期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到256篇文章
< 1 2 … 13 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
PDGF、FN诱导FHL1细胞增殖的PI3K信号转导通路研究 被引量：1
1
作者 马跃文 柏广涛 张美侠 《热带医学杂志》 CAS 2009年第6期650-653,共4页
目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(PI3K)信号转导通路。方法采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察PI3K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用... 目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(PI3K)信号转导通路。方法采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察PI3K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果PDGF和FN对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性升高趋势,二者均在50ng/mL时作用显著;PI3K抑制剂wortmannin可抑制PDGF和FN诱导的HFL1细胞增殖。结论PDGF和FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过PI3K信号转导途径实现。 展开更多
关键词 人胚胎肺成纤维细胞 血小板源性生长因子 纤维连接蛋白 磷酸酰基醇-3-激酶
原文传递
麦冬多糖对转化生长因子-β1诱导的人胚胎肺成纤维细胞表型转化的影响 被引量：1
2
作者 郑凌歆 王金丹 +1 位作者 何超翔 郑兰芝 《浙江中西医结合杂志》 2021年第7期614-618,共5页
目的观察麦冬多糖(OJP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚胎肺成纤维(HEL)细胞表型转化的影响,探讨其分子机制。方法将经6ng/mL诱导TGF-β1的HEL细胞作为模型组,加入25、50、100μg/mL OJP继续培养的HEL细胞作为OJP干预组。通过电... 目的观察麦冬多糖(OJP)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人胚胎肺成纤维(HEL)细胞表型转化的影响,探讨其分子机制。方法将经6ng/mL诱导TGF-β1的HEL细胞作为模型组,加入25、50、100μg/mL OJP继续培养的HEL细胞作为OJP干预组。通过电镜观察细胞的超微结构;实时荧光定量RT-PCR检测α-SMA mRNA和COLⅠmRNA表达;Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原蛋白(COLⅠ)、Smad2蛋白和p-Smad2蛋白表达。结果模型组及25、50、100μg/mL OJP干预组细胞的存活率分别为(99.65±1.55)%,(88.39±1.68)%,(82.77±1.96)%和(79.48±1.74)%,OJP干预组存活率低于模型组且随浓度的增加呈剂量依赖趋势,差异有统计学意义(P均<0.05);100μg/mL OJP干预组细胞表面微绒毛减少、微丝变短,胞浆内线粒体数目下降,粗面内质网减少;模型组和100μg/mL OJP干预组α-SMA mRNA表达量为(1.00±0.09)和(0.69±0.05),COLⅠmRNA表达量为(1.02±0.11)和(0.86±0.09),100μg/mL OJP干预组细胞α-SMA和COLⅠmRNA表达较模型组下调(P均<0.05);与模型组比较,100μg/mL OJP干预组α-SMA、COLⅠ、Smad2和p-Smad2蛋白表达明显下降(P均<0.01)[α-SMA蛋白:(0.48±0.03)比(1.56±0.02);COLⅠ蛋白:(0.41±0.02)比(1.66±0.02);Smad2蛋白:(0.71±0.01)比(1.34±0.01);p-Smad2蛋白:(0.69±0.01)比(1.52±0.01),P均<0.05]。结论麦冬多糖可能通过干预TGF-β/Smads信号通路,在一定程度上抑制成纤维细胞向肌成纤维细胞的转化。 展开更多
关键词 TGF-Β1 麦冬多糖 人胚胎肺成纤维细胞 Α-SMA
下载PDF
p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用
3
作者 邹焰 申旭波 +2 位作者 姜慧 贾飞飞 熊云刚 《中国地方病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期262-266,共5页
目的 探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠（NaAs02）致人胚胎肺成纤维细胞（HELF）凋亡中的作用.方法 分别取转染了p53质粒HELF细胞（p53组）、转染了PC质粒的HELF细胞（PC组）、常规培养的HELF细胞（正常组）,在6孔板中培养48 h后,分... 目的 探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠（NaAs02）致人胚胎肺成纤维细胞（HELF）凋亡中的作用.方法 分别取转染了p53质粒HELF细胞（p53组）、转染了PC质粒的HELF细胞（PC组）、常规培养的HELF细胞（正常组）,在6孔板中培养48 h后,分别加入0、3、9、15 mmoL/L NaAsO2溶液,培养24 h后,用real-time PCR法检测p53、Bax、bcl-2 mRNA基因表达水平,采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋白表达水平;用流式细胞仪检测细胞凋亡情况.结果 p53组细胞p53基因mRNA表达水平（0.51±0.29）低于PC组及正常组[（1.32±0.26）,（1.00±0.20）,P均〈0.05],p53组p53基因蛋白表达水平[（4.10±1.20）%]低于PC组和正常组[（8.00±1.63）%、（7.90±1.79）%,P均〈0.05];p53组、PC组、正常组在染砷0、3、9、15 mmol/L时,细胞凋亡率[（0.57±0.28）%、（22.91±4.86）%、（40.05±3.93）%、（44.87±3.58）%,（0.65±0.24）%、（14.09±3.49）%、（20.31±3.66）%、（32.42±3.63）%,（0.56±0.25）%、（12.14±3.70）%、（19.61±3.63）%、（30.43±2.83）%]、Bax mRNA表达水平[（12.73±3.96）、（25.12±6.42）、（104.96±26.77）、（154.04±3052）,（14.63±3.57）、（36.75±3.67）、（272.26±66.11）、（846.12±243.36）,（14.75±5.65）、（37.22±11.27）、（278.51±37.42）、（861.67±369.29）]、Bax蛋白表达水平[（15.07±0.83）%、（23.79±3.99）%、（3851±158）%、（53.86±124）%,（15.43±1.45）%、（36.11±1.37）%、（56.86±1.97）%、（76.09±2.01）%,（15.20±1.03）%、（35.25±1.09）%、（55.56±2.17）%、（74.48±2.85）%]均随着染毒剂量的增加而增高（P均〈0.05）,而bcl-2 mRNA表达水平[（443.00±244.47）、（156.79±53.18）、（62.13±13.66）、（23.10±6.44）,（420.55±110.77）、（48.15±10.02）、（14.91±6.53）、（7.54±2.62）,（577.75±123.22）、（49.68±10.11）、（12.41±1.28）、（7.22±1.89）]、bcl-2蛋白表达水平[（47.20±3.77）%、（41.80±2. 展开更多
关键词 砷酸盐类 人胚胎肺成纤维细胞 P53基因 细胞凋亡 RNA干扰
原文传递
p53基因在亚砷酸钠致人胚胎肺成纤维细胞凋亡中的作用
4
作者 邹焰 申旭波 +2 位作者 姜慧 贾飞飞 熊云刚 《遵义科技》 2013年第3期47-51,共5页
目的探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠（NaAsO2）致人胚胎肺成纤维细胞（HELF）凋亡中的作用。方法分别取转染了p53质粒HELF细胞（p53组）、转染了PC质粒的HELF细胞（PC组）、常规培养的HELF细胞（正常组），在6孔板中培养48h后，分... 目的探讨p53、Bax、bcl-2基因在亚砷酸钠（NaAsO2）致人胚胎肺成纤维细胞（HELF）凋亡中的作用。方法分别取转染了p53质粒HELF细胞（p53组）、转染了PC质粒的HELF细胞（PC组）、常规培养的HELF细胞（正常组），在6孔板中培养48h后，分别加入0、3、9、15mmoL／LNaAsO2溶液，培养24h后，用real-timePCR法检测p53、Bax、bcl．2mRNA基因表达水平。采用免疫组织化学SABC法检测p53、Bax、bcl-2基因蛋13表达水平；用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果p53组细胞p53基因mRNA表达水平（0．51±0．29）低于Pc组及正常组[（1．32±0．26），（1．00±0．20），P均〈0．05]，p53组p53基因蛋白表达水平[（4．10±1．20）％】低于Pc组和正常组[（8．00±1．63）％、（7．90士1．79）％，P均〈0．05]：p53组、Pc组、正常组在染砷0、3、9、15mmol／L时，细胞凋亡率[（0．57±0．28）0／0、（22．91±4．86批、（40．05±3．93溉、（44．87±3．58）％，（0．65±0．24）％、（14．09土3．49）％、（20．31±3．66）％、（32．42±3．63）％，（0．56±0．25）％、（12．14±3．70）％、（19．61±3．63）％、（30．43±2．83）％]、BaxmRNA表达水平[（12．73土3．96）、（25．12士6．42）、（104．96±26．77）、（154．04±3052），（14．63±3．57）、（36．75±3．67）、（272．26±66．11）、（846．12±243．36），（14．75±5．65）、（37．22±11．27）、（278．51±37．42）、（861．67±369．29）]、Bax蛋白表达水平[（15．07±0．83）％、（23．79±3．99）％、（3851±158）％、（53．86±124）％，（15．43±1．45）％、（36．11±1．37）％、（56．86±1．97）％、（76．09±2．01）％，（15．20士1．03）％、（35．25±1．09）％、（55．56±2．17）％、（74．48±2．85）％]均随着染毒剂量的增加而增高（P均〈0．05），而bcl．2mRNA表达水平[（443．00±244．47）、（156．79士53． 展开更多
关键词 砷酸盐类 人胚胎肺成纤维细胞 P53基因 细胞凋亡 RNA干扰
下载PDF
RNAi构建p53基因低表达细胞
5
作者 邹焰 申旭波 +2 位作者 姜慧 贾飞飞 熊云刚 《遵义医学院学报》 2009年第5期442-444,共3页
目的构建p53基因低表达的人胚胎肺成纤维细胞(HELF)。方法利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术建立p53基因低表达的HELF。采用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法,分别从mRNA和蛋白水平检测不同组(p53基因低表达细胞组、对照细胞... 目的构建p53基因低表达的人胚胎肺成纤维细胞(HELF)。方法利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术建立p53基因低表达的HELF。采用Real-time PCR法及免疫组织化学SABC法,分别从mRNA和蛋白水平检测不同组(p53基因低表达细胞组、对照细胞组、正常细胞组)HELP的p53基因表达改变。结果转染p53质粒组(低表达组)细胞,p53基因mRNA和蛋白表达水平均较正常细胞组及转染PC质粒组细胞明显降低,差别有意义(P<0.05),表达量约是正常细胞的50%;转染PC质粒组(对照组)细胞与正常组细胞p53基因mRNA表达间差异无意义(P>0.05)。结论p53基因低表达HELF构建成功。 展开更多
关键词 RNAI P53基因 人胚胎肺成纤维细胞 REAL-TIME PCR
下载PDF
鹿茸提取物对顺铂诱导人胚肾细胞损伤的影响 被引量：13
6
作者 王婧瑜 王露露 +3 位作者 李冰 刘芳芳 孙长波 张晶 《吉林农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期694-697,714,共5页
建立顺铂(CDDP)诱导人胚肾成纤维细胞(HEK293)细胞损伤模型,通过MTT和LDH测定,比较不同浓度的鹿茸提取物(水提物,醇提物,乙醚提取物,氯仿提取物,乙酸乙酯提取物)诱导HEK293细胞损伤的保护作用。体外培养HEK293细胞,观察鹿茸提取物对CDD... 建立顺铂(CDDP)诱导人胚肾成纤维细胞(HEK293)细胞损伤模型,通过MTT和LDH测定,比较不同浓度的鹿茸提取物(水提物,醇提物,乙醚提取物,氯仿提取物,乙酸乙酯提取物)诱导HEK293细胞损伤的保护作用。体外培养HEK293细胞,观察鹿茸提取物对CDDP诱导HEK293细胞生长的影响,并用MTT法和LDH法检测鹿茸对CDDP诱导HEK293细胞死亡率的变化。结果表明:鹿茸提取物能够拮抗CDDP诱发的细胞损伤,具有浓度依赖性,其半数致死浓度为(0.083±0.030)mmol/L。当HEK293细胞与不同浓度鹿茸提取物共同孵育24 h,分别加入CDDP后,检测表明鹿茸水提物较其他溶剂提取物对顺铂诱导损伤的HEK293有较好的保护作用,其质量浓度为1 mg/m L时对顺铂诱导损伤的HEK293细胞的保护作用最强,细胞存活率达到62.0%(P<0.01)。鹿茸水提物对CDDP诱导人胚肾细胞损伤的抑制作用最显著,可有效保护细胞活性。 展开更多
关键词 鹿茸 顺铂 人胚胎肾成纤维细胞 细胞增殖 乳酸脱氢酶 细胞损伤
原文传递
美洲大蠊提取物对人胚胎皮肤成纤维细胞增殖的影响 被引量：2
7
作者 刘荣荣 李丽娟 +1 位作者 王楠 张海珠 《中国现代医学杂志》 CAS 2020年第5期27-32,共6页
目的研究美洲大蠊提取物Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E、Ento-F对体外培养人胚胎皮肤成纤维细胞(CCC-ESF-1)增殖的影响。方法在不同时间用不同浓度的美洲大蠊提取物作用CCCESF-1,同时设不加药的阴性对照组(含等量细胞重悬液)... 目的研究美洲大蠊提取物Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E、Ento-F对体外培养人胚胎皮肤成纤维细胞(CCC-ESF-1)增殖的影响。方法在不同时间用不同浓度的美洲大蠊提取物作用CCCESF-1,同时设不加药的阴性对照组(含等量细胞重悬液)和只加培养液的空白组。结果与阴性对照组比较,3和10μg/ml的Ento-A、Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果较好,300μg/ml Ento-F对CCC-ESF-1细胞的增殖有抑制作用。3μg/ml Ento-A作用24 h时对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用效果最好,3、10μg/ml Ento-B、Ento-C、Ento-D、Ento-E作用72和96 h时对CCCESF-1细胞的增殖抑制作用效果较好,Ento-F对CCC-ESF-1细胞的增殖抑制作用不佳,均弱于其他5种。结论美洲大蠊提取物能抑制体外CCC-ESF-1细胞的增殖。 展开更多
关键词 增生性瘢痕 美洲大蠊提取物 人胚胎皮肤成纤维细胞 细胞增殖 抑制作用
下载PDF
越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞MMP2和collagenⅠ表达的影响 被引量：2
8
作者 刘丽敏 钟华红 +5 位作者 邓宏伟 肖红萍 曾杞汶 田原 刘小勇 孟晶 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第7期1291-1296,共6页
目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10^(-6),10^(-5),10^(-4),10^(-3),10^(-2),10^(-1) and 1 g/L)... 目的:探讨越橘花青素对人胚胎巩膜成纤维细胞(HFSF)基质金属蛋白酶2(MMP2)和Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)表达的影响,为越橘花青素防治近视提供实验依据。方法:取不同浓度(0,10^(-6),10^(-5),10^(-4),10^(-3),10^(-2),10^(-1) and 1 g/L)越橘花青素作用于HFSF,应用MTT法检测越橘花青素作用不同时间(6 h、8 h、12 h、24 h和48h)对HFSF活力的影响;流式细胞术检测HFSF活力最高时(10-1g/L越橘花青素作用12 h)的细胞周期和凋亡情况;RT-q PCR检测HFSF中MMP2、COL1A1和COL1A2的mRNA表达;Western blot检测其MMP2和collagen I的蛋白表达。结果:MTT法结果显示HFSF在10-1g/L的越橘花青素作用12 h时活力最高;与空白对照组比较,流式细胞术显示10-1g/L越橘花青素组S和G2期的细胞比例增加(P<0.05),凋亡率差异无统计学意义;RT-q PCR显示MMP2的mRNA表达量下降(P<0.05),COL1A1的mRNA表达量增加(P<0.05),COL1A2的mRNA表达量差异无统计学意义;Western blot显示MMP2蛋白表达下降(P<0.05),collagen I蛋白表达增加(P<0.05)。结论:越橘花青素对HFSF和具有抑制MMP2和增加collagen Ⅰ表达的作用。 展开更多
关键词 越橘花青素 人胚胎巩膜成纤维细胞 基质金属蛋白酶2 Ⅰ型胶原蛋白
下载PDF
小鼠胚胎成纤维细胞的分离与培养 被引量：28
9
作者 张怡 赵连三 +1 位作者 汪成孝 雷秉钧 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期344-346,共3页
目的　探讨影响小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)分离和培养的一些因素 ,以建立稳定的 MEF培养体系。方法　取 BAL B/ c小鼠胚胎分离成纤维细胞 ,利用体外培养体系 ,对 MEF的生长形态、生长曲线及细胞周期进行观察 ,并对不同胚胎日龄以及不同... 目的　探讨影响小鼠胚胎成纤维细胞 (MEF)分离和培养的一些因素 ,以建立稳定的 MEF培养体系。方法　取 BAL B/ c小鼠胚胎分离成纤维细胞 ,利用体外培养体系 ,对 MEF的生长形态、生长曲线及细胞周期进行观察 ,并对不同胚胎日龄以及不同胰酶作用时间对 MEF分离及培养的影响进行研究。结果　 13.5 d胎龄鼠胚的 MEF分离效果优于 10 .5 d、18.5 d胎龄鼠胚 ;MEF在体外为贴壁生长型细胞 ,第三代细胞增殖旺盛 ;在室温条件下 ,0 .2 5 %胰酶消化 MEF时间以 3～ 5 min为宜。结论　 MEF在第 3代增殖旺盛 。 展开更多
关键词 小鼠胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 饲养层
下载PDF
4种典型纳米材料对小鼠胚胎成纤维细胞毒性的初步研究 被引量：29
10
作者 杨辉 杨丹凤 +4 位作者 张华山 张伟 刘焕亮 刘超 袭著革 《生态毒理学报》 CAS CSCD 2007年第4期427-434,共8页
为探讨不同种类纳米材料对原代培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEF)的毒性效应及作用机制,选择4种典型的纳米材料(纳米碳、单壁碳纳米管、纳米氧化锌、纳米二氧化硅)制备颗粒悬液,设立5个剂量组(5、10、20、50、100μ... 为探讨不同种类纳米材料对原代培养小鼠胚胎成纤维细胞(Mouse embryo fibroblasts,MEF)的毒性效应及作用机制,选择4种典型的纳米材料(纳米碳、单壁碳纳米管、纳米氧化锌、纳米二氧化硅)制备颗粒悬液,设立5个剂量组(5、10、20、50、100μg·mL-1)对BALB/c小鼠MEF细胞进行24、48、72h染毒培养,利用细胞形态学观察和噻唑蓝实验(MTT比色法)检测上述4种纳米材料对MEF细胞活性的影响,同时,测定染毒24h后细胞培养液上清中乳酸脱氢酶(LDH)活性以探讨纳米颗粒对细胞膜完整性的影响.结果显示:1)4种纳米材料均能明显影响MEF细胞的生长形态.染毒24h后,MEF细胞发生不同程度的回缩变形,细胞间隙增大,排列稀疏,胞内颗粒物增多,细胞透明度下降.2)纳米碳、纳米氧化锌、纳米二氧化硅对MEF细胞增殖的抑制作用和对细胞膜完整性的损伤作用均随染毒剂量的升高而增强,具有明显的剂量-效应关系,其半数致死浓度(24h-IC50)分别为21.85、21.94、461.10μg·mL-1;碳纳米管组的剂量-效应之间不呈对数线性关系,未能得出其24h-IC50.3)在不同染毒剂量水平上,4种纳米材料的毒性对比差异显著:低剂量水平上纳米碳与碳纳米管的毒性强于纳米氧化锌和纳米二氧化硅,随着剂量的升高纳米氧化锌的细胞毒性升高最为显著.结果提示,纳米材料能够对MEF细胞造成毒性损伤,破坏细胞膜的完整性可能只是作用途径之一;纳米材料的毒性可能受粒径、形状、化学组成等许多因素的影响. 展开更多
关键词 纳米材料 小鼠胚胎成纤维细胞 细胞毒性 纳米碳 单壁碳纳米管 纳米氧化锌 纳米二氧化硅
下载PDF
小鼠胚胎成纤维细胞的分离和饲养层细胞的制备 被引量：14
11
作者 张学明 李德雪 +4 位作者 赖良学 李子义 文兴豪 杜惜明 曾发贵 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 1999年第9期5-6,共2页
通过实验确定分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄，探讨小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的效果及其寿命。结果表明，从１０ 、１１ ｄ 小鼠胚胎所获的胚胎成纤维细胞中混有大量神经母细胞和红细胞；用１４ 、１５ ｄ 的胚胎则基本不能获得胚胎... 通过实验确定分离小鼠胚胎成纤维细胞的最适胚龄，探讨小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的效果及其寿命。结果表明，从１０ 、１１ ｄ 小鼠胚胎所获的胚胎成纤维细胞中混有大量神经母细胞和红细胞；用１４ 、１５ ｄ 的胚胎则基本不能获得胚胎成纤维细胞；消化３ ～４ 个１２ ～１３ ｄ 胚胎所获细胞悬液可接种８～９ 个２５ ｃｍ２ 的培养瓶。从一只孕鼠的所有胚胎所获的成纤维细胞可接种约２０ 个２５ ｃｍ２ 的培养瓶。所获细胞悬液的活细胞百分率可达９０％ ，接种成活率达８５ ％ 。胚胎成纤维细胞贴壁时间为５～６ ｈ ，１２ ｈ 后进入增殖期，４８ ｈ 形成细胞单层。ＥＳ细胞克隆在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上形态典型、增殖迅速、不分化。饲养层寿命可维持２ ～３ 周。 展开更多
关键词 胚胎成纤维细胞 饲养层 小鼠
下载PDF
慢病毒介导的外源基因体外投递系统的建立 被引量：19
12
作者 贾俊双 孙妍 +1 位作者 肖东 姚开泰 《热带医学杂志》 CAS 2008年第10期1028-1029,1037,F0004,共4页
目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓... 目的针对不同哺乳类细胞建立相应的慢病毒体外感染体系,以建立慢病毒介导的外源基因体外投递系统。方法按Invitrogen公司推荐的标准程序进行慢病毒(携带EGFP基因)包装(脂质体介导的瞬时转染)、超速离心浓缩和保存等,随后用病毒上清或浓缩后的病毒感染293FT细胞,24～48h后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功生产;将携带EGFP基因的病毒上清或浓缩后的病毒分别加入内含293FT细胞、小鼠ES细胞、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)或小鼠睾丸生殖细胞的培养板孔内,感染6～12h后,用相应培养基替换感染液,数天后荧光显微镜下观察是否见绿色荧光以证实慢病毒是否成功感染不同哺乳类细胞。结果按标准程序生产的携带EGFP基因慢病毒(病毒上清或浓缩后的病毒)成功高效率感染293FT细胞、MEFs或小鼠睾丸生殖细胞;用浓缩后的病毒(携带EGFP基因)感染小鼠ES细胞,亦可获得EGFP阳性的ES细胞克隆。结论熟练掌握了慢病毒包装、浓缩及鉴定等技术,同时针对不同哺乳类细胞建立了相应的慢病毒介导的外源基因体外传递系统,这些为相关后续研究打下了良好的基础。 展开更多
关键词 慢病毒 293FT细胞 小鼠胚胎干细胞 小鼠胚胎成纤维细胞 小鼠睾丸生殖细胞
下载PDF
人胚胎成纤维细胞的分离、培养和鉴定及人胚胎生殖细胞体外生长所需细胞因子的表达 被引量：14
13
作者 王英 何津 李玉林 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期245-248,共4页
目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物... 目的：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中分离、培养及鉴定人胚胎成纤维细胞（hEFs）,检测hEFs表达人胚胎生殖细胞（hEG）体外生长所需的重要细胞因子。方法：利用酶消化法从孕5-9周龄人胚胎的生殖腺嵴和肠背系膜中分离培养hEFs,检测其生物学特性（细胞形态、细胞生长特点、细胞周期）。采用逆转录多聚酶链反应（RT-PCR）检测hEFs表达成纤维细胞特异性标志（脯氨酰4-羟化酶β亚单位）和上皮细胞特异性标志（细胞角蛋白4）的情况,对该细胞进行鉴定。应用RT-PCR检测hEG生长所需的重要细胞因子的表达,即碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）和白血病抑制因子（LIF）。结果：从人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜中成功地分离培养出hEFs,该细胞可传25代以上,且经过传代及冻存复苏后生物学特性无改变;hEFs表达脯氨酰4-羟化酶β亚单位,不表达细胞角蛋白4,确定其为成纤维细胞;该成纤维细胞表达bFGF和LIF。结论：成功地分离和培养了人胚胎生殖腺嵴和肠背系膜来源的成纤维细胞,证明其表达对于hEG体外生长起重要作用的细胞因子。 展开更多
关键词 人胚胎成纤维细胞 人胚胎生殖细胞 细胞培养
下载PDF
小鼠胚胎成纤维细胞饲养层制备条件的研究 被引量：12
14
作者 王国云 李栋 +1 位作者 张辉 白增亮 《山东大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2005年第5期396-400,共5页
目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳分离培养及丝裂霉素C(MMC)处理的方法,用于培养胚胎干细胞。方法:取不同胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响;观察不同浓度和不同作用时间下MMC对细胞增... 目的:建立小鼠胚胎成纤维细胞饲养层最佳分离培养及丝裂霉素C(MMC)处理的方法,用于培养胚胎干细胞。方法:取不同胎龄的胎鼠分离原代成纤维细胞,观察不同胎龄和培养、分离条件对细胞增殖的影响;观察不同浓度和不同作用时间下MMC对细胞增殖的抑制作用。用MTT法测定细胞增殖的数量。取妊娠3.5d的囊胚在经MMC处理的饲养层上培养,观察胚胎干细胞集落生成情况。结果:制备小鼠胚胎成纤维细胞饲养层的最佳胎龄是12.5～14.5d;室温条件下,0.25%胰蛋白酶消化时间最好在3～5min之内;原代细胞培养2～4d后即可传代,MMC能抑制胚胎成纤维细胞的增殖,最佳的作用浓度和时间是20μg/ml,2～4h,成纤维细胞饲养层可以维持10d。囊胚在饲养层上能发育成典型的“鸟巢”状干细胞集落。结论:从12.5～14.5d胎龄小鼠胚胎分离培养的胚胎成纤维细胞质量最佳,经20μg/mlMMC处理2～4h后,可以作为饲养层用于胚胎干细胞的分离克隆。 展开更多
关键词 小鼠 胚胎成纤维细胞 胚胎干细胞 丝裂霉素C 饲养层
下载PDF
新型萘醌类衍生物对细胞衰老的抑制作用 被引量：14
15
作者 王昊乾 孔令祖 +1 位作者 申贵男 韩英浩 《黑龙江八一农垦大学学报》 2015年第4期72-76,共5页
通过对萘醌类化合物的化学修饰,研究2-取代5,8-二甲氧基-1,4-萘醌类衍生物对鼠胚胎成纤维细胞(MEF)衰老的抑制作用。应用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术(FCM)、SA-β-gal染色等方法检测多种萘醌衍生物对细胞毒性、细胞内活性氧(ROS)水平和细... 通过对萘醌类化合物的化学修饰,研究2-取代5,8-二甲氧基-1,4-萘醌类衍生物对鼠胚胎成纤维细胞(MEF)衰老的抑制作用。应用噻唑蓝(MTT)、流式细胞术(FCM)、SA-β-gal染色等方法检测多种萘醌衍生物对细胞毒性、细胞内活性氧(ROS)水平和细胞衰老的作用,实验结果显示:2-苄硫基-5,8-二甲氧基-1,4-萘醌在降低其细胞毒性作用的同时,具有清除细胞内活性氧从而抑制细胞衰老的作用。 展开更多
关键词 萘醌类衍生物 活性氧 细胞衰老 鼠胚胎成纤维细胞
下载PDF
东方田鼠胚胎成纤维细胞的分离培养及生物学特性 被引量：13
16
作者 成钢 盖楠 +1 位作者 熊德慧 胡维新 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2010年第3期254-257,I0008,共5页
目的对影响东方田鼠胚胎成纤维细胞(MfEF)分离和培养的因素进行探索,并观察其生物学特性。方法取室内繁殖饲养不同胎龄的东方田鼠胚胎分离成纤维细胞,通过原代和继代培养,分析比较不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度等因素对MfE... 目的对影响东方田鼠胚胎成纤维细胞(MfEF)分离和培养的因素进行探索,并观察其生物学特性。方法取室内繁殖饲养不同胎龄的东方田鼠胚胎分离成纤维细胞,通过原代和继代培养,分析比较不同胎龄、不同血清浓度、不同胰蛋白酶浓度等因素对MfEF分离及培养的影响,观察MfEF的生长形态及其生物学特性。结果 MfEF为贴壁型生长,细胞形态多样,呈梭形、不规则多边形;采用0.125%的胰蛋白酶室温消化12～13 d胚胎组织5 min,以DMEM培养基添加15%小牛血清分离培养MfEF的效果最佳;MfEF2～7代增殖最旺盛。结论获得了实验室分离、培养MfEF的有效方法 ,为进一步深入研究东方田鼠抗日本血吸虫机制以及开展不同动物成纤维细胞间比较研究奠定了基础。 展开更多
关键词 东方田鼠 胚胎成纤维细胞 生物学特性
下载PDF
小鼠胚胎干细胞体外分化为神经前体细胞的研究 被引量：8
17
作者 吴旋 黎海蒂 +2 位作者 李树浓 徐海伟 徐令 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第11期1260-1263,共4页
目的　探索小鼠胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)体外分化为神经前体细胞 (Neuralprecursorcells ,NPC)的无血清培养条件 ,比较人胚胎成纤维细胞 (Humanembryonicfibroblasts ,HEF)与小鼠胚胎成纤维细胞 (Mouseembryonicfibrobla... 目的　探索小鼠胚胎干细胞 (Embryonicstemcell ,EScell)体外分化为神经前体细胞 (Neuralprecursorcells ,NPC)的无血清培养条件 ,比较人胚胎成纤维细胞 (Humanembryonicfibroblasts ,HEF)与小鼠胚胎成纤维细胞 (Mouseembryonicfibroblasts ,MEF)对小鼠ES细胞生长的作用。方法　在MEF或HEF饲养层上培养ES细胞 ,培养液中含白血病抑制因子。采用无血清方法培养NPC ,免疫组化方法检测巢蛋白 (Nestin) ,用硝基四氮唑蓝 /5 溴 4 氯 3 吲哚基磷酸 (NBT/BCIP)显色检测碱性磷酸酶。结果　无血清培养可以获得 86 %的NPC。HEF与MEF一样能维持ES未分化状态。结论　无血清培养方法有利于ES细胞向NPC分化 ,HEF可用于小鼠ES细胞的培养 ,而且比MEF优越。 展开更多
关键词 胚胎干细胞 神经前体细胞 无血清培养 人胚胎成纤维细胞 小鼠
下载PDF
单细胞凝胶电泳检测酞酸酯类对DNA的损伤 被引量：8
18
作者 赵文红 厉曙光 石红军 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2004年第10期1164-1165,共2页
目的　应用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术对增塑剂 (DEHP)邻苯二甲酸二乙基己酯致小鼠胚胎成纤维细胞 (3T6细胞 )DNA损伤、损伤程度以及有无剂量 -效应关系进行检测。方法　将溶剂二甲基亚砜处理的 3T6细胞作为阴性对照组 ,用H2 O2 染毒的 ... 目的　应用单细胞凝胶电泳 (SCGE)技术对增塑剂 (DEHP)邻苯二甲酸二乙基己酯致小鼠胚胎成纤维细胞 (3T6细胞 )DNA损伤、损伤程度以及有无剂量 -效应关系进行检测。方法　将溶剂二甲基亚砜处理的 3T6细胞作为阴性对照组 ,用H2 O2 染毒的 3T6细胞作为阳性对照组 (80 μmol/LH2 O2 染毒 ) ,将不同浓度DEHP处理的 3T6细胞设为 4个剂量组 (6 2 5 ,12 5 ,2 5 0 ,5 0 0 μg/ml)进行SCGE检验。 结果　各染毒组细胞DNA损伤与阴性对照组比较 ,均有显著性差异 (P <0 0 5 ) ;且随DEHP染毒浓度增加 ,3T6细胞DNA损伤程度加重 ,有剂量 -效应关系。结论　DEHP体外染毒对 3T6细胞能造成损伤 。 展开更多
关键词 DEHP 单细胞凝胶电泳 小鼠胚胎成纤维细胞 DNA损伤
下载PDF
端粒酶催化亚单位基因转染对人胚胎成纤维细胞表型及寿命的影响 被引量：9
19
作者 梁光萍 罗向东 杨宗城 《中国临床康复》 CSCD 2002年第24期3672-3673,T003,共3页
目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEFs)寿命的影响以及基因转染后细胞是否存在恶性表型。方法应用脂质体法将pIRES2-EGFP-hTERT正义重组质粒及pIRES2-EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs,Western... 目的探讨外源性人端粒酶蛋白催化亚单位(hTERT)基因转染对人胚胎成纤维细胞(hEFs)寿命的影响以及基因转染后细胞是否存在恶性表型。方法应用脂质体法将pIRES2-EGFP-hTERT正义重组质粒及pIRES2-EGFP空载质粒分别导入原代培养hEFs,Westernblot检测hTERT蛋白及I、III型胶原表达。染色体核型分析、裸鼠皮下致瘤性实验、DNA倍体实验以及形态学观察分析转染细胞是否存在恶性表型。结果外源性hTERT基因转染的胚胎成纤维细胞hTERT蛋白和I、III型胶原表达增加,体外传代次数增加,传至75代仍保持以2d的倍增周期生长,并且染色体仍为23对,均为正常二倍体细胞;裸鼠皮下不具有成瘤的能力;而hEFs和空载转染细胞传至60代左右平均五六天传代1次,出现生长停滞现象。结论外源性hTERT基因转染使胎儿成纤维细胞增殖旺盛,寿命延长,且不具有恶性表型。 展开更多
关键词 人端粒酶蛋白催化亚单位 人胚胎成纤维细胞 恶性表型
下载PDF
昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离与体外培养 被引量：8
20
作者 盛利琴 叶荣 +2 位作者 韩甫 蔡东晖 张焕相 《苏州大学学报（自然科学版）》 CAS 2007年第1期83-86,共4页
研究了昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养和生长特征,建立了快速、稳定的优质饲养层细胞培养体系.从不同日龄的胎鼠均分离到胚胎成纤维细胞,但最佳分离时间为13.5~14.5d;三种分离原代胚胎成纤维细胞的方法中胰酶消化法效果最好,能在... 研究了昆明小鼠胚胎成纤维细胞的分离、培养和生长特征,建立了快速、稳定的优质饲养层细胞培养体系.从不同日龄的胎鼠均分离到胚胎成纤维细胞,但最佳分离时间为13.5~14.5d;三种分离原代胚胎成纤维细胞的方法中胰酶消化法效果最好,能在较短的周期内获得大量原代及传代细胞;MEF细胞形态以小梭形为主,呈漩涡状、火焰状生长;增殖速度较快,每1~2d可传一代,按1∶3比例常规传代;5代以内适宜制作饲养层用,5代以后细胞开始变形呈现典型的衰老特征. 展开更多
关键词 胚胎成纤维细胞 饲养层 体外培养
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 13 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部