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Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子体外促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞的定向分化 被引量：4
1
作者 桑鹏 刘毅 《中国组织工程研究》 CAS 北大核心 2019年第29期4644-4650,共7页
背景:人羊膜间充质干细胞具有多向分化能力,相关研究表明Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子均能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞定向分化。目的:探讨Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子促进人羊膜间充质干细胞向人韧带... 背景:人羊膜间充质干细胞具有多向分化能力,相关研究表明Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子均能够促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞定向分化。目的:探讨Scleraxis联合碱性成纤维细胞生长因子促进人羊膜间充质干细胞向人韧带成纤维细胞分化的效果。方法:经遵义医学院附属医院伦理委员会批准,术前签署知情同意书,取足月产胎盘羊膜组织,两步酶消化法分离人羊膜间充质干细胞,倒置相差显微镜观察细胞形态;苏木精-伊红染色观察新鲜人羊膜结构;取第3代人羊膜间充质干细胞分4组进行培养:①单纯人羊膜间充质干细胞培养组;②人羊膜间充质干细胞经Slclerxis基因慢病毒感染组;③人羊膜间充质干细胞经碱性成纤维细胞生长因子诱导组;④人羊膜间充质干细胞经Scleraxis和碱性成纤维细胞生长因子联合诱导组。细胞培养3d开始采用CCK-8法检测各组细胞增殖能力;细胞培养14 d后,实时荧光定量PCR评价各组细胞向人韧带成纤维细胞定向分化的效果。结果与结论:①第3代人羊膜间充质干细胞呈长梭形、涡旋状贴壁生长;②新鲜人羊膜呈明显的分层结构,共分为5层:上皮层、基底层、致密层、纤维母细胞层和海绵层;③人羊膜间充质干细胞经Scleraxis基因慢病毒感染24h后表达绿色荧光,荧光表达量较强且稳定;经过碱性成纤维细胞生长因子诱导后14d的形态近似于人韧带成纤维细胞;④CCK-8实验结果显示:4组细胞均呈S型生长,其中Scleraxis基因慢病毒感染组、碱性成纤维细胞生长因子诱导组、联合诱导组较单纯培养组增殖能力强(P <0.05),但这3组间的增殖能力差异无显著性意义(P> 0.05);⑤实时荧光定量PCR显示:Scleraxis基因慢病毒感染组、碱性成纤维细胞生长因子诱导组、联合诱导组韧带相关基因Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、Fibronectin、Tenascin-C、TNMD的m RNA表达量均高于单纯 展开更多
关键词 人羊膜间充质干细胞 SCLERAXIS 碱性成纤维细胞生长因子 定向分化 人韧带成纤维细胞 慢病毒感染 组织工程
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微小RNA-145靶向Notch通路抑制人韧带成纤维细胞向成骨细胞分化 被引量：2
2
作者 王亚寒 罗建平 +2 位作者 王小刚 杨彬 崔力扬 《中华实验外科杂志》 CSCD 北大核心 2017年第11期1828-1831,共4页
目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-145对人韧带成纤维细胞（HLFs）向成骨细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法用含地塞米松、抗坏血酸和β-磷酸甘油培养液诱导HLFs细胞向成骨细胞分化，过表达或抑制细胞中miR-145水平，碱性磷酸酶（AL... 目的探讨微小RNA（miRNA，miR）-145对人韧带成纤维细胞（HLFs）向成骨细胞分化的影响及其可能的作用机制。方法用含地塞米松、抗坏血酸和β-磷酸甘油培养液诱导HLFs细胞向成骨细胞分化，过表达或抑制细胞中miR-145水平，碱性磷酸酶（ALP）试剂盒检测ALP活性，Western blot分析骨代谢相关细胞因子以及Notch通路相关蛋白表达，荧光素酶报告基因方法检测miR-145靶基因。结果强直性脊柱炎患者骨化韧带组织中miR-145表达水平显著下降（0.21±0.09比0.64±0.13；t＝7.543，P＝0.000）；与正常组比较，诱导液处理可显著抑制miR-145的表达（0.22±0.09比0.73±0.13；t＝4.812，P＝0.009），提高ALP、成骨细胞特异性转录因子（OSX）、Runt相关基因2（Runx2）水平（157.9±23.8比76.7±19.2，t＝－4.599，P＝0.010；1.01±0.21比0.32±0.10，t＝－5.138，P＝0.007；0.95±0.32比0.27±0.08，t＝－3.571，P＝0.023），同时抑制破骨细胞分化因子核因子κ B受体活化因子（RANK）及其配体（RANKL）表达（0.30±0.17比0.74±0.13，t＝3.561，P＝0.024；0.36±0.11比0.85±0.20，t＝3.718，P＝0.021），miR-145过表达可显著削弱诱导液预处理带来的上述改变，而miR-145敲减可增加诱导液的作用；同时miR-145敲减可显著增加诱导液预处理诱导的Notch1、Hes1蛋白表达上调（1.81±0.19比1.20±0.23，t＝－3.542，P＝0.024；1.66±0.20比1.13±0.22，t＝－3.088，P＝0.037），提高Notch通路活性，此种作用可被Notch通路抑制剂DAPT逆转；荧光素酶报告基因结果显示miR-145对Notch通路的作用可能通过直接靶向调控解整合素样金属蛋白酶17（ADAM17）蛋白表达实现。结论miR-145可通过直接靶向ADAM17调控Notch通路活性，进而抑制HLFs向成骨细胞分化。 展开更多
关键词 微小RNA-145 人韧带成纤维细胞 解整合素样金属蛋白酶17 NOTCH 韧带骨化
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慢病毒介导基因转染人韧带成纤维细胞表达的研究 被引量：1
3
作者 刘锦愉 韩创业 +2 位作者 赵春节 陈首 杨劲松 《广西医科大学学报》 CAS 2015年第1期5-7,共3页
目的:探讨慢病毒介导的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染人韧带成纤维细胞的转染效率,以及转染GFP后是否对韧带成纤维细胞的生物活性产生影响,为下一步实验提供理论依据。方法:采用组织块贴壁法培养原代人韧带成纤维细... 目的:探讨慢病毒介导的绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)转染人韧带成纤维细胞的转染效率,以及转染GFP后是否对韧带成纤维细胞的生物活性产生影响,为下一步实验提供理论依据。方法:采用组织块贴壁法培养原代人韧带成纤维细胞,取P2代细胞进行慢病毒感染,96h后荧光显微镜观察转染效率,流式细胞术(FACS)检测细胞凋亡和细胞增殖,及MTT法检测细胞转染前后的生物学活性变化。结果:成功建立人韧带成纤维细胞培养模型,荧光显微镜GFP阳性细胞率为95%;FACS检测结果显示未转染组与稳定转染组细胞凋亡率分别为(1.91±0.13)%和(1.96±0.12)%,两组比较差异无统计学意义(P>0.05);MTT结果显示转染前后细胞生物学活性无显著影响(P>0.05)。结论:慢病毒介导的GFP基因能高效稳定转染人韧带成纤维细胞,同时并不影响其生物学活性,能满足后续实验的需要。 展开更多
关键词 慢病毒载体 人韧带成纤维细胞 绿色荧光蛋白
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富血小板血浆对牙周韧带成纤维细胞在牙骨质表面附着及增殖的影响 被引量：3
4
作者 马忠雄 闫福华 钟声 《组织工程与重建外科杂志》 2006年第2期66-69,共3页
目的探讨应用富血小板血浆(PRP)对人牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)在健康牙和牙周病患牙牙骨质表面附着和增殖情况的影响。方法采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,取第四代细胞用于实验。分别制备健康牙和牙周病患牙牙骨质块置于96孔板,... 目的探讨应用富血小板血浆(PRP)对人牙周韧带成纤维细胞(PDLFs)在健康牙和牙周病患牙牙骨质表面附着和增殖情况的影响。方法采用组织块法培养人牙周膜成纤维细胞,取第四代细胞用于实验。分别制备健康牙和牙周病患牙牙骨质块置于96孔板,附着实验在接种细胞后加入含10%PRP和不含PRP的培养液,4小时后MTT法检测附着细胞数量;增殖实验在接种细胞常规培养24小时,而后加入不含血清的培养液培养48小时,更换为含10%PRP和不含PRP的培养液,24小时后MTT法检测细胞数量;并以扫描电镜观察细胞在牙骨质表面的情况。结果附着实验中10%PRP组附着细胞数量较不含PRP组明显增多;增殖实验中10%PRP组和不含PRP组细胞数量无明显差异。结论10%PRP可促进人PDLFs在健康牙和牙周病患牙牙骨质块上的附着,但对细胞在牙骨质块上的增殖无明显影响。 展开更多
关键词 血小板 血浆 人牙周韧带成纤维细胞 牙骨质 表面 增殖实验 细胞数量 牙周病患牙 培养液 牙周膜成纤维细胞 接种细胞 扫描电镜观察 健康 组织块法 探讨应用 检测 常规培养 培养人 血清 显影
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