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题名人PGK1基因真核表达载体的构建及其功能检测
被引量：1
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作者
王圣尧
罗沙柳
叶棋浓
刘婕
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机构
军事科学院军事医学研究院生物工程研究所
延边大学医学院
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出处
《军事医学》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第7期507-511,共5页
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基金
国家自然科学基金资助项目(81330053)
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文摘
目的构建带FLAG标签的人癌基因磷酸甘油酸激酶1(phosphoglycerate kinase1,PGK1)的真核表达载体,并验证其表达产物的生物学功能。方法采用PCR技术从人乳腺文库中扩增人PGK1基因,并将其克隆到真核载体pc DNA3. 0-FLAG上,酶切鉴定和测序鉴定后,通过Western印迹检测其表达;将FLAG-PGK1载体转染乳腺癌细胞ZR75-1,利用乳酸试剂盒测定乳腺癌细胞外乳酸含量,并通过CCK8法和划痕实验测定乳腺癌细胞的生长和迁移。结果从乳腺文库中,PCR扩增出约1260 bp DNA片段,克隆到pc DNA3. 0-FLAG载体上,测序结果与目的序列一致。Western印迹检测到目的基因表达,且位置正确。乳酸含量测定结果显示,PGK1可促进细胞乳酸含量增加;细胞生长曲线结果显示,转染FLAG-PGK1的乳腺癌细胞生长较空载体生长快;细胞划痕实验表明PGK1促进细胞迁移。结论成功构建了FLAG-PGK1的真核表达载体,其表达促进了乳腺癌细胞生长和迁移,同时也促进了乳酸的增加,为进一步研究PGK1在肿瘤发生发展中的作用奠定了基础。
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关键词
人pgk1基因
克隆
真核表达
乳腺癌细胞
磷酸甘油酸激酶
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Keywords
human pgk1
cloning
eukaryotic expression
breast cancer cells
phosphoglycerate kinase
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分类号
R730.23
[医药卫生—肿瘤]
R737.9
[医药卫生—临床医学]
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