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人蛋白CcDNA基因的克隆及序列分析 被引量:3
1
作者 贾莉玮 吕茂民 +3 位作者 沈永才 赵保全 张亚东 章金刚 《生物技术通报》 CAS CSCD 2003年第4期26-28,32,共4页
为实现人蛋白CcDNA在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性 ,针对人蛋白CcDNA序列设计引物 ,运用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)从人胎肝总RNA中钓取人蛋白CcDNA ,将其克隆入 pIRESneo载体中 ,通过酶切和PCR鉴定出重组体并进行测序... 为实现人蛋白CcDNA在哺乳动物细胞中的表达以及研究其生物学特性 ,针对人蛋白CcDNA序列设计引物 ,运用逆转录聚合酶链反应 (RT PCR)从人胎肝总RNA中钓取人蛋白CcDNA ,将其克隆入 pIRESneo载体中 ,通过酶切和PCR鉴定出重组体并进行测序分析。结果表明 ,获得大小为 1386bp的人蛋白CcDNA基因 ,成功构建人蛋白CcDNA载体 pIRES/hPC ,为进一步进行人蛋白CcDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白c cDNA基因 克隆 序列分析 逆转录聚合酶链反应
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人蛋白C cDNA突变体的设计、克隆与序列分析 被引量:2
2
作者 贾莉玮 吕茂民 +3 位作者 徐斯日古愣 沈永才 赵保全 章金刚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2003年第5期257-260,共4页
目的 通过对人蛋白C cDNA的定点突变,构建人蛋白C突变体cDNA,以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物。方法 针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法,从人胎肝... 目的 通过对人蛋白C cDNA的定点突变,构建人蛋白C突变体cDNA,以期实现从哺乳动物细胞中直接表达出具有生物活性的人蛋白C产物。方法 针对人蛋白C cDNA序列设计引物以引入突变序列,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和重组PCR方法,从人胎肝总RNA中分别钓取人蛋白C的重链和轻链,经重组PCR反应将两者连接,然后将其克隆入pGEM-T载体中,经酶切和PCR鉴定后进行测序。结果 经RT-PCR和重组PCR扩增获得大小为1374 hp的cDNA片段,并成功构建了人蛋白C cDNA突变体的克隆质粒pGEM-T/mhPC,序列分析证实所引入的编码8个氨基酸短肽的核苷酸序列突变位点正确取代了人蛋白C的活性肽,获得人蛋白C突变体cD-NA的克隆。结论 已成功进行了人蛋白C cDNA的突变,获得了人蛋白c cDNA突变体的克隆,为进一步进行人蛋白C突变体cDNA的表达和活性鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白c cDNA 突变体 设计 克隆 序列分析 定点突变
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新疆哈萨克族人蛋白C活性测定及临床意义
3
作者 戴晓宁 阿依古丽 赵义刚 《新疆医学》 2005年第5期138-139,共2页
蛋白C是蛋白C系统的重要组成,是微循环抗血栓形成的主要血液凝固调节蛋白之一,是一种重要的抗凝蛋白.目前认为PC的检测是易栓症诊断必不可少的指标.可作为寻找静脉血栓或动脉血栓的形成病因,诊断高凝状态的存在,肝脏病变和维生素K缺乏... 蛋白C是蛋白C系统的重要组成,是微循环抗血栓形成的主要血液凝固调节蛋白之一,是一种重要的抗凝蛋白.目前认为PC的检测是易栓症诊断必不可少的指标.可作为寻找静脉血栓或动脉血栓的形成病因,诊断高凝状态的存在,肝脏病变和维生素K缺乏对凝血的影响及先天性PC缺乏症分类的重要依据之一.本地区为少数民族地区,哈萨克人口众多,哈萨克族人种及饮食生活习惯与汉族有着明显的不同.我们通过对400例健康哈萨克族人进行PC活性测定,以了解哈萨克族PC的活性水平和先天性PC缺陷状况,且建立本地区哈萨克族PC活性的参考值范围. 展开更多
关键词 新疆哈萨克族 活性测定 蛋白c 临床意义 维生素K缺乏 少数民族地区 饮食生活习惯 蛋白c系统 抗血栓形成
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人蛋白C转基因小鼠的建立及乳腺表达
4
作者 赵宝全 章金刚 +6 位作者 董朝辉 贾莉玮 沈永才 吕茂民 姚站馨 李伟静 孙曼霁 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期291-293,共3页
目的为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物。方法采用分步克隆的方法,构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC。将该质粒系统鉴定后,用PvuⅠ+SmaⅠ双酶切,回收4·6kb的片段(WAP-hPC-PolyA)。通过显微... 目的为了获得乳腺定位表达人蛋白C(hPC)的转基因动物。方法采用分步克隆的方法,构建大鼠乳清酸蛋白(WAP)启动子调控的人蛋白C质粒,命名为pWPC。将该质粒系统鉴定后,用PvuⅠ+SmaⅠ双酶切,回收4·6kb的片段(WAP-hPC-PolyA)。通过显微注射技术,将其注入昆明小鼠受精卵雄原核内;共注受精卵810枚,存活640枚,移植给28只假孕母鼠,怀孕的18只母鼠共产仔81只。结果提取鼠尾基因组DNA进行PCR检测,34只阳性,再经Southernblot检测,其中20只整合阳性;将7只整合阳性母鼠传代,产仔7日后收集乳汁,进行ELISA检测,结果均有表达。结论已成功建立了人蛋白C转基因鼠乳腺生物反应器,为hPC乳腺表达研究奠定了基础。 展开更多
关键词 蛋白c 转基因小鼠 乳腺生物反应器 乳清酸蛋白
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人蛋白C突变体转基因小鼠的建立及乳腺表达
5
作者 赵宝全 章金刚 +5 位作者 李前 付爱玲 贾莉玮 郭艳茹 周建平 孙曼霁 《中国药理通讯》 2005年第3期42-43,共2页
蛋白C(PC)是体内重要的抗凝物质,对静脉血栓扩大、动脉血栓形成、脓毒血症、内毒素血症和弥散性血管内凝血等均具有预防和治疗作用。近年来研究发现蛋白C还具有抗炎作用。血栓疾病及其并发症严重威胁着人类的健康,每年约有1300万人... 蛋白C(PC)是体内重要的抗凝物质,对静脉血栓扩大、动脉血栓形成、脓毒血症、内毒素血症和弥散性血管内凝血等均具有预防和治疗作用。近年来研究发现蛋白C还具有抗炎作用。血栓疾病及其并发症严重威胁着人类的健康,每年约有1300万人死于血栓疾病及其并发症。脓毒症的死亡率高达30—50%,全球每天有1400人死于严重脓毒症,每年其治疗费用多达76亿美元。所以,进行PC的研究不仅具有重要的医学意义,还具有广阔的市场前景:目前,治疗用PC多为血浆中提取的浓缩剂,人血浆的PC含量较低(3~5mg/L),从血浆中提取PC数量有限,且PC浓缩剂仍存在病毒污染的可能性。因此,利用生物反应器生产重组人蛋白C(rhPC)成为人们关注的热点。 展开更多
关键词 蛋白c 转基因小鼠 突变体 弥散性血管内凝血 严重脓毒症 乳腺 动脉血栓形成 治疗作用 血栓疾病
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人蛋白C浓缩物的制备及临床应用
6
作者 焦丽华 干科 +2 位作者 余伟 代旭兰 刘文芳 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第9期782-785,共4页
关键词 蛋白c 制备 临床应用
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全身性感染发病机制及治疗的研究进展
7
作者 徐笑益 方向明 《国外医学(麻醉学与复苏分册)》 2005年第1期15-18,共4页
全身性感染是指微生物入侵机体感染后所致的全身性炎症反应综合征。病原微生物的病原相关分子模式(pathogen associatedmolecularpattern ,PAMP)通过与免疫细胞的Toll样受体相互作用,激活跨膜信号转导过程,调控炎症介质基因表达,导致免... 全身性感染是指微生物入侵机体感染后所致的全身性炎症反应综合征。病原微生物的病原相关分子模式(pathogen associatedmolecularpattern ,PAMP)通过与免疫细胞的Toll样受体相互作用,激活跨膜信号转导过程,调控炎症介质基因表达,导致免疫炎症反应失控、促炎/抗炎反应不平衡,进而使全身性感染及其后续症发生、发展。Toll样受体的多态性与全身性感染发生发展相关。活化型重组人蛋白C、早期支持治疗等辅助治疗有助于降低严重感染及其后续症的死亡率,但以PAMP识别受体、炎症介质为靶向将赋予全身性感染的发病机制和治疗新启迪。 展开更多
关键词 全身性感染 发病机制 全身性炎症反应综合征 Toll样受体 病原相关分子模式 pattern 促炎/抗炎反应 跨膜信号转导 免疫炎症反应 炎症介质 病原微生物 相互作用 免疫细胞 基因表达 发生发展 蛋白c 严重感染 辅助治疗 支持治疗
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重组人蛋白C的研究进展 被引量:2
8
作者 沈永才 章金刚 +1 位作者 倪道明 裴雪涛 《生物技术通讯》 CAS 2002年第6期453-456,共4页
人蛋白C具有抗凝、促纤维蛋白溶解和潜在的抗炎作用,本文在简要介绍了人蛋白C的结构、功能的基础上,重点对哺乳动物细胞和转基因动物表达重组人蛋白C的研究进展作了综述。
关键词 重组蛋白c 研究进展 基因重组 转基因动物
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重组人蛋白C在HEK293细胞中的表达与鉴定 被引量:1
9
作者 贾莉玮 吕茂民 +4 位作者 徐斯日古楞 沈永才 于群 张亚东 章金刚 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2005年第4期294-296,共3页
目的获得转染人蛋白CcDNA的工程细胞株,实现重组蛋白C的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES-hPC用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株,收集无血清培养上清,浓缩后进行鉴定。结果经G41... 目的获得转染人蛋白CcDNA的工程细胞株,实现重组蛋白C的表达。方法将构建好的重组表达载体pIRES-hPC用脂质体介导的方法转染HEK293细胞,经G418加压筛选、细胞有限稀释法等获得克隆细胞株,收集无血清培养上清,浓缩后进行鉴定。结果经G418筛选得到了21株克隆化细胞,SDS-PAGE和Westernblot鉴定表明,表达产物含有人蛋白C,且具有抗凝活性。结论在哺乳动物细胞中已成功表达重组人蛋白C,为进一步深入研究及产业化奠定了基础。 展开更多
关键词 重组蛋白c HEIQ93细胞中 表达 鉴定 抗凝活性
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重组人蛋白C在CHO/dhfr^+细胞中的表达与分析
10
作者 张亚东 陈琳 卜凤荣 《军事医学科学院院刊》 CSCD 北大核心 2002年第2期102-104,108,共4页
目的 :人蛋白C具有重要的抗凝功能 ,与复发性血栓性疾病、蛋白C缺陷症、创伤等有重要关系。血源蛋白C成本高、工艺复杂且存在纯度、稳定性、安全性等问题 ,研制重组人蛋白C具有必要性。目前尚无此类产品上市。本研究拟从人肝细胞中克隆... 目的 :人蛋白C具有重要的抗凝功能 ,与复发性血栓性疾病、蛋白C缺陷症、创伤等有重要关系。血源蛋白C成本高、工艺复杂且存在纯度、稳定性、安全性等问题 ,研制重组人蛋白C具有必要性。目前尚无此类产品上市。本研究拟从人肝细胞中克隆蛋白C的cDNA ,构建人蛋白C的哺乳动物细胞表达载体 ,实现重组人蛋白C在CHO dhfr+ 中的表达。方法 :用RT_PCR从人胎肝细胞mRNA中扩增人蛋白C的全长cDNA片段 ,将之克隆入pGEM_T载体并测序。目的片段插入真核表达载体pIRESneo以构建重组表达质粒。磷酸钙共沉淀法转染CHO dhfr+ 细胞 ,G4 18筛选抗性克隆。Western印迹法检测细胞培养上清。HitrapQ进行色谱纯化。表达产物经蛙蛇蛇毒激活后以APTT法测定抗凝活性。结果 :RT_PCR扩增到长 1386bp的DNA片段 ,序列与已报道的人蛋白C一致。所构建的表达质粒pIREShPC转染CHO dhfr+ 细胞 ,经G4 18加压筛选得到 7株表达细胞。Western印迹法检测发现表达产物能与抗人蛋白C单克隆抗体结合 ,相对分子质量与人蛋白C一致。HitrapQ纯化重组蛋白回收率 >6 0 %。表达产物抗凝活性略低于天然人蛋白C。 展开更多
关键词 重组蛋白c cHI/dhfr^+细胞 基因表达 单克隆抗体
原文传递
人血浆蛋白C的酶联免疫测定法的建立 被引量:3
11
作者 李和 于劼 +1 位作者 肖小璞 王海龄 《中国输血杂志》 CAS CSCD 1995年第1期9-11,共3页
人血浆蛋白C(Human protein C,HPC)是维生素K依赖蛋白的一种,在调节血凝和纤溶过程中起着重要作用。HPC的缺乏,可以导致多种血栓性疾病,如静脉血栓、脑栓塞、新生儿突发性紫癜、严重中风和播散性血管内凝血(DIC)等。因此,在研究HPC缺乏... 人血浆蛋白C(Human protein C,HPC)是维生素K依赖蛋白的一种,在调节血凝和纤溶过程中起着重要作用。HPC的缺乏,可以导致多种血栓性疾病,如静脉血栓、脑栓塞、新生儿突发性紫癜、严重中风和播散性血管内凝血(DIC)等。因此,在研究HPC缺乏的临床生理病理,以及在HPC制剂的制备和临床应用方面,HPC抗原(HPC:Ag)水平的检测都有着重要的意义。 国外目前采用3种方法测定HPC:Ag,即ELISA法、放射免疫测定法和火箭电泳法。放射免疫测定法所需仪器设备复杂,一般实验室难以开展;火箭电泳法特异性差,敏感性低,并且受抗血清制备规模的限制。 展开更多
关键词 血浆蛋白c 酶联免疫测定 单克隆抗体
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人血浆蛋白C的纯化与鉴定 被引量:3
12
作者 沈永才 孙文种 +3 位作者 吕茂民 章金刚 倪道明 裴雪涛 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2004年第6期369-371,共3页
目的 建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法 利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非... 目的 建立人血浆蛋白C的纯化与鉴定方法。方法 利用DEAE SephadexA 5 0代替氯化钡 ,对血浆进行预处理 ,再经DEAE SepharoseFF离子交换和肝素 SepharoseCL 6B亲和层析进行分离纯化 ,用活化的部分凝血活酶时间 (APTT)测定组分活性 ,非还原型SDS PAGE测定其相对分子质量 ,Westernblot鉴定其特异性。结果获得相对分子质量为 6 2 0 0 0的蛋白条带 ,此条带可与人蛋白C单克隆抗体发生特异性反应。结论 已成功地从血浆中分离到蛋白C ,为其规模化生产奠定了基础。 展开更多
关键词 血浆蛋白c 纯化 分离 鉴定
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抗人血浆蛋白C单克隆抗体研制的初步报告 被引量:1
13
作者 王海龄 李和 +2 位作者 于劼 肖小璞 钟峻 《中国输血杂志》 CAS CSCD 1995年第1期2-5,共4页
用物理化学方法纯化的人血浆蛋白C(HPC)免疫小鼠,制备了8株分泌抗HPC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为PC01~PC08。各株杂交瘤细胞都具有长期稳定的抗体分泌能力,其中PC03为构象特异性单克隆抗体,二价金属离子对其与HPC的结合有明... 用物理化学方法纯化的人血浆蛋白C(HPC)免疫小鼠,制备了8株分泌抗HPC单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为PC01~PC08。各株杂交瘤细胞都具有长期稳定的抗体分泌能力,其中PC03为构象特异性单克隆抗体,二价金属离子对其与HPC的结合有明显影响;PC02和PC03对活性蛋白C的酶活性有促进作用;而PC04具有抑制作用。 展开更多
关键词 血浆蛋白c 单克隆抗体 研制
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人活化蛋白C和屈曲可金α的药理作用和应用价值
14
作者 史美甫 熊方武 《中国药师》 CAS 2003年第11期690-692,共3页
1 人活化蛋白C(CTC-111) 日本化学及血清疗法研究所和帝人公司共同开发并于2000年9月22日在日本获准生产人活化蛋白C[1],继而于2001年1月首次在日本上市.商品名为Anact C.
关键词 活化蛋白c 屈曲可金α 药理作用 临床应用 先天性蛋白c缺乏症 急性肺血栓栓塞症
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固相化HEK细胞在无血清培养基中高效表达重组人活性蛋白C
15
作者 李征 曾献武 《微生物学免疫学进展》 2011年第1期28-31,共4页
研究固相化HEK工程细胞的培养和产生rhAPC的水平。先将HEK细胞由贴壁适应为无血清悬浮培养,再用海藻酸钙固定,并在无血清培养基中悬浮培养(最高约为27mg/L)。固相细胞动态培养的表达水平高于细胞静态悬浮培养的表达水平(最高约为50mg/L... 研究固相化HEK工程细胞的培养和产生rhAPC的水平。先将HEK细胞由贴壁适应为无血清悬浮培养,再用海藻酸钙固定,并在无血清培养基中悬浮培养(最高约为27mg/L)。固相细胞动态培养的表达水平高于细胞静态悬浮培养的表达水平(最高约为50mg/L)。固相细胞动态培养可实现细胞的高密度培养,得到较高的表达水平。 展开更多
关键词 固相化 HEK细胞 无血清培养 活性蛋白c
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关于Xigris
16
《中国处方药》 2003年第3期27-27,共1页
关键词 XIGRIS 生物工程产品 氨基酸 生物活性 蛋白c
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脓毒症的干预治疗研究进展 被引量:5
17
作者 徐发良 龙小平 《人民军医》 2006年第2期111-113,共3页
关键词 脓毒症 干预治疗 重组活化蛋白c
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重组人活化蛋白质C对重症Sepsis的功效和安全性 被引量:6
18
作者 黄晨曦 《中国处方药》 2003年第3期24-26,共3页
重症Sepsis,定义为伴有急性器官功能障碍的Sepsis,是由感染引起的非特异性的炎症和促凝反应。尽管重症护理取得进展,但是重症Sepsis死亡率仍然达30%~50%。在美国,每年大约发生750,000例Sepsis,其中有225,000例患者死亡。
关键词 重组活化蛋白c 重症Sepsis 功效 安全性 死亡
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重组人活化蛋白C治疗儿童脓毒症休克的临床观察 被引量:4
19
作者 沈萍 《世界临床药物》 CAS 2014年第9期547-549,共3页
目的观察重组人活化蛋白C(rhAPC)对儿童脓毒症休克的疗效及安全性。方法选择我院儿科及重症监护病房2011年1月-2014年3月间收治的60例脓毒症休克患儿,随机分为对照组(n=30)和rhAPC组(n=30)。对照组患儿给予对症治疗,rhAPC组患儿在此基... 目的观察重组人活化蛋白C(rhAPC)对儿童脓毒症休克的疗效及安全性。方法选择我院儿科及重症监护病房2011年1月-2014年3月间收治的60例脓毒症休克患儿,随机分为对照组(n=30)和rhAPC组(n=30)。对照组患儿给予对症治疗,rhAPC组患儿在此基础上静脉注射rhAPC 24μg/(kg·h),连续给药4 d。2组患儿于治疗前及治疗后检测血浆纤维蛋白原和D-二聚体水平及炎症因子IL-6、IL-8、TNF-α、动脉血氧饱和度(SaO2)和中心静脉压(CVP)。结果 rhAPC组患儿治疗后血浆纤维蛋白原和D-二聚体水平及炎症因子IL-6、IL-8和TNF-α均显著低于对照组,而SaO2和CVP高于对照组,其差异均有统计学意义(P<0.05)。rhAPC组1例患儿发生出血性膀胱炎。结论 rhAPC能有效抑制脓毒症休克患儿的炎症反应,降低血液高凝状态。 展开更多
关键词 重组活化蛋白c 儿童 脓毒症休克
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改良双抗体夹心酶联免疫法测定重组人活性蛋白C含量的研究 被引量:3
20
作者 李征 毕跃东 《微生物学免疫学进展》 2006年第4期48-51,共4页
研究用ELISA法直接定量检测细胞培养液中的重组人活性蛋白C(rhAPC)。用改良双抗体夹心酶联免疫检测法进行定量分析。用棋盘滴定法对包被抗体、反应一抗和辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗的适宜工作浓度进行了选择,并对实验条件进行优化,参... 研究用ELISA法直接定量检测细胞培养液中的重组人活性蛋白C(rhAPC)。用改良双抗体夹心酶联免疫检测法进行定量分析。用棋盘滴定法对包被抗体、反应一抗和辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗的适宜工作浓度进行了选择,并对实验条件进行优化,参考品标准曲线线性相关性较好。改良双抗体夹心酶联免疫检测法可用于直接定量分析细胞培养液中的rhAPC水平。 展开更多
关键词 改良双抗体夹心酶联免疫法 重组活性蛋白c 定量分析
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