目的:探讨人脂肪干细胞(hADSCs)在皮肤创伤愈合中的作用机制。方法:构建裸鼠皮肤创伤模型,随机分成hADSCs组和对照组,分别于创缘周围注射hADSCs细胞和磷酸盐缓冲液,观察并记录创面大小,取术后创缘组织,行HE染色、实时定量RT-PCR、Wester...目的:探讨人脂肪干细胞(hADSCs)在皮肤创伤愈合中的作用机制。方法:构建裸鼠皮肤创伤模型,随机分成hADSCs组和对照组,分别于创缘周围注射hADSCs细胞和磷酸盐缓冲液,观察并记录创面大小,取术后创缘组织,行HE染色、实时定量RT-PCR、Western blot法检测Notch通路相关因子表达;体外实验转染Jagged1过表达质粒至hADSCs细胞,Notch1过表达质粒至人角质形成细胞(HaCaT),构建hADSCs和HaCaT细胞共培养体系,使用CCK8、Transwell及划痕实验检测HaCaT细胞增殖和迁移能力,实时定量RT-PCR、Western blot法检测Notch信号通路相关因子表达。结果:术后3 d两组裸鼠皮肤创面均开始结痂,术后21 d hADSCs组的愈合率明显高于对照组(P<0.05),术后4、7 d hADSCs组的上皮再生量均明显高于对照组(P<0.05),hADSCs组Notch信号通路相关因子表达量显著升高(P<0.05)。转染过表达质粒并共培养后,HaCaT细胞的增殖、迁移能力显著增强,Notch通路被激活(P<0.05)。结论:hADSCs通过Jagged1/Notch信号通路促进皮肤创伤愈合。展开更多
目的探讨巴马汀对干扰素γ(IFN-γ)诱导的人角质成细胞(Ha Ca T细胞)凋亡和炎症因子分泌的影响及其机制。方法将Ha Ca T细胞分为12组:空白组(未做任何处理)、模型组(IFN-γ:50 ng·mL^-1处理24 h),较低、低、中、高4个浓度实验组[...目的探讨巴马汀对干扰素γ(IFN-γ)诱导的人角质成细胞(Ha Ca T细胞)凋亡和炎症因子分泌的影响及其机制。方法将Ha Ca T细胞分为12组:空白组(未做任何处理)、模型组(IFN-γ:50 ng·mL^-1处理24 h),较低、低、中、高4个浓度实验组[模型细胞+4个浓度(0.20,0.39,0.78和1.56μg·mL^-1)巴马汀处理],IFN-γ+miR-NC组(IFN-γ50 ng·mL^-1预处理+转染miRNC),IFN-γ+miR-15a-5p组(IFN-γ50 ng·mL^-1预处理+转染miR-15a-5p),低浓度巴马汀+anti-miR-NC组(IFN-γ50 ng·mL^-1预处理+巴马汀0.39μg·mL^-1+anti-miR-NC),低浓度巴马汀+anti-miR-15a-5p组(IFN-γ50 ng·mL^-1+巴马汀0.39μg·mL^-1+转染anti-miR-15a-5p),低浓度巴马汀+pc DNA3.1组(IFN-γ50 ng·mL^-1+巴马汀0.39μg·mL^-1+转染pc DNA3.1),低浓度巴马汀+pc DNA3.1-CXCL10组(IFN-γ50 ng·mL^-1+巴马汀0.39μg·mL^-1+转染pc DNA3.1-CXCL10),CXCL10野生型组(WT-CXCL10和miR-15a-5p共转染至Ha Ca T细胞)和CXCL10突变型组(MUT-CXCL10和miR-15a-5p共转染至Ha Ca T细胞)。以流式细胞术检测细胞凋亡,免疫印迹法检测CXC趋化因子配体10(CXCL10)、B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)和B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白、白细胞介素-6(IL-6)、IL-10蛋白表达,实时荧光定量聚合酶链反应法测定miR-15a-5p表达水平。结果空白组、模型组、IFN-γ+miR-NC组、IFN-γ+miR-15a-5p组、低浓度巴马汀+anti-miR-NC组、低浓度巴马汀+anti-miR-15a-5p组、低浓度巴马汀+pc DNA3.1组、低浓度巴马汀+pc DNA3.1-CXCL10组和较低、低、中、高4个浓度实验组的细胞凋亡率分别为(7.86±0.82)%,(21.83±2.51)%,(21.64±2.21)%,(13.67±1.42)%,(13.58±1.42)%,(18.56±1.87)%,(14.58±1.42)%,(17.86±1.71)%,(18.86±1.67)%,(13.38±1.41)%,(11.66±1.23)%和(9.97±0.99)%;这12组的IL-6蛋白表达分别为0.24±0.02,0.96±0.09,0.90±0.09,0.52±0.05,0.51±0.05,0.74±0.07,0.50±0.08,0.78±0.07,0.80±0.08,0.50±0.05,0.41±0.04和0.35±0.03;这12组的IL-10蛋白表达分别为0.84±0.08,0.19±0.02,0.20±0.02,0.47±0.04,0.44±0.04,0.30±0展开更多
文摘目的:探讨人脂肪干细胞(hADSCs)在皮肤创伤愈合中的作用机制。方法:构建裸鼠皮肤创伤模型,随机分成hADSCs组和对照组,分别于创缘周围注射hADSCs细胞和磷酸盐缓冲液,观察并记录创面大小,取术后创缘组织,行HE染色、实时定量RT-PCR、Western blot法检测Notch通路相关因子表达;体外实验转染Jagged1过表达质粒至hADSCs细胞,Notch1过表达质粒至人角质形成细胞(HaCaT),构建hADSCs和HaCaT细胞共培养体系,使用CCK8、Transwell及划痕实验检测HaCaT细胞增殖和迁移能力,实时定量RT-PCR、Western blot法检测Notch信号通路相关因子表达。结果:术后3 d两组裸鼠皮肤创面均开始结痂,术后21 d hADSCs组的愈合率明显高于对照组(P<0.05),术后4、7 d hADSCs组的上皮再生量均明显高于对照组(P<0.05),hADSCs组Notch信号通路相关因子表达量显著升高(P<0.05)。转染过表达质粒并共培养后,HaCaT细胞的增殖、迁移能力显著增强,Notch通路被激活(P<0.05)。结论:hADSCs通过Jagged1/Notch信号通路促进皮肤创伤愈合。
