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人胰岛素突变体的分离纯化及性质研究
1
作者 陈来同 唐建国 胡美浩 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 1995年第1期40-43,共4页
将人胰岛素原突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ）基因重组到ｐＢＶ２２０表达载体上，在Ｅ．ｃｏｌｉ系统中得到高效表达，表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤，可得到纯的人胰岛素突变体... 将人胰岛素原突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ）基因重组到ｐＢＶ２２０表达载体上，在Ｅ．ｃｏｌｉ系统中得到高效表达，表达产物经ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０柱层析分离以及胰蛋白酶和羧肽酶Ｂ的酶促转化等步骤，可得到纯的人胰岛素突变体（Ａ４Ｇｌｕ→Ｌｅｕ），其氨基酸组成与预期值相符，其受体结合活性及生物活性与标准猪胰岛素的基本相同。 展开更多
关键词 人胰岛素突变体 胰岛素 分离 提纯
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人胰岛素突变体基因的融合表达
2
作者 于保锋 解军 +5 位作者 陈显久 常冰梅 张悦红 胡晓年 牛勃 程牛亮 《山西医科大学学报》 CAS 2004年第5期445-448,共4页
目的　以 pTXB1作为融合表达载体 ,构建人胰岛素突变体 (M insulin)的基因表达克隆 ,表达及纯化。 方法　基因合成胰岛素突变体的cDNA序列 ,酶切后装入融合表达质粒 pTXB1,基因测序正确后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,初步纯化。... 目的　以 pTXB1作为融合表达载体 ,构建人胰岛素突变体 (M insulin)的基因表达克隆 ,表达及纯化。 方法　基因合成胰岛素突变体的cDNA序列 ,酶切后装入融合表达质粒 pTXB1,基因测序正确后转化大肠杆菌BL2 1(DE3) ,诱导表达 ,初步纯化。结果　融合蛋白的分子量约为 330 0 0 ,表达量占菌体总蛋白的 5 0 %以上。融合蛋白主要以包涵体的形式存在 ,洗涤包涵体后融合蛋白的纯度达到 85 %以上。Western blot表明表达蛋白具有胰岛素抗原活性。活性测定显示 ,每升诱导培养后的菌液表达产物中 ,具有的放射免疫活性为 0 .5U。结论　成功地构建了人胰岛素突变体的融合表达体系 ,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多
关键词 人胰岛素突变体 克隆 基因 基因融合表达
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人胰岛素原突变体重组逆转录病毒及稳定包装细胞系的构建和鉴定 被引量：1
3
作者 兰丽珍 邓华聪 +2 位作者 孙辽 郑丹 弓军胜 《山西医科大学学报》 CAS 2004年第2期97-100,共4页
目的　构建携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法　采用PCR重叠延伸定点突变技术 ,将普通细胞内Furin蛋白酶的识别和切割位点Arg X Lys Arg 样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,同时加上信号肽、Kozak序列和酶切... 目的　构建携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体及稳定的包装细胞系。方法　采用PCR重叠延伸定点突变技术 ,将普通细胞内Furin蛋白酶的识别和切割位点Arg X Lys Arg 样序列 ,引入人胰岛素原C肽两端 ,同时加上信号肽、Kozak序列和酶切位点并克隆至逆转录病毒载体 pLXSN中 ,测序正确后转染包装细胞PA317,经G4 18筛选后挑选稳定生产病毒的细胞株 ,用NIH3T3细胞测定病毒滴度。结果　测序证明胰岛素原cDNA的 5个预定位点成功突变 ,其上游加上了信号肽和增强表达的Kozak序列 ;G4 18筛选重组pL mPIN SN转染PA317细胞抗性克隆 ,其病毒滴度为 2 .6× 10 5CFU/ml,而且基因组PCR和病毒液的RT PCR都显示有 2 86bp的条带 ,提示构建携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体以及稳定的包装细胞系成功。结论　成功构建了携带人胰岛素原突变体的逆转录病毒载体及包装细胞系 。 展开更多
关键词 人胰岛素原突变体 基因重组 逆转录病毒载体 包装细胞系 基因治疗 糖尿病
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钙调素-人胰岛素原融合体的酶切加工
4
作者 王学祥 井健 《北京师范大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期285-288,共4页
通过基因工程方法将人胰岛素原突变体偶联钙调素形成融合态重组蛋白质,在该重组蛋白质中设计具有PRESCI蛋白酶酶切位点.制备PRESCI蛋白酶并对钙调素-人胰岛素原突变体重组蛋白质进行酶切加工.研究表明,该重组融合蛋白质可被有效切割,通... 通过基因工程方法将人胰岛素原突变体偶联钙调素形成融合态重组蛋白质,在该重组蛋白质中设计具有PRESCI蛋白酶酶切位点.制备PRESCI蛋白酶并对钙调素-人胰岛素原突变体重组蛋白质进行酶切加工.研究表明,该重组融合蛋白质可被有效切割,通过蛋白质纯化手段能够有效地将切割后的钙调素与人胰岛素原突变体进行纯化. 展开更多
关键词 人胰岛素原突变体 PRESCI蛋白酶 酶切 纯化
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