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带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
李娜
邸大琳
+2 位作者
肖伟玲
付晓燕
梁淑娟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期493-496,共4页
目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRE...
目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体。利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平。结果构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致。利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β。结论构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体。
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关键词
慢病毒
人
il
-1
β
HEPG2细胞
经典和非经典分泌途径
下载PDF
职称材料
猪源医用胶原修复膜热原检测方法适用性研究
2
作者
邵安良
刘露丝
+2 位作者
张乐
陈亮
徐丽明
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期2082-2087,共6页
目的:探讨家兔法与人全血IL-1βELISA法检测猪源医用胶原修复膜热原的适用性。方法:参考GB/T 16886.12-2017的规定,制备猪源医用胶原修复膜浸提液,离心过滤后获取供试液。参照《中华人民共和国药典》(2015年版)家兔法进行供试液热原限...
目的:探讨家兔法与人全血IL-1βELISA法检测猪源医用胶原修复膜热原的适用性。方法:参考GB/T 16886.12-2017的规定,制备猪源医用胶原修复膜浸提液,离心过滤后获取供试液。参照《中华人民共和国药典》(2015年版)家兔法进行供试液热原限度是否符合规定的评价。参照YY/T 1500-2016的方法检测供试液的热原含量(相对内毒素含量)。结果:家兔法检测结果表明,经静脉给入供试液后的3只家兔体温升高分别为1.4、1.1与0.8℃,供试品的热原检查结果不符合规定。人全血IL-1βELISA法结果表明,供试品的相对内毒素当量为(1.92±0.22)EU·m L^-1。结论:家兔法和人全血IL-1βELISA法均显示供试品的热原检测结果不符合规定。家兔法可作为检测猪源医用胶原修复膜所含热原限度是否符合规定的定性方法;人全血IL-1βELISA法可定量检测猪源医用胶原修复膜的内毒素当量,作为家兔法的补充方法具有其应用价值。
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关键词
猪源医用胶原修复膜
热原
家兔法
人
全血
il
-1
β
ELISA法
内毒素
原文传递
抗人IL-1β单克隆抗体的制备及初步应用
3
作者
李琦
张新海
+1 位作者
刘雪松
金伯泉
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期187-187,共1页
关键词
单克隆抗体
免疫组化
制备
抗
人
il
-1
β
单克隆抗体
下载PDF
职称材料
题名
带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
被引量：
1
1
作者
李娜
邸大琳
肖伟玲
付晓燕
梁淑娟
机构
山东省高校免疫学重点实验室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014年第5期493-496,共4页
基金
国家自然科学基金(81272319)
山东省科技攻关计划项目(jk47)
+1 种基金
潍坊医学院前沿探索重点项目(K11TS1007)
山东省高校科技计划项目(J12LK02)
文摘
目的构建由经典分泌途径和非经典途径表达人IL-1β的慢病毒载体,制备慢病毒后,感染HepG2肝癌细胞,比较肝癌细胞中IL-1β表达的水平。方法分别以表达人IL-1β前体蛋白基因和人红细胞生成素(EPO)信号肽序列与IL-1β成熟蛋白融合基因的pIRES2-EGFP-proIL-1β和pIRES2-EGFP-epoIL-1β质粒为模板,PCR扩增获得人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的序列,将其分别克隆入pLenti6/V5慢病毒载体中,构建由非经典途径和经典途径分泌IL-1β的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒表达载体。利用三质粒包装体系在HEK293T细胞中包装生产慢病毒,随后感染HepG2肝癌细胞,双抗体夹心ELISA和Western blot法检测细胞质和培养上清中IL-1β的表达水平。结果构建了含有人IL-1β全长基因和含有EPO信号肽与IL-1β成熟蛋白融合基因的pLenti6/V5-proIL-1β和pLenti6/V5-epoIL-1β慢病毒载体,经双酶切和DNA测序证实与基因库中登录的人IL-1β以及EPO信号肽序列一致。利用三质粒系统包装制备经不同途径表达IL-1β的慢病毒,研究证实经由2条不同途径分泌表达人IL-1β的慢病毒感染HepG2细胞后,与转染空载体的对照细胞相比,细胞培养液上清和胞质中IL-1β的水平均显著升高(P<0.01),其中HepG2/epoIL-1β细胞培养液上清中成熟蛋白IL-1β的水平明显高于HepG2/proIL-1β细胞,而胞质中总IL-1β的水平HepG2/proIL-1β高于HepG2/epoIL-1β。结论构建的带有EPO信号肽序列的IL-1β基因的慢病毒载体,在HepG2细胞表达后,分泌成熟IL-1β的水平明显高于非经典途径分泌的表达载体。
关键词
慢病毒
人
il
-1
β
HEPG2细胞
经典和非经典分泌途径
Keywords
lentivirus
il
-
1
β
HepG2 cell
classical and nonclassical secretion pathway
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
R392-33 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
猪源医用胶原修复膜热原检测方法适用性研究
2
作者
邵安良
刘露丝
张乐
陈亮
徐丽明
机构
中国食品药品检定研究院
四川省食品药品检验检测院
出处
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第11期2082-2087,共6页
基金
国家重点研发计划(2016YFC1103200,2016YFC1103203)。
文摘
目的:探讨家兔法与人全血IL-1βELISA法检测猪源医用胶原修复膜热原的适用性。方法:参考GB/T 16886.12-2017的规定,制备猪源医用胶原修复膜浸提液,离心过滤后获取供试液。参照《中华人民共和国药典》(2015年版)家兔法进行供试液热原限度是否符合规定的评价。参照YY/T 1500-2016的方法检测供试液的热原含量(相对内毒素含量)。结果:家兔法检测结果表明,经静脉给入供试液后的3只家兔体温升高分别为1.4、1.1与0.8℃,供试品的热原检查结果不符合规定。人全血IL-1βELISA法结果表明,供试品的相对内毒素当量为(1.92±0.22)EU·m L^-1。结论:家兔法和人全血IL-1βELISA法均显示供试品的热原检测结果不符合规定。家兔法可作为检测猪源医用胶原修复膜所含热原限度是否符合规定的定性方法;人全血IL-1βELISA法可定量检测猪源医用胶原修复膜的内毒素当量,作为家兔法的补充方法具有其应用价值。
关键词
猪源医用胶原修复膜
热原
家兔法
人
全血
il
-1
β
ELISA法
内毒素
Keywords
pig origin medical collagen repair membrane
pyrogen
rabbit method
human whole blood
il
-
1
β
ELISA
endotoxin
分类号
R917 [医药卫生—药物分析学]
原文传递
题名
抗人IL-1β单克隆抗体的制备及初步应用
3
作者
李琦
张新海
刘雪松
金伯泉
机构
第四军医大学免疫学教研室
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001年第2期187-187,共1页
关键词
单克隆抗体
免疫组化
制备
抗
人
il
-1
β
单克隆抗体
分类号
R392－33 [医药卫生—免疫学]
R392.11 [医药卫生—基础医学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
带有人红细胞生成素信号肽序列的IL-1β基因在HepG2细胞中的表达
李娜
邸大琳
肖伟玲
付晓燕
梁淑娟
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2014
1
下载PDF
职称材料
2
猪源医用胶原修复膜热原检测方法适用性研究
邵安良
刘露丝
张乐
陈亮
徐丽明
《药物分析杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
0
原文传递
3
抗人IL-1β单克隆抗体的制备及初步应用
李琦
张新海
刘雪松
金伯泉
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2001
0
下载PDF
职称材料
已选择
0
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引证文献
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