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人血管抑素基因工程菌发酵条件的初步研究 被引量：6
1
作者 卢文菊 罗进贤 +1 位作者 何建国 张添元 《广州医学院学报》 2000年第3期1-3,共3页
目的 :探讨发酵条件对大肠杆菌工程菌表达重组人血管抑素 (rhAGN)的影响。方法 :应用摇瓶和发酵罐发酵试验观察不同诱导时机和诱导时间以及 pH、通气量等对rhAGN表达量的影响。结果 :(1)工程菌E .coliDH5α(pBVA2 )在 30℃培养至A60 0nm... 目的 :探讨发酵条件对大肠杆菌工程菌表达重组人血管抑素 (rhAGN)的影响。方法 :应用摇瓶和发酵罐发酵试验观察不同诱导时机和诱导时间以及 pH、通气量等对rhAGN表达量的影响。结果 :(1)工程菌E .coliDH5α(pBVA2 )在 30℃培养至A60 0nm 为 0 .3～ 0 .5时于 4 2℃诱导4hrhAGN表达量最高 ,约为 2 12mg L ;(2 ) 15L发酵罐发酵参数为 pH7.2 ,搅拌转速 50 0r min ,通气量 4～ 8L min ,溶氧 50 %时 ,rhAGN表达量提高到 2 76mg L。结论 :确定了最适诱导时机和诱导时间 ,通过调节 pH和改善通气 ,初步形成了一套高表达rhAGN的发酵工艺。 展开更多
关键词 人血管抑素 基因表达 大肠杆菌 发酵
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竞争酶联免疫吸附试验检测人血管抑素的方法建立及其应用研究 被引量：2
2
作者 何杨 沈文红 +1 位作者 陶永辉 阮长耿 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第12期864-866,共3页
目的　研究建立竞争酶联免疫吸附试验 (竞争ELISA)检测血管抑素的方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　以重组人血管抑素作为抗原免疫家兔 ,制备抗人血管抑素多克隆抗体 ,建立竞争ELISA法 ,并检测 6 1例肿瘤患者和 2 0名正常献血员血浆... 目的　研究建立竞争酶联免疫吸附试验 (竞争ELISA)检测血管抑素的方法 ,并探讨其临床应用价值。方法　以重组人血管抑素作为抗原免疫家兔 ,制备抗人血管抑素多克隆抗体 ,建立竞争ELISA法 ,并检测 6 1例肿瘤患者和 2 0名正常献血员血浆中血管抑素含量。结果　竞争ELISA法的灵敏度为 5mg/L ,批内和批间变异分别为 2 7%～ 3 2 %和 4 9%～ 5 1% ,平均回收率为10 0 4 %。血浆血管抑素含量在 2 0名献血员中为 2 7 2 2± 7 4 4mg/L ,2 8例胃癌患者为 5 7 15±2 9 90mg/L ,6例乳腺癌为 6 7 5 1± 2 0 88mg/L ,6例肝癌为 92 0 3± 18 72mg/L ,11例急性淋巴细胞性白血病为 4 1 72± 9 99mg/L ,10例其他肿瘤 (2例胆囊癌 ,3例结肠癌 ,2例前列腺癌 ,3例卵巢癌 )为 78 78± 2 0 4 4mg/L ,均显著高于正常人 (P <0 0 5或 0 0 1)。结论　建立的竞争ELISA为临床提供了一种简单、灵敏和特异地检测人血管抑素的方法 ,并可作为肿瘤诊断的一种新检测指标。 展开更多
关键词 人血管抑素 酶联免疫吸附试验 献血员 血浆 肿瘤 ELISA 含量 结论 灵敏 方法
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体外培养下可持续分泌人血管抑素和内皮抑素基因工程细胞对血管生成的抑制效应
3
作者 潘静坤 赵卉 +3 位作者 田磊 崔忻 高宇红 薛毅珑 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期3886-3889,共4页
背景:以往实验构建了可持续分泌人血管抑素和内皮抑素的基因工程细胞,即人血管抑素/293细胞和人内皮抑素293细胞,并已证明可持续分泌人血管抑素蛋白和人内皮抑素蛋白。但尚不了解其分泌物是否能发挥血管生成的抑制作用。目的:观察以基... 背景:以往实验构建了可持续分泌人血管抑素和内皮抑素的基因工程细胞,即人血管抑素/293细胞和人内皮抑素293细胞,并已证明可持续分泌人血管抑素蛋白和人内皮抑素蛋白。但尚不了解其分泌物是否能发挥血管生成的抑制作用。目的:观察以基因工程技术构建的人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞对鸡胚尿囊膜血管新生的抑制效应。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-06/2007-01在解放军总医院老年医学研究所细胞生物学研究室完成。材料:Hek/293细胞为人胚胎肾细胞,由解放军军事医学科学院提供。人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞由课题组前期构建。SPF级鸡胚购自北京维通利华实验动物有限公司。方法:将鸡胚消毒后,置于37℃无菌恒温箱中孵育5d,在距胚头1cm两条卵黄静脉之间的卵壳投影部位磨切暴露尿囊膜,制成假气室,用无菌滤纸封闭窗口,制成鸡胚尿囊膜模型,备用。用灭菌蒸馏水配制体积分数为0.5%甲基纤维素溶液,制成甲基纤维素小杯。卵壳开窗后第3天,分别吸取浓缩的293细胞、人血管抑素/293细胞、人内皮抑素/293细胞培养上清液各20μL,或人血管抑素/293细胞和人内皮抑素/293细胞培养上清液各10μL,加于甲基纤维素小杯中,将其置于鸡胚尿囊膜的两条大血管之间的无血管区。主要观察指标:观察尿囊膜血管生成的变化。结果:共培养9d时,与单纯293细胞上清液组相比,人血管抑素/293细胞上清液或人内皮抑素/293细胞上清液组,甲基纤维素小杯内及邻近区的鸡胚尿囊膜血管明显发育不良,血管分布稀疏,数量明显减少,其一级血管数量虽未明显减少,但其管径较细,而二级血管和三级以下的血管数量明显减少、管径明显变细,伸入尿囊膜边缘区的血管数量减少,管径明显变细。与人血管抑素/293细胞组或人内皮抑素/293细胞组相比,人血管抑素/29 展开更多
关键词 人血管抑素 人内皮抑素 基因工程细胞 鸡胚尿囊膜 血管新生
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人血管抑素Kringles 1-3的表达纯化及生物学活性研究 被引量：2
4
作者 李壮林 姚雪静 原桂勇 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期24-28,共5页
人血管抑素包含了4个环饼状结构域(Kringle),是一个有效的血管生成抑制因子。采用PCR方法从人胚肝cDNA文库中扩增了人血管抑素Kringles1-3的基因,重组于pPIC9K载体中,获得重组载体pPIC9K-K1-3,然后转化毕赤酵母细胞GS115,获得重组菌株。... 人血管抑素包含了4个环饼状结构域(Kringle),是一个有效的血管生成抑制因子。采用PCR方法从人胚肝cDNA文库中扩增了人血管抑素Kringles1-3的基因,重组于pPIC9K载体中,获得重组载体pPIC9K-K1-3,然后转化毕赤酵母细胞GS115,获得重组菌株。K1-3蛋白在5 L发酵罐的表达量达41.2 mg/L,发酵液上清经过浓缩、透析,然后用Lysine Sepharose 4B层析柱纯化,得到的K1-3蛋白纯度大于98%,纯化回收率达到95%以上。K1-3能明显抑制bFGF刺激的人微血管内皮细胞的迁移,达到抑制效果为50%时所需的蛋白浓度(IC50)为1.86μg/ml。K1-3也能抑制鸡胚绒毛尿囊膜血管的生长,抑制率达95%。为应用人血管抑素Kringles1-3治疗肿瘤奠定了初步实验基础。 展开更多
关键词 人血管抑素 表达 纯化 活性研究 毕氏酵母
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重组大肠杆菌生产人血管抑素的发酵条件 被引量：1
5
作者 邵玲莉 周楠迪 +2 位作者 吴奇凡 金坚 田亚平 《无锡轻工大学学报（食品与生物技术）》 CSCD 北大核心 2004年第2期8-11,共4页
对重组人血管抑素表达菌株pQE32 AGN的生长及产物表达规律进行了探索,确定了最佳发酵条件.培养温度为37℃,初始pH7.0,OD600为0.8～1.0时开始诱导,诱导持续时间为6h,诱导剂浓度为0.1mmol/L,最终目的产物达到菌体总蛋白的35%,rhAGN的表达... 对重组人血管抑素表达菌株pQE32 AGN的生长及产物表达规律进行了探索,确定了最佳发酵条件.培养温度为37℃,初始pH7.0,OD600为0.8～1.0时开始诱导,诱导持续时间为6h,诱导剂浓度为0.1mmol/L,最终目的产物达到菌体总蛋白的35%,rhAGN的表达量达到560mg/L. 展开更多
关键词 人血管抑素 重组大肠杆菌 发酵条件 pQE32-AGN 产物表达
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人尿血管抑素测定方法的建立及在肿瘤患者中的应用 被引量：1
6
作者 鲁照明 薛乐勋 董子明 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2004年第2期255-257,共3页
目的:建立一种测定人尿液中血管抑素的方法,并探讨其在肿瘤患者中测定的意义。方法:依据ELISA的原理和技术要求,以赖氨酸作固相包被物,血管抑素为标准品,抗入K1～3的单抗为特异性的一抗,制备测定血管抑素的ELISA试剂盒。用此方法测定40... 目的:建立一种测定人尿液中血管抑素的方法,并探讨其在肿瘤患者中测定的意义。方法:依据ELISA的原理和技术要求,以赖氨酸作固相包被物,血管抑素为标准品,抗入K1～3的单抗为特异性的一抗,制备测定血管抑素的ELISA试剂盒。用此方法测定40例健康人(正常对照组)、92例恶性肿瘤(31例肺癌、31例食管癌、30例乳癌)患者治疗前尿中血管抑素含量。结果:该ELISA方法检测人尿中血管抑素的检出范围为1～200μg/L。正常对照组中尿血管抑素含量为0～27.4μg/L,x±s(16.15±6.82)μg/L。3种肿瘤患者尿中血管抑素平均水平均高于正常对照组(P<0.05),肺癌、食管癌、乳癌的诊断符合率分别为77.4％、71.0％和70.0％,其间差异无统计学意义(P>0.05)。结论:该方法操作方便,敏感性、特异性高;人尿中血管抑素含量检测可用于某些肿瘤的检出。 展开更多
关键词 人血管抑素 ELISA 肿瘤 尿
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重组人血管抑素的克隆、表达及活性测定 被引量：1
7
作者 姜颖 孙陆果 于永利 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2000年第4期285-287,共3页
目的 :研究血管抑素 (angiostatin)的临床应用价值 ,将其开发为多肽类药物。方法 :以RT PCR从胎儿肝脏钓取人血管抑素全编码区cDNA ,使用Pichia分泌型酵母表达系统表达重组人血管抑素 ,重组蛋白经肝素亲和层析纯化后 ,以鸡胚尿囊膜法血... 目的 :研究血管抑素 (angiostatin)的临床应用价值 ,将其开发为多肽类药物。方法 :以RT PCR从胎儿肝脏钓取人血管抑素全编码区cDNA ,使用Pichia分泌型酵母表达系统表达重组人血管抑素 ,重组蛋白经肝素亲和层析纯化后 ,以鸡胚尿囊膜法血管生成实验及小鼠创伤愈合实验检测活性。结果 :重组人血管抑素在酵母系统中得到较高量表达 (5mg/L) ,经肝素亲和层析纯化 ,SDS PAGE显示分子量为 43kD。活性实验表明 ,重组蛋白能够抑制新生血管形成、抑制伤口愈合。结论 :重组人血管抑素在酵母系统中实现高效表达 ,并具有很好的生物学活性。 展开更多
关键词 表达 活性 重组人血管抑素 多肽类药物 克隆
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重组人血管抑素抑制人鼻咽癌生长的实验研究 被引量：2
8
作者 卢文菊 张晓实 +1 位作者 罗进贤 韦永芳 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2000年第10期890-892,共3页
目的：观察重组人血管抑素（ recombinant human angiostatin,rhAGN）对鼻咽癌皮下移植瘤生长的抑制作用，探讨其应用价值。方法：应用 MTT法观察 rhAGN对 CNE 1鼻咽癌细胞和 HDMEC血管内皮细胞增殖的影响；建立 CNE 1鼻咽癌裸鼠皮下移... 目的：观察重组人血管抑素（ recombinant human angiostatin,rhAGN）对鼻咽癌皮下移植瘤生长的抑制作用，探讨其应用价值。方法：应用 MTT法观察 rhAGN对 CNE 1鼻咽癌细胞和 HDMEC血管内皮细胞增殖的影响；建立 CNE 1鼻咽癌裸鼠皮下移植瘤模型，皮下注射不同剂量 rhAGN，治疗期为 30天，观察肿瘤体积和重量变化。 结果： (1)在 0.5μ g/ml、 1.0μ g/ml和 2.0μ g/ml测试浓度下，培养 72 h， rhAGN对 CNE 1细胞生长抑制率为 3.4％、 5.2％和 5.9％，对 HDMEC细胞生长抑制率为 39.4％、 65.3％和 89.7％； (2)rhAGN剂量为 50 mg· (kg· d)－ 1、 100mg· (kg· d)－ 1和 200mg· (kg· d)－ 1时的抑瘤率分别为 32.3％、 64.0％和 83.2％。 结论： rhAGN在体外对 CNE 1细胞增殖无明显抑制作用，在体内能显著抑制 CNE 1鼻咽癌移植瘤的生长，具有潜在的应用前景。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 MTT法 重组人血管抑素 rhAGN
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重组人血管抑素(rhAGN)包涵体变性与复性初探
9
作者 田亚平 邵玲莉 金坚 《药物生物技术》 CAS CSCD 2005年第2期85-89,共5页
在优化的培养条件下,进行rhAGN5L罐发酵,菌体干重由原摇瓶发酵的3.02g/L增加到8.06g/L,表达量依然稳定在35%;对所产生的包涵体进行溶解变性研究,确定较佳变性缓冲液组成为8mol/L尿素,50mmol/LTrisHCl,20mmol/LDTT,pH值8.0;凝胶过滤色谱... 在优化的培养条件下,进行rhAGN5L罐发酵,菌体干重由原摇瓶发酵的3.02g/L增加到8.06g/L,表达量依然稳定在35%;对所产生的包涵体进行溶解变性研究,确定较佳变性缓冲液组成为8mol/L尿素,50mmol/LTrisHCl,20mmol/LDTT,pH值8.0;凝胶过滤色谱复性效果相对较好,蛋白浓度4.28μg/ml(IC50)时对HEMC细胞的抑制活性达50.1%。 展开更多
关键词 重组人血管抑素 包涵体 变性 复性
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重组人血管抑素的生物学活性研究 被引量：1
10
作者 杨炳华 何杨 +1 位作者 赵益明 金坚 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第4期732-734,766,898,共5页
目的通过培养人微血管内皮细胞(HMEC-1)及建立鸡胚尿囊膜模型(CAM)观察重组人血管抑素(rhAS)的生物学活性。方法将不同浓度的rhAS加入含HMEC-1的培养瓶中,培养48h后,用MTT法检测其对细胞的抑制率;用乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性测定检测rhA... 目的通过培养人微血管内皮细胞(HMEC-1)及建立鸡胚尿囊膜模型(CAM)观察重组人血管抑素(rhAS)的生物学活性。方法将不同浓度的rhAS加入含HMEC-1的培养瓶中,培养48h后,用MTT法检测其对细胞的抑制率;用乙酰胆碱酯酶(AchE)的活性测定检测rhAS诱导HMEC-1凋亡的作用;用CAM模型检测rhAS对血管的抑制作用。结果 rhAS在体外可显著抑制HMEC-1细胞的增殖;在体内则可明显抑制CAM上血管的生成。通过AchE活性测定,发现rhAS既可抑制HMEC-1细胞的增殖,也可诱导HMEC-1细胞凋亡,其作用的不同与rhAS剂量相关。结论 rhAS是一个较有前景的抗肿瘤血管药物。 展开更多
关键词 重组人血管抑素 人微血管内皮细胞 鸡胚尿囊膜模型 生物学活性
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人血管抑素K1-3在毕赤酵母胞内表达的研究
11
作者 张利芳 胡娴娴 +2 位作者 于洪涛 吕军 王惠琴 《包头医学院学报》 CAS 2006年第4期368-370,共3页
目的:构建人血管抑素K1-3的重组酵母胞内表达质粒PH IL-D2/K1-3,获得重组目的蛋白。方法:从胎儿肝脏组织用RT-PCR方法扩增人血管抑素K1-3目的基因,克隆至酵母胞内表达质粒PH IL-D2中,线性化后转化到毕赤酵母GS115胞内,经PCR和Sourthern... 目的:构建人血管抑素K1-3的重组酵母胞内表达质粒PH IL-D2/K1-3,获得重组目的蛋白。方法:从胎儿肝脏组织用RT-PCR方法扩增人血管抑素K1-3目的基因,克隆至酵母胞内表达质粒PH IL-D2中,线性化后转化到毕赤酵母GS115胞内,经PCR和Sourthern杂交筛选出阳性转化子,并用甲醇诱导表达。表达产物进行SDS-PAGE(12%)和W estern b lot检测,经赖氨酸亲和层析柱纯化后,用Lowry法测定蛋白含量,并进行生物活性测定。结果:SDS-PAGE和W estern b lot结果显示,表达蛋白质的相对分子量为30kd左右,低糖基化。Lowry法测定蛋白表达量为6.8mg/L。活性测定实验表明重组血管抑素能特异抑制人血管内皮细胞的增殖。结论:在毕赤酵母GS115胞内成功表达了人血管抑素K1-3重组蛋白。 展开更多
关键词 人血管抑素K1-3 PHIL—D2 毕赤酵母GS115 表达
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血管抑素蛋白质真核胞内表达质粒的构建
12
作者 张利芳 张亚琼 +1 位作者 邢少姬 韩丽红 《包头医学院学报》 CAS 2009年第4期14-15,共2页
目的:克隆人血管抑素K1-3基因,构建重组酵母胞内表达质粒PHIL-D2/K1-3。方法:从胎儿肝脏组织用反转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)扩增人血管抑素K1-3目的基因,克隆至酵母胞内表达质粒PHIL-D2中,线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,用Sourth... 目的:克隆人血管抑素K1-3基因,构建重组酵母胞内表达质粒PHIL-D2/K1-3。方法:从胎儿肝脏组织用反转录-聚合酶链式反应技术(RT-PCR)扩增人血管抑素K1-3目的基因,克隆至酵母胞内表达质粒PHIL-D2中,线性化后转化毕赤酵母GS115菌株,用Sourthern杂交筛选获得阳性重组转化子。结果:用RT-PCR方法成功扩增到750 bp大小的人血管抑素K1-3基因片段,并正向插入毕赤酵母染色体基因组。结论:人血管抑素K1-3基因成功整合到毕赤酵母GS115基因组。 展开更多
关键词 人血管抑素K1-3 PHIL—D2 毕赤酵母GS115
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重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素对1型糖尿病大鼠肾脏TGF-β_1和VEGF表达的影响
13
作者 应长江 林红晓 李伟 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期2826-2829,共4页
目的尾静脉注射重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素(rAAV-AS),研究rAAV-AS在1型糖尿病大鼠肾脏中表达以及其对转化生长因子(TGF-β)1和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组,n=10),其余大鼠使... 目的尾静脉注射重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素(rAAV-AS),研究rAAV-AS在1型糖尿病大鼠肾脏中表达以及其对转化生长因子(TGF-β)1和血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响。方法清洁级SD雄性大鼠随机分为正常组(NC组,n=10),其余大鼠使用链脲佐菌素(STZ)60 mg/kg腹腔注射诱导糖尿病模型,分为糖尿病组(DM组,n=10),重组腺相关病毒空载体组(rAAV-0组,n=10),重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素组(AS组,n=10,2×1012VG/kg);尾静脉注射给药,8 w末,检测各组大鼠尿微量白蛋白变化,免疫印迹法检测肾组织中AS的表达以及TGF-β1和VEGF的表达。结果 DN组基本不表达AS,给予rAAV-AS治疗后,大鼠肾组织中AS表达明显增多(P<0.05);DN组的MAU、Glu、HbA1c明显增高,给予rAAV-AS治疗后,MAU明显降低(P<0.05);光镜:与NC组大鼠相比,DN组病变较明显:肾小球细胞数显著增多,毛细血管袢塌陷,管腔闭塞,肾小球明显体积增大,肾小球基底膜增厚、淋巴细胞数量增多,肾小管肿胀、变性、空泡形成,肾间质可见大量淋巴细胞和单核巨噬细胞浸润。rAAV-0组较DN组未见改善,AS组上述病变较DN组有改善,可见肾小球细胞数教多,毛细血管腔轻度狭窄,肾小管-间质见少量淋巴细胞浸润。免疫组化结果:DN组的TGF-β1和VEGF表达明显增多,rAAV-AS治疗后,TGF-β1和VEGF表达减少(P<0.05)。结论重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素能在一定时间内在肾组织中表达;重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素对大鼠糖尿病肾病具有保护作用,且这种保护作用可能通过降低TGF-β1和VEGF的表达。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 重组腺相关病毒载体介导的人血管抑素
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血管能抑素重组基因表达载体抗肺癌效应研究 被引量：7
14
作者 李玉英 钱桂生 +4 位作者 黄桂君 余时沧 王兴友 陈维中 李淑平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2004年第4期257-262,共6页
目的:通过构建人血管能抑制素(Canstatin)真核表达载体,转染裸鼠肿瘤局部,探索其对肺癌治疗作用。方法: RT-PCR法获取Canstatin cDNA全长,定向克隆法构建Canstatin基因表达载体pCMV-Script-Cans。荧光定量PCR法检测转染 细胞Canstatin m... 目的:通过构建人血管能抑制素(Canstatin)真核表达载体,转染裸鼠肿瘤局部,探索其对肺癌治疗作用。方法: RT-PCR法获取Canstatin cDNA全长,定向克隆法构建Canstatin基因表达载体pCMV-Script-Cans。荧光定量PCR法检测转染 细胞Canstatin mRNA的表达。台盼蓝拒染法、3H-TdR掺入法检测细胞生长增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。基因枪转染重组 载体到荷瘤裸鼠肿瘤局部,CD31单克隆抗体微血管记数检测抗血管生成效应。结果:成功构建pCMV-Script-Cans重组载体, 并在转染的细胞株中检测到Canstatin mRNA的表达。人脐静脉内皮HUV-EC-C细胞株pCMV-Script-Cans质粒转染组比空载 体组3H-FdR掺入量明显减低(P<0.01),细胞凋亡率明显增加(P<0.01),重组载体转染肿瘤生长缓慢,微血管数显著低于对 照组(P<0.01)。结论:pCMV-Script-Cans重组载体能在转染的哺乳动物细胞中表达Canstatin,并抑制内皮细胞增殖,而且有 很好的抗肺癌血管生成作用。 展开更多
关键词 人血管能抑素 血管生成 肿瘤治疗 肺癌 荧光定量PCR
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肝动脉化疗栓塞加重组人血管内皮抑素治疗原发性肝癌临床观察 被引量：4
15
作者 麦聪 唐云强 +2 位作者 洪健 汤凯雯 唐辉 《亚太传统医药》 2012年第7期150-151,共2页
目的:探讨肝动脉化疗栓塞术联合重组人血管内皮抑素(恩度)治疗原发性肝癌的临床疗效。方法:回顾性分析80例原发性肝癌患者的临床资料,均行肝动脉栓塞术治疗,其中42例患者术中加用重组人血管内皮抑素,记为观察组,另38例患者术后常规治疗... 目的:探讨肝动脉化疗栓塞术联合重组人血管内皮抑素(恩度)治疗原发性肝癌的临床疗效。方法:回顾性分析80例原发性肝癌患者的临床资料,均行肝动脉栓塞术治疗,其中42例患者术中加用重组人血管内皮抑素,记为观察组,另38例患者术后常规治疗,术后随访3个月,应用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清VEGF,比较两组患者的近期缓解率及VEGF水平变化。结果:观察组近期缓解率高、VEGF水平明显降低,与对照组患者比较有明显差异(P<0.05)。结论:肝动脉栓塞联合恩度能明显改善患者近期缓解率,减少肿瘤血供,提高肝动脉栓塞的疗效,值得在临床推广。 展开更多
关键词 肝动脉栓塞 原发性肝癌 人血管内皮抑素 临床疗效
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人血管能抑素canstatin基因的分子克隆 被引量：2
16
作者 何小平 李兆申 +4 位作者 屠振兴 潘雪 龚燕芳 高军 金晶 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第10期2329-2332,共4页
目的:克隆血管能抑素canstatin基因,测定并分析其基因序列.方法:从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出canstatin基因,克隆进载体pUCm-T获得重组质粒pUCm-T/canstatin,转化E.coliDH5α,挑选出阳性克隆,测定基... 目的:克隆血管能抑素canstatin基因,测定并分析其基因序列.方法:从人胎盘组织中提取总RNA,经逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增出canstatin基因,克隆进载体pUCm-T获得重组质粒pUCm-T/canstatin,转化E.coliDH5α,挑选出阳性克隆,测定基因序列.结果:从人胎盘组织中提取出RNA,10g/L琼脂糖凝胶电泳显示3条清晰条带,分别对应28S,18S,5S.分光光度计测定总RNA的A260=0.879,A280=0.410,A260:A280=2.095,总RNA浓度为1.8g/L.RT-PCR扩增产物与预期的目的基因canstatin长度一致.RT-PCR产物与载体pUCm-T连接过夜后,转化E.coliDH5α,在LB平板上生长出蓝色和白色菌落.挑选6个白色菌落做酶切鉴定,其中一个菌落经BamHI酶切后,只出现1条特异性条带,位置与酶切前质粒相近,而经HindⅢ酶切后,出现2条特异性条带,其中1条与酶切前质粒位置相近,另1条与目的基因位置基本一致,证实为阳性克隆.测定该阳性克隆基因序列,结果显示其与Genbank中公布的canstatin基因序列完全一致.结论:成功克隆了canstatin基因,为进一步研究其抗肿瘤作用打下基础. 展开更多
关键词 人血管能抑素 canstatin基因 分子克隆 基因序列 逆转录-聚合酶链式反应
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人血管内皮抑素的基因克隆和表达载体构建及纯化 被引量：1
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作者 李彪 朱承谟 +1 位作者 于金德 Vimla Band 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2003年第2期103-106,共4页
目的 克隆人血管内皮抑素基因(endostatin),纯化其表达蛋白并初步检测纯化蛋白的生物学活性。方法 用PCH技术从正常成人肝cDNA库扩增出人血管内皮抑素基因,将其克隆进pBluescript中测定其核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体pET-22b... 目的 克隆人血管内皮抑素基因(endostatin),纯化其表达蛋白并初步检测纯化蛋白的生物学活性。方法 用PCH技术从正常成人肝cDNA库扩增出人血管内皮抑素基因,将其克隆进pBluescript中测定其核苷酸序列。构建大肠杆菌分泌性表达载体pET-22b(+)-endostatin-6xHis,IPTG诱导表达,经Ni^(2+)-IDA Sepharose 6B亲和纯化该表达蛋白,并采用血管内皮细胞增殖抑制试验检测其活性。结果 经PCR扩增成功获得55lbp的人血管内皮抑素基因,测序正确,在大肠杆菌中表达后,该表达蛋白的表达量占菌体总蛋白的10％。SDS-PAGE和Western blot显示其分子最为21kd。经亲和纯化后的endostatin-6xHis纯度可达90％,得率为0.3mg/100ml,并且具有抑制血管内皮细胞增殖的活性,达到50％的抑制率需endostatin-6xHis浓度为600ng/ml。结论 endostatin基因克隆、表达和纯化的成功,为采用抗血管生成方法治疗裸鼠肿瘤模型和肿瘤病人的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人血管内皮抑素 克隆 构建 纯化
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人血管能抑素抑制小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、转移及血管新生 被引量：1
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作者 陆卫忠 肖飞 +4 位作者 黄桂君 李玉英 李瑾 陈维中 钱桂生 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期653-657,共5页
目的:探讨人血管能抑素(canstatin)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、转移和血管新生的影响。方法:将pCMV-Script/canstatin及空载体pCMV-Script通过电穿孔的方法转染A549细胞,G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR检测转染后细胞中canstatin mRNA... 目的:探讨人血管能抑素(canstatin)对小鼠Lewis肺癌移植瘤生长、转移和血管新生的影响。方法:将pCMV-Script/canstatin及空载体pCMV-Script通过电穿孔的方法转染A549细胞,G418筛选获得阳性克隆。RT-PCR检测转染后细胞中canstatin mRNA的表达,Western blotting检测转染后细胞中canstatin蛋白的表达。建立Lewis肺癌小鼠移植瘤模型,观察pCMV-Script/canstatin组A549细胞培养上清对小鼠Lewis肺癌移植瘤的治疗作用,免疫组化检测各治疗组荷瘤小鼠移植瘤的微血管密度。结果:pCMV-Script/canstatin转染A549细胞在G418筛选后成功形成克隆,转染的A549细胞能有效表达can-statin mRNA和蛋白。pCMV-Script/canstatin治疗组小鼠肿瘤体积明显小于pCMV-Script组和NS组[(1.47±0.21)cm^3vs(2.43±0.15)cm^3、(2.53±0.18)cm^3,P<0.01);pCMV-Script/canstatin组、pCMV-Script组和NS组的肺转移结节数分别为(3.00±1.00)、(7.80±1.48)、(7.60±2.41)个,pCMV-Script/canstatin组肿瘤转移受到显著的抑制(P<0.01);pCMV-Script/canstatin组小鼠的肿瘤组织微血管数明显少于pCMV-Script组和NS组[(84.40±8.83)vs(188.68±11.15)、(190.24±12.91)个,P<0.01]。结论:pCMV-Script/canstatin能在A549细胞中表达并分泌至细胞外,canstatin可明显抑制Lewis肺癌移植瘤的生长、转移和血管新生。 展开更多
关键词 人血管能抑素 转染 血管生成 LEWIS肺癌
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人血管能抑素免疫兔抗血清制备及其特性测定
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作者 贺国安 罗进贤 +2 位作者 李瑞芳 张添元 吴群悦 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期134-136,共3页
纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS＿PAGE分离,切胶回收目的蛋白,与弗氏不完全佐剂充分乳化后,进行多点皮下注射免疫新西兰白兔,制备兔抗人血管能抑素抗血清,抗血清去除交叉反应抗体后,进行WesternBlotting分析抗血清与人血管能抑素及其... 纯化的人血管能抑素包涵体进行SDS＿PAGE分离,切胶回收目的蛋白,与弗氏不完全佐剂充分乳化后,进行多点皮下注射免疫新西兰白兔,制备兔抗人血管能抑素抗血清,抗血清去除交叉反应抗体后,进行WesternBlotting分析抗血清与人血管能抑素及其N端和C端片段的抗原抗体反应特性。结果表明,经过4次加强免疫后,获得了高效价的兔抗人血管能抑素抗血清。抗血清去除交叉反应抗体后,WesternBlotting分析表明,它能与人血管能抑素发生特异的抗原抗体反应,同时还能与人血管能抑素的N端片段和C端片段发生特异性较弱的抗原抗体反应。证明制备的兔抗人血管能抑素抗血清能应用于人血管能抑素及其N端和C端片段免疫学研究中。 展开更多
关键词 人血管能抑素 N端片段 C端片段 抗血清 兔 免疫 特性测定
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人血管内皮抑素毕赤酵母真核系统的建立
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作者 周东风 张忠广 《中国普外基础与临床杂志》 CAS 2007年第4期417-419,共3页
目的构建人血管内皮抑素(ES)毕赤酵母真核表达系统。方法利用RT-PCR技术从人体肝脏组织扩增出ES基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9中,酶切鉴定并进行DNA测序鉴定。结果成功克隆ES基因并筛选出pPIC9载体中的ES阳性克隆,测序证实其序列与已... 目的构建人血管内皮抑素(ES)毕赤酵母真核表达系统。方法利用RT-PCR技术从人体肝脏组织扩增出ES基因,插入毕赤酵母表达载体pPIC9中,酶切鉴定并进行DNA测序鉴定。结果成功克隆ES基因并筛选出pPIC9载体中的ES阳性克隆,测序证实其序列与已报道的ES基因序列一致。结论用分子生物学方法构建ES毕赤酵母真核表达载体的成功,使高效表达ES蛋白成为可能,并为采用抗血管生成方法治疗恶性肿瘤的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人血管内皮抑素 克隆 构建 酵母
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