重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子促进人角膜上皮细胞的增殖 被引量：25

1

作者 彭艳阳 吴伟 +2 位作者 曾丽娜 陈晓红 陆晓和 《中国组织工程研究》 CAS CSCD 2014年第7期1045-1050,共6页

背景:重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子的制剂临床上已经用于眼表创伤的修复,但是对于使用何种浓度的生长因子就能够最大程度的促进愈合以及两种生长因子促进创面愈合的效果比较一直存在争议。目的:初步观察重组人表皮生长因子... 背景:重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子的制剂临床上已经用于眼表创伤的修复,但是对于使用何种浓度的生长因子就能够最大程度的促进愈合以及两种生长因子促进创面愈合的效果比较一直存在争议。目的:初步观察重组人表皮生长因子、碱性成纤维生长因子对培养的人角膜上皮细胞克隆的影响。方法:用不同浓度的重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子作用于体外培养的人角膜上皮细胞,应用四甲基偶氮唑盐比色法分别在不同浓度的生长因子作用人角膜上皮细胞3,5,7 d后检测人角膜上皮细胞的增殖能力;平板克隆形成实验法观察细胞克隆形态及计算细胞克隆形成率。结果与结论:不同质量浓度的重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子分别对人角膜上皮细胞干预5 d后,重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子在10μg/L质量浓度时MTT值最大;质量浓度10μg/L重组人表皮生长因子促进人角膜上皮细胞克隆形成率高于质量浓度10μg/L碱性成纤维生长因子(P=0.02)。结果证实,重组人表皮生长因子和碱性成纤维生长因子均能促进人角膜上皮细胞增殖并增加其克隆形成能力。质量浓度10μg/L重组人表皮生长因子干预5 d促进人角膜上皮细胞克隆形成效果最好。 展开更多

关键词 组织构建 组织工程 碱性成纤维细胞生长因子 重组人表皮生长因子 人角膜上皮细胞 细胞克隆

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槲皮素介导铁死亡途径对高渗刺激诱导的干眼细胞模型的保护作用

2

作者 王佳娣 安百平 +3 位作者 刘悦 曹丛红 宗贝婷 姚靖 《中国临床药理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期529-533,共5页

目的 探讨槲皮素对高渗透压诱导的人角膜上皮细胞HCE-2损伤的影响及其作用机制。方法 将HCE-2细胞随机分为对照组(正常渗透压)、模型组(高渗透压)、低剂量实验组(高渗透压+31.25μg·mL^(-1)槲皮素)、中剂量实验组(高渗透压+62.50μ... 目的 探讨槲皮素对高渗透压诱导的人角膜上皮细胞HCE-2损伤的影响及其作用机制。方法 将HCE-2细胞随机分为对照组(正常渗透压)、模型组(高渗透压)、低剂量实验组(高渗透压+31.25μg·mL^(-1)槲皮素)、中剂量实验组(高渗透压+62.50μg·mL^(-1)槲皮素)、高剂量实验组(高渗透压+125.00μg·mL^(-1)槲皮素)、Erastin组(高渗透压+125.00μg·mL^(-1)槲皮素+30.00μmol·L^(-1)铁死亡诱导剂Erastin)。用细胞计数试剂盒-8检测细胞存活率,用C11-BODIPY 581/591探针染色检测活性氧(ROS)水平,用试剂盒法测定细胞谷胱甘肽(GSH)和丙二醛(MDA)水平,用实时荧光定量聚合酶链反应实验和蛋白质印迹法检测谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、二氢乳酸脱氢酶(DHODH)、铁死亡抑制蛋白1(FSP1)表达水平。结果 对照组、模型组、高剂量实验组、Erastin组细胞存活率分别为(100.00±3.97)%、(50.05±5.83)%、(86.35±7.35)%和(58.32±4.66)%,ROS水平分别为1.00±0.09、2.45±0.16、1.19±0.05和2.09±0.30,GPX4蛋白水平分别为1.09±0.11、0.34±0.03、0.91±0.12和0.30±0.04,FSP1蛋白水平分别为0.92±0.06、0.25±0.03、0.89±0.07和0.39±0.07,DHODH蛋白水平分别为0.89±0.11、0.31±0.04、0.86±0.11和0.41±0.04。对照组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);高剂量实验组上述指标与模型组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05);Erastin组上述指标与高剂量实验组比较,在统计学上差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论 槲皮素可通过抑制铁死亡途径改善高渗透压诱导的HCE-2细胞损伤。 展开更多

关键词 槲皮素 干眼病 铁死亡 人角膜上皮细胞 脂质过氧化

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金雀异黄素通过ROS-NLRP3-IL-1β途径保护角膜上皮细胞免受高渗刺激诱导的损伤 被引量：5

3

作者 周洋 陈婷妍 美丽巴努·玉素甫 《医学研究杂志》 2020年第4期80-86,共7页

目的高渗应激(HS)诱导的ROS-NLRP3-IL-1β信号通路激活被认为是干眼发病机制中上皮细胞炎症的关键步骤。本研究旨在研究金雀异黄素是否可以通过调节这一通路来保护人角膜上皮细胞抑制HS诱导的炎症发生。方法将人角膜上皮细胞(iHCEC和pri... 目的高渗应激(HS)诱导的ROS-NLRP3-IL-1β信号通路激活被认为是干眼发病机制中上皮细胞炎症的关键步骤。本研究旨在研究金雀异黄素是否可以通过调节这一通路来保护人角膜上皮细胞抑制HS诱导的炎症发生。方法将人角膜上皮细胞(iHCEC和priHCEC)在各渗透压培养基(312、350、400、450mOsm/L)和50μmol/L金雀异黄素中按分组进行不同处理培养。采用CCK-8检测各处理iHCEC和priHCEC的活性。使用小干扰RNA(siRNA)来抑制iHCEC中NRF2的表达。通过RT-PCR检测各处理后iHCEC中NLRP3炎性体相关基因表达水平。ELISA检测各处理后iHCEC和priHCEC中IL-1β分泌水平。通过免疫荧光检测分析各处理后iHCEC中氧化应激标志物,相关试剂盒来检测不同处理iHCEC的酶活性。Western blot法检测各处理后iHCEC中NRF2的蛋白表达情况。结果金雀异黄素可通过抑制ROS-NLRP3-IL-1β信号通路保护人角膜上皮细胞免受HS诱导的损伤。金雀异黄素显著抑制HS诱导的iHCEC中NLRP3炎性体相关基因的表达和IL-1β的分泌。金雀异黄素可显著减弱HS诱导的氧化应激,表现为金雀异黄素预处理后iHCEC内ROS生成量减少和8-OHdG阳性细胞数目减少。金雀异黄素诱导NRF2表达,从而触发几种抗氧化酶的表达。结论金雀异黄素可以抑制HS诱导的人角膜上皮细胞炎症的发生,其可能具有在较早阶段预防和减轻与干眼相关的角膜炎症的作用。 展开更多

关键词 干眼 金雀异黄素 高渗刺激 人角膜上皮细胞 ROS NLRP3 IL-1Β

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重组人表皮生长因子促人角膜缘上皮细胞生长的研究 被引量：4

4

作者 施宇华 曹凯 +2 位作者 刘虎 陈永汉 覃又文 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期307-309,共3页

目的:探讨重组表皮生长因子(rhEGF)对人角膜缘上皮细胞生长的影响。方法:采用rhEGF作用于体外培养的人角膜缘上皮细胞,记录细胞生长曲线,并用四唑氮盐(MTT)法测定细胞增殖状况。结果:rhEGF浓度为10ng/ml时对人角膜缘上皮细胞的促增殖作... 目的:探讨重组表皮生长因子(rhEGF)对人角膜缘上皮细胞生长的影响。方法:采用rhEGF作用于体外培养的人角膜缘上皮细胞,记录细胞生长曲线,并用四唑氮盐(MTT)法测定细胞增殖状况。结果:rhEGF浓度为10ng/ml时对人角膜缘上皮细胞的促增殖作用最强(P<0.05)。MTT法48h的吸光度值实验组均高于对照组(P<0.01)。结论:rhEGF对体外培养人角膜上皮细胞有明显促增生作用。 展开更多

关键词 表皮生长因子 人角膜上皮细胞 细胞培养 细胞增生

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蒙花苷对CXCL12诱导人角膜上皮细胞表达VEGF的影响

5

作者 左志琴 谭晓丹 +1 位作者 沈志华 王玲 《江西中医药大学学报》 2023年第3期67-71,共5页

目的:探讨蒙花苷对基质细胞衍生因子(CXCL12)诱导人角膜上皮细胞(HCEC)表达血管生成因子(VEGF)的抑制作用。方法:培养HCEC,ELISA检测不同滴度CXCL12慢性病毒基因转染HCEC上清液中VEGF含量,并建立细胞模型。ELISA检测不同浓度的蒙花苷干... 目的:探讨蒙花苷对基质细胞衍生因子(CXCL12)诱导人角膜上皮细胞(HCEC)表达血管生成因子(VEGF)的抑制作用。方法:培养HCEC,ELISA检测不同滴度CXCL12慢性病毒基因转染HCEC上清液中VEGF含量,并建立细胞模型。ELISA检测不同浓度的蒙花苷干预后细胞上清液VEGF含量,Western Blot检测细胞中的VEGFA蛋白的表达,实时荧光定量PCR(Q-PCR)检测细胞中的VEGFA mRNA水平的表达。结果:在CXCL12慢性病毒基因滴度为1.775 TU/mL时,HCEC分泌的VEGF的含量明显高于正常细胞组及阴性对照组(P<0.05),具有显著性差异。选用1.775 TU/mL滴度的CXCL12慢性病毒基因对HCEC进行造模。与模型组及阴性对照组比较,不同浓度的蒙花苷均能减少HCEC分泌VEGF,减少VEGFA蛋白含量和VEGFA mRNA表达量(P<0.05)。不同浓度的蒙花苷作用比较差异有统计学意义(P<0.05),随蒙花苷浓度增加,呈先增强后减弱的趋势,且当浓度为66.7μmol/L时对VEGFA蛋白及mRNA表达抑制力最为显著。结论:蒙花苷能够抑制CXCL12诱导HCEC分泌VEGF,减少VEGFA蛋白及VEGFA mRNA的表达,这为中药密蒙花“消目中赤脉”作用提供实验佐证。 展开更多

关键词 基质细胞衍生因子 人角膜上皮细胞 血管内皮生长因子 蒙花苷

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阿魏酸在烟曲霉菌诱导人角膜上皮细胞中的抗炎作用

6

作者 张飒飒 鲁叶慧 +3 位作者 熊翌宏 杨珊珊 吴媛 彭旭东 《青岛大学学报（医学版）》 CAS 2023年第4期485-489,共5页

目的探讨阿魏酸(FA)在烟曲霉菌诱导的人角膜上皮细胞中的抗炎作用。方法采用CCK-8方法检测不同浓度FA(0、50、100、150、200、250、300μmol/L)溶液对人角膜上皮细胞(HCEC)活力的影响;采用RT-PCR方法检测灭活的烟曲霉菌菌丝感染HCEC后,F... 目的探讨阿魏酸(FA)在烟曲霉菌诱导的人角膜上皮细胞中的抗炎作用。方法采用CCK-8方法检测不同浓度FA(0、50、100、150、200、250、300μmol/L)溶液对人角膜上皮细胞(HCEC)活力的影响;采用RT-PCR方法检测灭活的烟曲霉菌菌丝感染HCEC后,FA对炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)及核因子E2相关因子2(Nrf2)mRNA表达的影响;采用ELISA方法检测FA对炎症因子IL-6及单核细胞趋化蛋白(MCP-1)蛋白表达的影响。结果300μmol/L的FA溶液处理组HCEC存活率低于其他各组(F=5.390,P<0.05),250μmol/L及以下浓度FA溶液处理对HCEC活力无影响(P>0.05)。250μmol/L FA处理可显著升高Nrf2 mRNA表达,降低IL-1β、IL-6、TNF-αmRNA的表达水平,并显著降低IL-6及MCP-1蛋白表达(F=4.720~990.967,P<0.05)。结论FA可能通过上调Nrf2的表达,抑制烟曲霉菌诱导的HCEC炎症反应中促炎因子的表达,发挥抗炎作用。 展开更多

关键词 阿魏酸 烟曲霉菌 人角膜上皮细胞 炎症

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Toll样受体在眼部各组织中的表达及其作用 被引量：4

7

作者 王军 黄秀榕 祁明信 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第2期222-224,共3页

Toll样受体是新近发现的一类广泛存在于植物、昆虫和哺乳动物体内的与跨膜信号转导有关的受体,在进化上具有高度保守性。研究揭示了其在机体免疫特别是抗感染免疫中有重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄... Toll样受体是新近发现的一类广泛存在于植物、昆虫和哺乳动物体内的与跨膜信号转导有关的受体,在进化上具有高度保守性。研究揭示了其在机体免疫特别是抗感染免疫中有重要作用。越来越多的研究已经发现人眼角膜细胞、巩膜、结膜、葡萄膜、视网膜、虹膜内皮细胞、睫状体等都能表达Toll样受体,而且与眼部的免疫和炎症反应密切相关。Toll样受体的发现为深入研究眼部感染性疾病的发病机制及临床治疗开辟了更为广阔前景。 展开更多

关键词 TOLL样受体 脂多糖 CD14 人角膜上皮细胞

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夏桑菊浸膏对高渗诱导干眼模型人角膜上皮细胞保护机制研究

8

作者 李进良 胡双飞 +5 位作者 李沛波 吴灏 彭维 苏薇薇 王永刚 孙维广 《药学研究》 CAS 2023年第12期964-968,977,共6页

目的研究夏桑菊浸膏对高渗诱导下人角膜上皮细胞的保护作用及机制。方法采用NaCl构建高渗模型,通过MTS法检测细胞活力;利用RT-qPCR及酶联免疫吸附测定法检测相关炎症因子IL^(-1)β、IL-6、IL^(-1)8的表达;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧... 目的研究夏桑菊浸膏对高渗诱导下人角膜上皮细胞的保护作用及机制。方法采用NaCl构建高渗模型,通过MTS法检测细胞活力;利用RT-qPCR及酶联免疫吸附测定法检测相关炎症因子IL^(-1)β、IL-6、IL^(-1)8的表达;2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐荧光探针法检测细胞内活性氧水平。结果对比对照组,模型组600 mOsm·L^(-1)中细胞活力明显下降,经夏桑菊浸膏处理后,细胞活力明显上升;在炎症指标中,与对照组相比,模型组450 mOsm·L^(-1)细胞中IL^(-1)β、IL-6及IL^(-1)8的分泌水平与IL^(-1)β表达水平明显升高。夏桑菊浸膏处理细胞后,以上指标较450 mOsm·L^(-1)模型组明显下降;抗氧化研究中,模型组450 mOsm·L^(-1)中的细胞活性氧水平明显上升,夏桑菊浸膏处理后,细胞活性氧水平明显降低。结论夏桑菊浸膏对高渗诱导下的人角膜上皮细胞活力下降起到抑制作用,在高渗环境下具有保护人角膜上皮细胞的能力,保护作用通过抑制炎症因子产生和活性氧水平升高实现。 展开更多

关键词 夏桑菊浸膏 人角膜上皮细胞 高渗 干眼症

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珍珠明目滴眼液改善TNF-α和IFN-γ诱导人角膜上皮细胞损伤的作用 被引量：3

9

作者 吴慧敏 赛那 +5 位作者 杜雪莹 尹兴斌 董晓旭 黄平情 倪健 曲昌海 《中华中医药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第4期2311-2315,共5页

目的:探讨珍珠明目滴眼液(ZMED)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)诱导人角膜上皮细胞(HCEC)损伤的保护作用及相关机制。方法:采用150 ng/mL的TNF-α和IFN-γ(1∶1)溶液刺激离体培养的HCEC建立干眼损伤模型,药物组分别给予稀... 目的:探讨珍珠明目滴眼液(ZMED)对肿瘤坏死因子α(TNF-α)和干扰素γ(IFN-γ)诱导人角膜上皮细胞(HCEC)损伤的保护作用及相关机制。方法:采用150 ng/mL的TNF-α和IFN-γ(1∶1)溶液刺激离体培养的HCEC建立干眼损伤模型,药物组分别给予稀释倍数为1000、100、50倍的ZMED;分别采用MTT实验检测ZMED对TNF-α和IFN-γ诱导损伤HCEC的保护作用;采用AO/EB双染法和Hoechst荧光染色法观察各组细胞凋亡形态的差异;采用流式细胞术分析各组细胞凋亡率及细胞周期分布;通过Western Blot检测凋亡相关蛋白表达水平的变化。结果:ZMED稀释50倍即可以明显增加TNF-α和IFN-γ诱导损伤的HCEC的存活率;ZMED稀释100倍以下可呈浓度依赖性地降低HCEC凋亡率并抑制其G2期阻滞(P<0.05);ZMED给药后cleaved Caspase-8、cleaved Caspase-3、PARP、p-ERK1/2/ERK1/2下调(P<0.05),Bcl-2/Bax上调(P<0.05)。结论:ZMED对150 ng/mL的TNF-α和IFN-γ溶液诱导损伤的HCEC有明显的保护作用,该作用可能与其抑制Caspase-8/Caspase-3信号通路,Bcl-2家族蛋白与ERK1/2的活化相关。 展开更多

关键词 珍珠明目滴眼液 干眼 人角膜上皮细胞 肿瘤坏死因子α 干扰素Γ 凋亡相关蛋白

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高原城市室内灰尘对人角膜上皮细胞损伤研究 被引量：3

10

作者 毕珏 张振宁 +4 位作者 刘雨佳 杨丹蕾 郑钦象 崔道雷 向萍 《中国环境科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第7期3360-3370,共11页

收集高海拔城市昆明不同功能区室内灰尘,利用等离子发射光谱仪分析不同粒径(F1~F4:100~2000,75~100,63~75,45~63μm)灰尘中Pb,Cu,Cd,Zn,Cr,Ni,Co,As和Mn的含量,借助人工泪液提取的方法,测定目标重金属的可溶出率(生物可给性),并分析室... 收集高海拔城市昆明不同功能区室内灰尘,利用等离子发射光谱仪分析不同粒径(F1~F4:100~2000,75~100,63~75,45~63μm)灰尘中Pb,Cu,Cd,Zn,Cr,Ni,Co,As和Mn的含量,借助人工泪液提取的方法,测定目标重金属的可溶出率(生物可给性),并分析室内灰尘人工泪提取液对人角膜上皮细胞的毒性效应.结果表明,办公室灰尘中Ni,Mn,Zn显著高于家庭及学生宿舍(P<0.01),且Cd,Ni,Zn的含量高于昆明市土壤背景值的39.3、9.5、12.3倍.居民住宅Co(10.6%)、办公室As(16.1%)及学生宿舍Mn(36.0%)溶出率最高.重金属元素在粒径分布规律上表现出不同特征,办公室及宿舍灰尘重金属易在63~100μm粒径范围内富集.人角膜上皮细胞经室内灰尘人工泪提取液暴露24h后,低浓度(20μg/mL)、高浓度(1280μg/mL)分别促进和抑制细胞增殖,与对照组相比较均具有统计学意义(P<0.05).细胞炎症因子IL-1β和TNF-α相对表达量显著增加,提示昆明室内灰尘暴露有诱发角膜炎症疾病发生的风险. 展开更多

关键词 高原城市 室内灰尘 重金属 人角膜上皮细胞 炎症反应

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BIGH3基因突变子R124C的过表达及其对人角膜上皮细胞的影响 被引量：2

11

作者 殷秀丽 刘平 +3 位作者 金迪 赵秀梅 张丽娟 葛红岩 《哈尔滨医科大学学报》 CAS 北大核心 2010年第6期535-539,共5页

目的对我国常见的BIGH3基因相关性人角膜营养不良的热点突变R124C进行体外定点诱变研究,并构建其真核表达载体,探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMD18-T/BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列,克隆至真核表达载体... 目的对我国常见的BIGH3基因相关性人角膜营养不良的热点突变R124C进行体外定点诱变研究,并构建其真核表达载体,探讨其过表达对人角膜上皮细胞的影响。方法以pMD18-T/BIGH3载体为模板扩增野生型BIGH3基因全长编码序列,克隆至真核表达载体pIRES2-EGFP上,采用快速体外定点诱变技术获得R124C突变体。瞬时转染体外培养的人角膜上皮细胞,免疫印迹检测野生与突变型BIGH3基因的表达,分别检测细胞培养基中TNF-α的含量,并收集细胞,分析caspase-3活性。结果 PCR成功扩增了野生型和R124C突变型的BIGH3基因,两种重组表达质粒转染人角膜上皮细胞后,免疫印迹检测结果证实其均在细胞中表达。细胞因子TNF-α分泌量增加,同时R124C型突变也可导致caspase-3酶活性增高。结论应用快速体外定点诱变技术,成功获得突变型R124C-BIGH3基因,转染人角膜上皮细胞后,通过caspase-3途径引起细胞凋亡,并上调分泌因子TNF-α。 展开更多

关键词 BIGH3 定点诱变 人角膜上皮细胞 瞬时转染 凋亡 TNF-α

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高渗透压对人角膜上皮细胞MMP-9的上调作用 被引量：2

12

作者 宋秀君 张晓融 +2 位作者 卞小芸 吕伟 阎志鹏 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第6期611-613,共3页

目的评价人上皮细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对高渗透压反应的表达特性.方法在正常渗透压的培养液中培养人角膜上皮细胞,然后在4组细胞培养液中分别加入40、60、80和100 mmol/L的NaCl,使培养液渗透压达到400～500 mOsm,运用酶图法和EL... 目的评价人上皮细胞中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)对高渗透压反应的表达特性.方法在正常渗透压的培养液中培养人角膜上皮细胞,然后在4组细胞培养液中分别加入40、60、80和100 mmol/L的NaCl,使培养液渗透压达到400～500 mOsm,运用酶图法和ELISA法测定加入高渗剂24 h后的培养液中MMP-9的质量浓度.结果不同渗透压组MMP-9的质量浓度有显著差异,培养液渗透压越高,MMP-9的质量浓度也就越高.结论高渗透压反应性刺激人角膜上皮细胞MMP-9的表达和产物.证实了眼表高渗透压是干眼症导致眼表面炎症的发病机制. 展开更多

关键词 高渗透压 基质金属蛋白酶-9 人角膜上皮细胞

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一种新的角膜缘干细胞分选方法 被引量：2

13

作者 张伟 杨为中 +4 位作者 金敏 高宗银 陈晓燕 许艳丽 张玉平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2012年第2期101-104,共4页

目的用平板离心法建立一种新的角膜缘干细胞分选方法。方法用人角膜缘组织块培养法培养出角膜上皮细胞,收获细胞后用转速1400r·min-1和1800r·min-1分别将细胞用平板离心法于未包被的六孔板上进行分选。ATC1为1400r·min-... 目的用平板离心法建立一种新的角膜缘干细胞分选方法。方法用人角膜缘组织块培养法培养出角膜上皮细胞,收获细胞后用转速1400r·min-1和1800r·min-1分别将细胞用平板离心法于未包被的六孔板上进行分选。ATC1为1400r·min-1贴壁的细胞,ATC2为1800r·min-1贴壁的细胞,NAC为1800r·min-1离心力作用下漂浮而不能贴壁的细胞。分选出的三群细胞采用免疫组织化学、克隆形成实验、Ki67流式细胞仪进行分析。结果细胞计数显示用转速1400r·min-1筛选出的ATC1占总体细胞量的(11.32±2.46)%。在离心速度为1800r·min-1时,筛选出ATC2为(18.55±2.79)%,而NAC则为(68.29±4.07)%。ATC1表达角膜缘干细胞标志ABCG2、p63,而不表达角膜上皮细胞分化标志K3。ATC2较少表达ABCG2和p63,大部分表达K3。NAC则不表达ABCG2、p63,而几乎完全表达K3。在这三群细胞中ATC1细胞群具有最强的细胞增殖活性,其克隆形成率和Ki67阳性细胞检测率分别为(3.90±0.17)%和(56.78±2.39)%。ATC2克隆形成率和Ki67阳性细胞检测率分别为(2.48±0.19)%和(9.67±1.88)%。NAC克隆形成率和Ki67阳性细胞检测率分别为(0.84±0.89)%和(4.76±0.57)%。结论平板离心法是一种新的角膜缘干细胞的分选方法。ATC1、ATC2和NAC可能分别为角膜缘干细胞、短暂扩充细胞和终末分化细胞。 展开更多

关键词 平板离心法 人角膜上皮细胞 角膜缘干细胞

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Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及意义 被引量：2

14

作者 陈梨萍 李科 +3 位作者 郑振优 宋绪华 李雷 赵楠楠 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2017年第11期1731-1734,共4页

目的:探讨Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及其相关分子机制。方法:人角膜上皮细胞经复苏、培养,连续传代2次后共培养12个T25细胞培养瓶,4个培养瓶一组,共3组,分别加入25 ng/m L的重组人Wnt1蛋白和50 ng/m L的重组人W... 目的:探讨Wnt1蛋白对人角膜上皮细胞Cyclin D1蛋白表达的影响及其相关分子机制。方法:人角膜上皮细胞经复苏、培养,连续传代2次后共培养12个T25细胞培养瓶,4个培养瓶一组,共3组,分别加入25 ng/m L的重组人Wnt1蛋白和50 ng/m L的重组人Wnt1蛋白,一组不加入重组人Wnt1蛋白作为对照,于不同时间点(6、24、48和72 h)各取一个T25培养瓶的细胞,计算各组角膜上皮细胞总数并采用Western blot方法检测角膜上皮细胞中Cyclin D1蛋白的表达情况。结果:对照组Cyclin D1蛋白的表达在0~48 h内随着时间的延长呈现逐步降低的趋势,在48 h达到最低状态,在72 h有所提高。加入Wnt1后6 h,25 ng/m L组未检测到Cyclin D1蛋白表达,50 ng/m L组Cyclin D1蛋白表达有所提高。在24,48和72 h时间点,25 ng/m L组和50 ng/m L组Cyclin D1蛋白表达均提高,48 h达到最高峰,72 h有所回落。添加Wnt1后与对照组比较,25 ng/m L组及50 ng/m L组角膜上皮细胞生长速度均加快,但在6、24及48 h时间点差异无显著性,在72 h差异有显著性。结论:Wnt1蛋白的刺激可在一定时间范围内增强人角膜上皮细胞Cy-clin D1的表达,且与Wnt1蛋白量呈正相关。Cyclin D1的表达强弱,在角膜上皮损伤修复及其细胞增殖分化过程中可能起重要作用。 展开更多

关键词 CYCLIN D1 人角膜上皮细胞 角膜 Wntl

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珍珠明目滴眼液改善高渗诱导角膜上皮细胞损伤的作用机制研究 被引量：2

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作者 杜雪莹 郑姣 +2 位作者 顾小盼 曲昌海 倪健 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第16期3425-3430,共6页

目的探讨珍珠明目滴眼液(ZMED)对高渗诱导人角膜上皮细胞(HCEC)损伤的保护作用及相关机制。方法采用110 mmol/L氯化钠高渗溶液刺激离体培养的HCEC建立干眼损伤模型,药物组分别给予不同稀释倍数的ZMED;分别采用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)实... 目的探讨珍珠明目滴眼液(ZMED)对高渗诱导人角膜上皮细胞(HCEC)损伤的保护作用及相关机制。方法采用110 mmol/L氯化钠高渗溶液刺激离体培养的HCEC建立干眼损伤模型,药物组分别给予不同稀释倍数的ZMED;分别采用MTT法、乳酸脱氢酶(LDH)实验检测ZMED对高渗诱导损伤HCEC的保护作用;采用流式细胞术分析各组细胞凋亡率;采用AO/EB双染法和Hochest荧光染色法观察各组细胞凋亡形态的差异;通过Western blotting法检测Caspase凋亡通路上关键蛋白表达水平的变化。结果 ZMED可以明显增加高渗诱导损伤的HCEC存活率并降低其LDH释放量;ZMED稀释25倍以下作用于高渗诱导HCEC后,细胞凋亡率较模型组明显降低,且凋亡的HCEC数量呈浓度依赖性减少;ZMED给药后剪切态的Caspase-9、Caspase-3、PARP呈浓度依赖性下调。结论 ZMED对110 mmol/L氯化钠高渗溶液诱导损伤的HCEC有明显的保护作用,该作用可能与其抑制线粒体介导的Caspase-9/Casepase-3细胞调亡通路相关。 展开更多

关键词 珍珠明目滴眼液 干眼 人角膜上皮细胞 高渗 凋亡 乳酸脱氢酶 CASPASE-9 CASEPASE-3

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茄病镰刀菌对人角膜上皮细胞NOD2表达及相关炎症因子分泌水平的影响 被引量：2

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作者 李豪亮 朱然 +3 位作者 张希熹 陆志峰 钱晶晶 梁舒 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第7期633-637,共5页

目的探讨茄病镰刀菌对人角膜上皮细胞(hCEC)中NOD2表达及下游炎症因子分泌水平的影响。方法将对数生长期的hCEC分为对照组(无真菌刺激)、真菌刺激组(根据加入真菌浓度不同分为10^(3)、10^(4)、10^(5)、10^(6) CFU·mL^(-1)刺激组),... 目的探讨茄病镰刀菌对人角膜上皮细胞(hCEC)中NOD2表达及下游炎症因子分泌水平的影响。方法将对数生长期的hCEC分为对照组(无真菌刺激)、真菌刺激组(根据加入真菌浓度不同分为10^(3)、10^(4)、10^(5)、10^(6) CFU·mL^(-1)刺激组),真菌刺激组分别刺激hCEC 4 h、8 h、12 h、16 h,RT-qPCR检测各组hCEC中NOD2 mRNA表达;10^(5) CFU·mL^(-1)茄病镰刀菌孢子刺激12 h、24 h、36 h,Western blot检测各组hCEC中NOD2蛋白表达;细胞免疫荧光法检测NOD2分子定位和表达;10^(3)、10^(4)、10^(5)、10^(6) CFU·mL^(-1)茄病镰刀菌孢子刺激hCEC 36 h,ELISA法检测各组hCEC培养上清液中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白含量。结果随着茄病镰刀菌孢子刺激浓度的升高和刺激时间的延长,hCEC中NOD2 mRNA表达逐渐升高,10^(5) CFU·mL^(-1)茄病镰刀菌孢子刺激8 h,hCEC中NOD2 mRNA相对表达水平达到峰值,差异有统计学意义(P<0.05);10^(5) CFU·mL^(-1)茄病镰刀菌孢子刺激hCEC 12 h、24 h、36 h,hCEC中NOD2蛋白相对表达水平逐渐增多,与对照组相比差异均有统计学意义(均为P<0.05);10^(5) CFU·mL^(-1)茄病镰刀菌孢子刺激24 h后,NOD2主要表达在hCEC细胞质中,其荧光分子表达强度显著增加。随着茄病镰刀菌孢子刺激浓度的增加,hCEC中相关炎症因子的分泌水平增加,10^(4)、10^(5)、10^(6) CFU·mL^(-1)茄病镰刀菌孢子刺激hCEC 36 h,IL-6、IL-8、TNF-α蛋白含量与对照组相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论茄病镰刀菌孢子刺激可上调hCEC中NOD2表达并促进相关炎症因子分泌,NOD2参与了hCEC抗茄病镰刀菌的固有免疫反应。 展开更多

关键词 茄病镰刀菌 炎症因子 人角膜上皮细胞 NOD2

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人角膜上皮细胞体外培养的研究进展 被引量：2

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作者 王宇静 杨燕宁 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第4期384-387,391,共5页

角膜上皮细胞位于角膜外表面,人角膜上皮细胞体外培养有助于充分了解角膜细胞的生物学特性、构建体外疾病模型以及更好地发挥其临床作用。我们就近年来关于人角膜上皮细胞体外培养提取部位,提取方法,培养基、细胞因子与底物以及鉴别方... 角膜上皮细胞位于角膜外表面,人角膜上皮细胞体外培养有助于充分了解角膜细胞的生物学特性、构建体外疾病模型以及更好地发挥其临床作用。我们就近年来关于人角膜上皮细胞体外培养提取部位,提取方法,培养基、细胞因子与底物以及鉴别方法研究进展进行综述。 展开更多

关键词 人角膜上皮细胞 体外培养 细胞培养

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贝特舒对人角膜上皮细胞凋亡诱导作用的实验研究 被引量：2

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作者 孙倩 樊廷俊 +2 位作者 邱月 葛源 于苗苗 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期14-19,28,共7页

为了揭示常用青光眼药物贝特舒（betaxol01）对人角膜上皮（HCEP）细胞的毒性及其作用机理，使用不同质量浓度贝特舒对体外培养IqCEP细胞进行了处理，并利用倒置显微镜跟踪观察了细胞的生长和形态，用吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）荧光双... 为了揭示常用青光眼药物贝特舒（betaxol01）对人角膜上皮（HCEP）细胞的毒性及其作用机理，使用不同质量浓度贝特舒对体外培养IqCEP细胞进行了处理，并利用倒置显微镜跟踪观察了细胞的生长和形态，用吖啶橙／溴化乙锭（AO／EB）荧光双染色法检测了质膜的通透性，用琼脂糖凝胶电泳法检测DNA的断片化，用透射电镜检测细胞的超微结构。发现在0．17500—2．80000g／L的质量浓度范围内，贝特舒对HCEP细胞具有显著的毒性。并随着质量浓度的提高和处理时间的延长而逐渐增大，处理24h即可使大部分细胞皱缩死亡；进一步的研究结果发现，质量浓度为0．17500—2．80000g／L的贝特舒能显著提高HCEP细胞的质膜通透性，并使其出现DNA断片化、染色质凝缩和形成凋亡小体等凋亡细胞的结构变化。可见，在贝特舒0．17500—2．80000g／L的质量浓度范围内对HCEP细胞具有显著的毒性，并具有质量浓度和时间依赖性，其毒性作用的发挥是通过诱导细胞凋亡实现的，在眼科I旌床应用中毒副作用极大。 展开更多

关键词 人角膜上皮细胞 贝特舒 细胞凋亡 DNA断片化 凋亡小体

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没食子酸在烟曲霉菌诱导的真菌性角膜炎中的抗炎作用

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作者 栾淞莹 战璐 彭旭东 《临床医学进展》 2022年第2期1080-1089,共10页

没食子酸(gallic acid, GA)具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗病毒、抗肿瘤、心血管保护等多种生物活性,并且广泛用于医药、食品等领域。本文就GA对烟曲霉菌菌丝诱导的人角膜上皮细胞炎症反应及对小鼠真菌性角膜炎的治疗作用进行相关研究。方... 没食子酸(gallic acid, GA)具有抗炎、抗氧化、抑菌、抗病毒、抗肿瘤、心血管保护等多种生物活性,并且广泛用于医药、食品等领域。本文就GA对烟曲霉菌菌丝诱导的人角膜上皮细胞炎症反应及对小鼠真菌性角膜炎的治疗作用进行相关研究。方法:体外实验用烟曲霉菌菌丝感染人角膜上皮细胞后,再用GA处理,PCR、ELISA方法检测IL-1β、TNF-α、LOX-1的mRNA及蛋白的表达。体内实验用烟曲霉菌孢子感染C57BL/6小鼠角膜建立烟曲霉菌角膜炎模型,然后使用GA或PBS处理,比较两组的临床表现并进行炎症评分以比较两者差异。结果:GA降低了烟曲霉菌诱导的人角膜上皮的炎症反应中的IL-1β、TNF-α、LOX-1的表达,且改善真菌性角膜炎小鼠角膜的炎症程度。结论:GA抑制真菌菌丝诱导的人角膜上皮的炎症因子表达,改善真菌性角膜炎小鼠角膜的炎症程度评分。 展开更多

关键词 没食子酸 烟曲霉菌 人角膜上皮细胞 炎症

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氧氟沙星对人角膜上皮细胞的毒性作用及其细胞与分子机理研究 被引量：1

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作者 王德平 樊文艺 +1 位作者 温茜 樊廷俊 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期11-17,共7页

以非转染人角膜上皮(HCEP)细胞系为体外实验模型,研究了眼科常用抗生素药物氧氟沙星(ofloxacin,OFX)的细胞毒性及其细胞与分子机理。体外培养的HCEP细胞用不同浓度OFX处理后,分别利用光镜和M TT方法测定细胞病变效应和细胞活力,用流式... 以非转染人角膜上皮(HCEP)细胞系为体外实验模型,研究了眼科常用抗生素药物氧氟沙星(ofloxacin,OFX)的细胞毒性及其细胞与分子机理。体外培养的HCEP细胞用不同浓度OFX处理后,分别利用光镜和M TT方法测定细胞病变效应和细胞活力,用流式细胞术、吖啶橙/溴化乙锭双染色、DNA凝胶电泳和透射电镜检测细胞周期阻滞和细胞凋亡,使用ELISA、Western杂交和流式细胞术鉴定胱天蛋白酶的激活、胞质中线粒体特有凋亡激活蛋白的含量和线粒体跨膜电位(MTP)的崩解。结果显示,OFX在质量浓度大于0.375 g/L时,可剂量和时间依赖性地引起HCEP细胞出现细胞病变效应、活力下降和质膜通透性升高,并引起细胞周期阻滞在S期,磷脂酰丝氨酸外翻,DNA断片化,凋亡小体形成,胱天蛋白酶-2、-9和-3的激活,胞质中细胞色素c和凋亡诱导因子含量的上调,以及MTP崩解。可见,OFX在质量浓度为其临床治疗质量浓度的1/8以上时,能通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡对HCEP细胞产生显著细胞毒性,其凋亡诱导作用要受到死亡受体介导的线粒体依赖性信号途径的调控。 展开更多

关键词 氧氟沙星 人角膜上皮细胞 细胞毒性 细胞凋亡 线粒体依赖性信号途径

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