它们对 TNF... 本文采用 FDA- PI荧光染色 ,DNA电泳和流式细胞仪等实验手段研究了本实验室自行重组并纯化的人 TNFβ对 L92 9细胞的细胞毒效应 ,结果表明 TNFβ主要是诱导 L92 9细胞以凋亡的形式死亡 .实验还采用 8种信号转导抑制剂 ,观察它们对 TNFβ杀伤 L92 9细胞的影响 ,以探讨细胞凋亡的信号转导途径 .初步研究表明 :磷脂酶 A2 ,Ca2 + 通道、丝氨酸蛋白酶的抑制剂能抑制 TNFβ对 L92 9细胞的杀伤 ,而且抑制剂的持续存在能更有效地发挥这一抑制作用 ;相反地 ,蛋白激酶 C和酪氨酸蛋白激酶的抑制剂可促进凋亡 ;而环加氧酶、磷脂酰肌醇 - 展开更多

关键词 人重组tnfβ 信号转导抑制剂 信号转导 L929细胞 细胞凋亡 细胞毒效应 抑制率 杀伤率

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rhTNFR:Fc对兔正畸微种植体周围炎模型炎症反应的抑制作用研究 被引量：1

16

作者 郑胜 黄海蓉 +2 位作者 郑园娜 卢海平 谷志远 《浙江中医药大学学报》 CAS 2015年第3期212-216,共5页

[目的]评价注射用重组人Ⅱ型TNF受体-抗体融合蛋白(tumour necrosis factor FC fusion protein,rh TNFR:Fc)(商品名:益赛普)在兔正畸微种植体周围炎模型的作用。[方法]选用新西兰兔12只,随机分为模型对照组和治疗组。分别在兔下颌无牙... [目的]评价注射用重组人Ⅱ型TNF受体-抗体融合蛋白(tumour necrosis factor FC fusion protein,rh TNFR:Fc)(商品名:益赛普)在兔正畸微种植体周围炎模型的作用。[方法]选用新西兰兔12只,随机分为模型对照组和治疗组。分别在兔下颌无牙区植入正畸微种植体,采用钢丝结扎法建立实验性微种植体周围炎模型,结扎56d,治疗组给予rh TNFR:Fc,剂量1.1mg mg/(kg·d)1周,模型对照组给予等量生理盐水,两组在造模后第14、56、63d检测改良菌斑指数(m PLI)、改良龈沟出血指数(m BI)和种植体周探诊深度(PD);造模后63d取种植体周围牙龈行组织病理学检查,常规HE、免疫组化染色,观察炎性细胞浸润及TNF-α分布情况。[结果]造模后63d,治疗组m PLI、m BI、PD较模型对照组均明显下降(P<0.05)。组织病理学检查显示:造模后63d治疗组牙龈组织内炎症细胞浸润、TNF-α均较模型对照组减少(P<0.05)。[结论]rh TNFR:Fc可影响微种植体周围炎炎症反应过程。 展开更多

关键词 rhtnfR FC 重组人Ⅱ型tnf受体-抗体融合蛋白 微种植体 微种植体周围炎 tnf—α

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重组人Ⅱ型TNF受体-抗体融合蛋白对强直性脊柱炎患者外周血趋化因子受体CXCR4的表达调控作用 被引量：2

17

作者 饶咏梅 祖蓓蓓 +2 位作者 李美荣 王向党 王美美 《临床和实验医学杂志》 2008年第11期55-56,共2页

目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者T淋巴细胞上趋化因子受体4(CXCR4)表达情况及重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子(TNF)受体-抗体融合蛋白(益赛普)对CXCR4在AS中的表达调控作用及其临床意义。方法用流式细胞术分别检测正常对照组、益赛普治疗组,来氟... 目的探讨强直性脊柱炎(AS)患者T淋巴细胞上趋化因子受体4(CXCR4)表达情况及重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子(TNF)受体-抗体融合蛋白(益赛普)对CXCR4在AS中的表达调控作用及其临床意义。方法用流式细胞术分别检测正常对照组、益赛普治疗组,来氟米特和柳氮磺吡啶联合治疗组治疗前后CXCR4表达情况及ESR、CRP表达情况和AS患者疾病活动指数(BASDAI)评分,并对各组结果进行统计学分析。结果AS患者外周血的CD3+CXCR4+表达显著高于正常对照组,益赛普能较来氟米特和柳氮磺吡啶显著地抑制CXCR4表达、降低BASDAI评分,同时也能有效地降低红细胞沉降率(ESR)、C-反应蛋白(CRP)炎症活动性指标,有效地缓解和改善AS病情。结论益赛普不仅能抑制了TNF-TNFR相互作用,同时其可能也通过细胞因子间相互作用抑制T淋巴细胞表达CXCR4,进而抑制CXCR4趋化T淋巴细胞进入关节腔,更有效地改善AS患者病情。 展开更多

关键词 强直性脊柱炎 CXCR4 重组人Ⅱ型tnf受体-抗体融合蛋白

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人可溶性sTNFR1及胞膜外区Ig融合基因重组腺病毒的真核表达及功能活性鉴定

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作者 马佳佳 Nick Lu 陈必良 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第8期1098-1103,共6页

目的构建携带人sTNFR1与IgGFc片段融合基因的重组腺病毒,稳定表达并初步鉴定其功能活性在妊娠哮喘炎症机制中的作用。方法将PCR扩增的sTNFR1及IgGFc基因片段先后连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV多克隆位点上,酶切线性化后在BJ5183细菌内与... 目的构建携带人sTNFR1与IgGFc片段融合基因的重组腺病毒,稳定表达并初步鉴定其功能活性在妊娠哮喘炎症机制中的作用。方法将PCR扩增的sTNFR1及IgGFc基因片段先后连接到穿梭质粒pAdTrack-CMV多克隆位点上,酶切线性化后在BJ5183细菌内与骨架质粒pAdEasy-1同源重组,产生获得的AdE-EGFP-sTNFR1-Ig以脂质体法转染AD293细胞进行病毒包装,以绿色荧光蛋白(GFP)监测病毒滴度及感染效率。RT-PCR、Western blot实验鉴定细胞内重组腺病毒转录及融合基因与蛋白表达;流式细胞术、ELISA实验分析混合培养上清中转染肥大细胞(MC)激活、调节同基因来源T细胞表达Th2/Treg水平及细胞因子分泌效果;MTT评估转染细胞上清中sTNFR1-Ig对TNF-α介导细胞毒效应的拮抗作用。结果成功构建编码sTNFR1-Ig基因的重组腺病毒载体经酶切和测序鉴定正确,制备的腺病毒在转染细胞中的GFP表达以及CPE效应明显,扩增后的滴度为3.7×1010～4.8×1010pfu/ml,体外感染效率可达90%以上;sTNFR1-Ig基因在mRNA及蛋白水平获得的清晰条带均证实腺病毒包装与扩增成功。表达sTNFR1-Ig的MC诱导T细胞转化为CD4+CD25+Foxp3+T细胞水平以及IL-12含量均明显升高,CD4+IL-4+Th2细胞水平下调(P<0.05),Th2/Treg所占CD4+T细胞比值下降(P<0.05)。sTNFR1-Ig封闭TNF-α对MC免疫毒性作用的浓度效应明显,而EGFP-MCs与对照细胞上清对TNF-α毒性效应的中和阻断能力不足(P<0.05)。结论携sTNFR1-Ig基因重组腺病毒参与的免疫调控与妊娠期哮喘发生发展密切相关。sTNFR1及IgG-Fc亚基胞膜外区结合的表达和引起免疫耐受的作用研究,为妊娠哮喘发病机制在理论上的新突破,为以sTNFRI-Ig为靶点的妊娠哮喘干预治疗奠定基础。 展开更多

关键词 人可溶性tnf受体1 免疫球蛋白G 哮喘 妊娠 腺病毒 真核表达

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一项针对重度持续性哮喘患者使用TNF-α阻断剂的随机双盲安慰剂对照研究

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作者 张静（摘译） 《中华医学信息导报》 2009年第10期10-10,共1页

戈利木单抗（golimumab）是针对人TNF-α的单克隆抗体，其在重症哮喘中的治疗价值尚不明确。为了评价golimumab对于重度持续性哮喘患者的安全性及有效性，美国匹兹堡大学的Wenzel SE等人对此进行了研究，

关键词 人tnf-Α 哮喘患者 持续性 安慰剂对照 随机双盲 阻断剂 项针 单克隆抗体

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TNF-α、IL-6基因多态性在HCV相关肝病中的分布特征

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作者 邢培祥 王传新 +2 位作者 王立水 王洪春 邢全台 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期217-217,共1页

本研究对中国汉族人TNF-α、IL-6血清水平及其基因单核苷酸多态性（SNP）与HCV相关肝病的关系进行了探讨。

关键词 人tnf-Α 基因多态性 IL-6 HCV 肝病 单核苷酸多态性 中国汉族 血清水平

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