茶多酚和维生素C对人胚肾293细胞缺糖缺氧损伤保护作用的比较 被引量：9

1

作者 吕勇 金越 +3 位作者 韩国柱 周琴 孙慧君 李楠 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1370-1372,共3页

目的从细胞水平研究茶多酚(TP)对人胚肾293细胞缺糖缺氧性损伤的保护作用,并与抗氧化剂维生素C(VC)进行比较。方法采用缺糖培养基并以连二亚硫酸钠消除培养基中的氧,诱导产生缺氧缺糖损伤模型,测定细胞的存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧... 目的从细胞水平研究茶多酚(TP)对人胚肾293细胞缺糖缺氧性损伤的保护作用,并与抗氧化剂维生素C(VC)进行比较。方法采用缺糖培养基并以连二亚硫酸钠消除培养基中的氧,诱导产生缺氧缺糖损伤模型,测定细胞的存活率、乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性以及总抗氧化能力,并计算IC50。结果在细胞损伤模型中,TP和VC均表现出极强的抗氧化能力,TP能显著提高细胞的存活率、SOD活性和总抗氧化能力并抑制LDH的活性,TP的作用均大于VC。结论TP和VC体外具有强大的自由基清除作用,且呈现明显的剂量依赖性,TP在细胞损伤模型中的抗自由基作用均大于VC。 展开更多

关键词 茶多酚(TP) 维生素C(VC) 自由基 缺氧缺糖性损伤 人胚肾293细胞

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HEK-293细胞复苏培养及冻存 被引量：4

2

作者 杨彪 梅晰凡 刘福强 《辽宁医学院学报》 CAS 2007年第6期1-3,共3页

目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通... 目的通过对人胚肾293细胞的复苏培养及其冻存的研究,为进一步行干细胞标记实验奠定基础。方法复苏培养人胚肾293细胞,倒置显微镜观察人胚肾293细胞的生长状况,计算细胞贴壁率,绘制细胞生长曲线,冻存保留细胞。结果人胚肾293细胞在普通培养条件下生长良好,6h后大部分细胞已经贴壁,8h细胞已完全贴壁。结论人胚肾293细胞采用改进方法复苏培养及冻存是简便可行的,为进一步行干细胞标记实验奠定了坚实的前期基础。 展开更多

关键词 人胚肾293细胞 细胞培养 冻存

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负载hTERT调控相关miR-138复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定 被引量：6

3

作者 熊晓峰 陈陵 +5 位作者 范亚川 邹利全 张方征 王洪斌 游斌 刘志鹏 《重庆医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期896-898,共3页

目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染... 目的包装负载人端粒酶逆转录酶(hTERT)调控相关miR-138前体全长cDNA(pre-miR-138)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR138)。方法 pre-miR-138全基因合成后插入腺病毒穿梭质粒(pDC315-miR138),与腺病毒包装质粒pBHGloxDel-taE1、3Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装Ad-miR138并大量扩增,收集纯化。对纯化后的Ad-miR138进行滴度测定、感染性鉴定、电镜鉴定及双引物PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×1010pfu/mL。电镜可见病毒在HEK293细胞中大量复制。PCR双引物鉴定Ad-miR138可扩增出Ad及pre-miR-138特异片段,而对照Ad-LacZ只能扩增出Ad特异片段,不能扩增出pre-miR-138特异片段。结论成功包装了负载miR-138全长cDNA的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究微RNAs(microRNAs)在肿瘤发生、发展中的作用,以及hTERT调控相关miR-138在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。 展开更多

关键词 RNA指导的DNA聚合酶 微RNAS 人胚肾293细胞 复制缺陷型腺病毒载体

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负载人miR-29a复制缺陷型腺病毒的包装及鉴定 被引量：5

4

作者 高军 范亚川 +5 位作者 王军 熊晓峰 吴友良 刘志鹏 陈陵 李学成 《西南国防医药》 CAS 2011年第10期1045-1048,共4页

目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a)。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-... 目的包装负载人miR-29a前体全长cDNA(pre-miR-29a)的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-miR29a)。方法将pre-miR-29a全基因合成后,插入腺病毒穿梭质粒pDC315,与腺病毒包装质粒pBHGloxDeltaE13、Cre共转染人胚肾293细胞(HEK293),包装重组慢病毒Ad-miR29a,扩增、收集并纯化。对纯化后的Ad-miR29a进行滴度测定、感染性鉴定及PCR鉴定。结果包装成功的腺病毒载体具有良好的感染性,纯化浓缩后的病毒滴度可达5×109 pfu/ml。PCR鉴定Ad-miR29a可扩增出pre-miR-29a特异片段,而对照Ad-LacZ不能扩增出pre-miR-29a特异片段。Ad-miR29a感染人胃癌SGC-7901细胞后,可明显提高miR-29a的表达丰度。结论成功包装了负载miR-29a的复制缺陷型腺病毒载体,为进一步研究microRNAs在肿瘤发生发展中的作用,以及miR-29a在肿瘤治疗中的价值奠定了基础。 展开更多

关键词 微小RNAS hsa-miR-29a 人胚肾293细胞 复制缺陷型腺病毒载体

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Smac基因的克隆及其对Burkitt′s淋巴瘤 被引量：4

5

作者 陆超 吴升华 +8 位作者 陈吉庆 赵非 池霞 潘晓勤 费莉 郭梅 黄松明 郭锡熔 陈荣华 《中华儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第7期503-506,共4页

目的克隆人促凋亡基因(secondmitochondriaderivedactivatorofcaspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.... 目的克隆人促凋亡基因(secondmitochondriaderivedactivatorofcaspases,Smac),研究Smac基因转染对Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的促凋亡作用。方法从人胚肾293细胞中扩增人Smac基因全长的cDNA;构建含Smac基因全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1/Smac,并转染人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞;用Westernblot测定外源基因的表达;Hoechest33258和碘化丙锭双荧光染色,结合激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡形态;流式细胞仪分析细胞凋亡百分率;比色法测定caspase3酶活性。结果成功克隆人Smac基因全长cDNA,并构建真核表达载体pcDNA3.1/Smac;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞的凋亡,凋亡百分率达(43.7±2.5)%;转染人Smac基因全长cDNA的真核表达载体24h,可显著诱导Raji细胞中caspase3酶活性上调,吸光度为0.936±0.041,与正常对照组(0.138±0.026)及空载体转染对照组(0.136±0.036)相比,P<0.05。结论转染并表达外源性Smac基因,可显著诱导人Burkitt′s淋巴瘤Raji细胞凋亡。其机制可能与caspase3酶活性上调有关。 展开更多

关键词 BURKITT SMAC基因 促凋亡作用 caspase-3酶活性 淋巴瘤细胞 真核表达载体PCDNA3.1 真核表达载体PCDNA3.1 Raji细胞 全长cDNA activator caspases 人胚肾293细胞 Western 流式细胞仪分析 细胞凋亡 促凋亡基因 激光共聚焦

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磁性多肽纳米探针的新法制备及其在细胞分离中的应用

6

作者 潘娅丽 储茂泉 +1 位作者 许珊 丁祖泉 《上海生物医学工程》 CAS 2006年第3期136-140,共5页

通过静电自组装方法,在磁性纳米颗粒表面依次修饰带正电的聚二甲基二烯丙基氯化胺(Poly(diallyldimethylammoniumchloride),PDADMAC)和带负电的聚丙烯酸(Poly(acrylicacid),PAA),获得羧基化的磁性纳米复合粒子。进而将PAA上的羧基在1-乙... 通过静电自组装方法,在磁性纳米颗粒表面依次修饰带正电的聚二甲基二烯丙基氯化胺(Poly(diallyldimethylammoniumchloride),PDADMAC)和带负电的聚丙烯酸(Poly(acrylicacid),PAA),获得羧基化的磁性纳米复合粒子。进而将PAA上的羧基在1-乙基-3(3-二甲基胺基丙基)碳二亚胺盐酸盐(1-ethyl-3(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide,EDC)活化下与多肽LyP-1(CGNKRTRGC)上的氨基发生反应,从而使多肽LyP-1成功地连接到磁性颗粒表面,获得的磁性多肽纳米颗粒可靶向分离肺腺癌SPCA-1细胞,但不识别正常人胚肾293细胞。 展开更多

关键词 磁性纳米颗粒 多肽 细胞分离 肺腺癌SPCA-1细胞 人胚肾293细胞

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ZDY101和SZ201对α-分泌性淀粉样前体蛋白生成的影响 被引量：4

7

作者 张乃钲 胡雅儿 夏宗勤 《上海第二医科大学学报》 CSCD 2002年第4期289-291,296,共4页

目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。　方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4～ 48h、48～ ... 目的探讨ZDY10 1和SZ2 0 1及二者不同配比联合应用对HEK2 93sw细胞生成α -分泌性淀粉样前体蛋白的影响。　方法用Westernblot法检测HEK2 93sw细胞生成的α -sAPP含量 ,观察ZDY10 1、SZ2 0 1及二者不同配比联合应用在 2 4～ 48h、48～ 72h时段内α -sAPP生成量的变化。　结果 2 4～ 48h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1浓度分别为 1× 10 - 5mol L时 ,α -sAPP含量分别为 2 .0 6± 0 .73、2 .6 4± 1.2 1,明显高于DMSO对照组的 1.0 0(P <0 .0 1) ;48～ 72h时段的实验中 ,ZDY10 1和SZ2 0 1单独应用且浓度分别为 1× 10 5mol L时 ,α -sAPP含量也明显高于DMSO对照组的 1.0 0 (P <0 .0 1)。二者相加的效果高于ZDY 10 1、SZ2 0 1单独应用 (P <0 .0 5 )。如果二者联合应用 ,降低各自的浓度 ,总浓度仍为 1× 10 - 5mol L时 ,提高α -sAPP含量的效果不明显。　结论ZDY10 1、SZ2 0 1在一定浓度时 ,能增加α -sAPP的生成 ,二者联合应用效果更强。 展开更多

关键词 ZDY101 SZ201 α-分泌性淀粉样前体蛋白 瑞典 双突变APP695cDNA转染 人胚肾293细胞

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亚硫酸钠对人胚肾293细胞的毒性作用与胞内蛋白水平变化的关系 被引量：3

8

作者 白剑英 雷佩玉 +1 位作者 邢锦 王静 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第1期15-18,共4页

目的研究食品添加剂亚硫酸钠(Na2SO3)对人胚肾293细胞(HEK293)的毒性作用与胞内重要蛋白质p53、增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸腺苷(ATP)结合转运子G2(ABCG2)含量改变之间的关系。方法采用细胞毒性试验(MTS)法观察Na2SO3对HEK293细胞的... 目的研究食品添加剂亚硫酸钠(Na2SO3)对人胚肾293细胞(HEK293)的毒性作用与胞内重要蛋白质p53、增殖细胞核抗原(PCNA)和三磷酸腺苷(ATP)结合转运子G2(ABCG2)含量改变之间的关系。方法采用细胞毒性试验(MTS)法观察Na2SO3对HEK293细胞的毒性作用,用蛋白印记法检测HEK293细胞中p53、PCNA和ABCG2蛋白水平。结果0.625～10mmol/L NaSO3处理组的细胞活性与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.01),说明NaSO3对HEK293细胞有明显的毒性作用;蛋白印记分析发现最高剂量组10mmol/L Na2SO3可同时降低细胞内p53、PCNA和ABCG2蛋白水平,而其余剂量组0.039～2.5mmol/L Na2SO3对HEK293细胞内p53、PCNA和ABCG2蛋白的水平无明显影响。结论在本试验条件下,当Na2SO3的接触浓度达到一定水平时对人胚肾293细胞具有明显的毒性作用,这种毒性作用很可能与其降低肾细胞内的蛋白水平,干扰肾细胞的正常功能相关。 展开更多

关键词 亚硫酸钠 p53 增殖细胞核抗原 转运子G2 人胚肾293细胞

原文传递

20(S)-原人参二醇对人胚肾293细胞生长的抑制作用 被引量：2

9

作者 翟旭光 陈广通 《南通大学学报（医学版）》 2010年第5期315-318,F0002,共5页

目的:研究20(S)-原人参二醇(PPD)对人胚肾293细胞(HEK-293细胞)生长抑制作用。方法:采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果:... 目的:研究20(S)-原人参二醇(PPD)对人胚肾293细胞(HEK-293细胞)生长抑制作用。方法:采用台盼蓝染色和噻唑蓝(MTT)法观察PPD对HEK-293细胞增殖的抑制作用,同时通过Hoechst33258染色和DNA Ladder方法测定PPD对HEK-293细胞凋亡影响。结果:PPD可明显降低HEK-293细胞存活率和细胞活性,半数抑制浓度(IC50)为21.8μmol/L。PPD处理后HEK-293细胞核出现典型的凋亡形态学的改变,琼脂糖电泳呈现明显的DNALadder条带。结论:PPD对HEK-293细胞生长有明显的抑制作用并有剂量依赖关系。 展开更多

关键词 20(S)-原人参二醇 人胚肾293细胞 Hoechst33258 噻唑蓝

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先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A定点突变及蛋白表达研究 被引量：2

10

作者 史瑞明 强华 +2 位作者 张艳敏 马爱群 高洁 《中国当代儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期223-226,共4页

目的构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法采用一步法构建SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型... 目的构建先天性QT间期延长综合征相关基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并观察其在人胚肾293(HEK293)细胞中的表达。方法采用一步法构建SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体PEGFP-delQKP-hH1,用脂质体转染法将野生型和突变型质粒分别转染HEK293细胞,激光共聚焦显微镜观察钠通道蛋白在HEK293细胞的表达与定位,Western blot检测其蛋白表达。结果经电泳及DNA测序显示突变型1507-1509位点成功缺失9个碱基,野生型与突变型均在HEK293细胞膜上表达,且表达量差异无统计学意义(P>0.05)。结论成功构建钠通道基因SCN5A-delQKP1507-1509突变型真核表达载体,并在HEK293细胞中表达,为进一步研究其功能奠定基础。 展开更多

关键词 先天性QT间期延长综合征 SCN5A基因 定点突变 真核表达载体 人胚肾293细胞

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不同浓度的多壁碳纳米管对HEK293细胞的影响

11

作者 饶凯敏 信丽丽 景连东 《医学研究杂志》 2008年第3期48-52,共5页

目的研究多壁碳纳米管(MWCNT)对正常人胚肾293细胞的增生及细胞活性的影响。方法采用离体培养的正常人胚肾293细胞株,接种入96孔板,细胞生长18h后加入不同浓度的单壁碳纳米溶液,碳纳米溶液作用于人胚肾293细胞48个h后,使用MTT(methyl th... 目的研究多壁碳纳米管(MWCNT)对正常人胚肾293细胞的增生及细胞活性的影响。方法采用离体培养的正常人胚肾293细胞株,接种入96孔板,细胞生长18h后加入不同浓度的单壁碳纳米溶液,碳纳米溶液作用于人胚肾293细胞48个h后,使用MTT(methyl thiazolyl tetrazoliun)比色法测每个孔的吸光值,计算人胚肾293细胞的生长抑制率并绘制细胞活性曲线。结果不同浓度的多壁碳纳米管对人胚肾293细胞具有不同程度的抑制作用,且当其浓度达到0.5μg/ml时对细胞出现显著的抑制作用。结论多壁碳纳米管能通过正常人胚肾293细胞膜进入细胞内,一定程度地影响细胞的活性,到达一定剂量时,细胞增生能力显著降低。因此,可以推测多壁碳纳米管对正常细胞生长作用有一定的安全剂量范围。 展开更多

关键词 多壁碳纳米管 人胚肾293细胞 MTT比色 细胞增生

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丁酸钠诱导结肠癌细胞株凋亡的实验研究和机制探讨

12

作者 刘成霞 张尚忠 +2 位作者 张孝卫 黄丽华 李铁军 《中华消化杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期835-836,共2页

丁酸钠是膳食纤维在肠道厌氧菌作用下产生的一种4碳短链脂肪酸（丁酸）钠盐。研究发现，丁酸钠可通过不同途径诱导多种肿瘤细胞的凋亡。本研究通过观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的促凋亡作用及其对p53三个重要靶基因p21waf1、Bax和Gad... 丁酸钠是膳食纤维在肠道厌氧菌作用下产生的一种4碳短链脂肪酸（丁酸）钠盐。研究发现，丁酸钠可通过不同途径诱导多种肿瘤细胞的凋亡。本研究通过观察丁酸钠对结肠癌细胞株HT-29的促凋亡作用及其对p53三个重要靶基因p21waf1、Bax和Gadd45的调控，同时以人胚肾293细胞（二倍体）作对照，观察丁酸钠对正常细胞的毒性作用，旨在进一步探讨其抗肿瘤机制。 展开更多

关键词 结肠癌细胞株 促凋亡作用 丁酸钠 机制探讨 实验研究 人胚肾293细胞 P21WAF1 GADD45

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编码绿色荧光蛋白和βARKct的重组腺病毒的制备 被引量：1

13

作者 单志新 郑猛 +4 位作者 余细勇 林秋雄 符永恒 谭虹虹 林曙光 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期392-395,408,共5页

【目的】制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和G茁γ活性抑制剂茁ARKct的重组腺病毒载体。【方法】构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-茁ARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-茁AR... 【目的】制备编码绿色荧光蛋白(GFP)和G茁γ活性抑制剂茁ARKct的重组腺病毒载体。【方法】构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-茁ARKct,经PmeI线性化后转化入含腺病毒骨架质粒pAdEasy-I的BJ5183菌,筛选获得重组腺病毒质粒pAdEasy-gfp-茁ARKct。用LipoFectamine2000将经PacI线性化的pAdEasy-gfp-茁ARKct转染入人胚肾293细胞,包装并扩增出重组腺病毒颗粒rAd-gfp-茁ARKct。用氯化铯高速梯度离心、纯化rAd-gfp-茁ARKct。用rAd-GFP-茁ARKct干预去甲肾上腺素诱导的乳鼠心肌细胞肥大过程,观察对茁肌球蛋白重链(茁MHC)基因表达的影响。【结果】将pAdTrack-CMV-茁ARKct转入含pAdEasy-I的BJ5183菌后获得20%的阳性重组体克隆。重组腺病毒质粒在293细胞中包装并扩增出大量的腺病毒,经PCR鉴定含有茁ARKct编码基因。透析纯化得到重组腺病毒滴度为6.0×106pfu/mL。rAd-GFP-茁ARKct表达的茁ARKct可抑制乳鼠心肌细胞茁MHC的高表达。【结论】成功构建重组腺病毒载体,并在293细胞中包装、制备出可表达茁ARKct的重组腺病毒rAd-gfp-茁ARKct。 展开更多

关键词 绿色荧光蛋白 制备 重组腺病毒载体 人胚肾293细胞 心肌细胞肥大 去甲肾上腺素 肌球蛋白重链 PCR鉴定 穿梭质粒 骨架质粒 病毒颗粒 梯度离心 基因表达 编码基因 病毒滴度 线性化 MHC 抑制剂 PME Pac 包装 氯化铯 重组体

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人CD7 cDNA在HEK293细胞中的表达

14

作者 周艳春 朱锡华 黄云辉 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期356-358,共3页

目的建立表达人白细胞分化抗原 CD7蛋白的哺乳动物细胞模型 ,为深入研究 CD7的功能奠定基础。方法采用 PCR方法扩增 CD7c DNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体 pc DNA3 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定 ;通过电穿孔法将... 目的建立表达人白细胞分化抗原 CD7蛋白的哺乳动物细胞模型 ,为深入研究 CD7的功能奠定基础。方法采用 PCR方法扩增 CD7c DNA,将目的片段定向克隆于真核表达载体 pc DNA3 ,限制性内切酶酶切分析重组质粒并进行序列测定 ;通过电穿孔法将重组真核表达载体 pc DNA 3 / CD7转染于人胚肾 2 93细胞 ( HEK2 93 ) ,经 G4 18筛选得到抗性克隆 ;利用FCM检测 CD7分子在 HEK2 93细胞的表达。结果得到了含 CD7全长 c DNA的重组真核表达载体 pc DNA3 / CD7。FCM分析表明 :转染了 pc DNA3 / CD7的 HEK2 93细胞表达人 CD7蛋白。结论为深入研究 展开更多

关键词 CD7 人胚肾293细胞 真核表达 CDNA HEK293细胞

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负载人microRNA-149的复制缺陷型腺病毒对人肝癌细胞株增殖的影响

15

作者 王洪斌 王宗华 +3 位作者 陈俊颖 邹利全 宋航 陈陵 《肿瘤防治研究》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期548-552,共5页

目的包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-mi R149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响。方法全基因合成micro RNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载micro RNA-... 目的包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒(Ad-mi R149),并检测其对人肝癌细胞株增殖的影响。方法全基因合成micro RNA-149前体核苷酸序列,插入腺病毒穿梭质粒的多克隆位点,随后与包装质粒共转染人胚肾293细胞,包装负载micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒;采用MMT方法检测Ad-mi R149对人肝癌细胞株增殖的影响。结果成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒,采用倍比稀释法检测病毒滴度为5×109 pfu/ml。采用电子显微镜技术,观察到HEK293细胞中大量包装病毒颗粒。采用PCR扩增,Ad-mi R149可获得腺病毒及micro RNA-149特异片段,而对照AdLac Z只能扩增出腺病毒特异片段;采用MTT方法发现,Ad-mi R149可显著抑制肝癌细胞株增殖。结论成功包装负载人micro RNA-149的复制缺陷型腺病毒并初步证实其对肝癌细胞增殖的抑制作用。 展开更多

关键词 人胚肾293细胞 腺病毒 hsa-microRNA-149 微小RNAS 肝癌

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溶质转运体26A家族在HEK-293细胞中的表达和功能

16

作者 范超 傅鸣宇 +1 位作者 肖中举 唐杰 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期801-806,811,共7页

目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体-绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技... 目的构建能在HEK-293细胞膜上表达的溶质转运体26A家族(SLC26A)的蛋白质粒,并对其生理功能进行检测。方法构建多种人类SLC26A转运体-绿色荧光蛋白的融合质粒,并使用瞬时转染技术将其表达在人胚肾293细胞(HEK-293)中。用全细胞膜片钳技术记录表达有SLC26A蛋白的HEK-293细胞的膜电容。结果每个SLC26A转运体均能在HEK-293细胞的细胞膜上表达,并表现出和离子相互作用的生理功能。SLC26A转运体与离子结合的数目与其在细胞膜上的表达程度正相关并具有一定的离子选择性。结论 SLC26A转运体家族能够在HEK-293细胞上表达并具有与转运离子结合的生理功能。在HEK-293细胞系中表达SLC26A转运体家族的研究方法,为进一步研究此家族成员转运功能及其转运机制提供了可能。 展开更多

关键词 人胚肾293细胞 溶质转运体26A家族 全细胞膜片钳 非线性膜电容

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亚硫酸钠对人胚肾293细胞APP蛋白表达影响

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作者 白剑英 王明衡 +1 位作者 王慧宇 梁瑞峰 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期206-207,共2页

目的研究食品添加剂亚硫酸钠（Na2SO3）对β-淀粉样物质（Aβ）前体蛋白（APP）表达的影响。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测人胚肾293（HEK293）中APP基因的mRNA表达水平,用蛋白印迹法（W est-ern-b lotting）检测HEK293中AP... 目的研究食品添加剂亚硫酸钠（Na2SO3）对β-淀粉样物质（Aβ）前体蛋白（APP）表达的影响。方法用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测人胚肾293（HEK293）中APP基因的mRNA表达水平,用蛋白印迹法（W est-ern-b lotting）检测HEK293中APP蛋白水平。结果RT-PCR检测显示,HEK293接触0.039-10 mmol/L Na2SO324 h后细胞内APP基因的3个亚型APP695、APP751、APP770的mRNA水平均未见明显改变。蛋白印迹分析发现,10mmol/L Na2SO3可明显降低细胞内APP蛋白水平,为阴性对照组的0.908倍 而较低剂量组0.039-2.5 mmol/LNa2SO3却可以明显增加细胞内APP蛋白的水平,分别达到阴性对照组的1.596,1.630,1.556和1.446倍。结论亚硫酸钠在一定剂量范围内影响HEK293细胞内APP蛋白水平,可能对老年性痴呆的发生有一定影响,但是细胞内APP蛋白水平的增加不是由该基因转录水平增加所致。 展开更多

关键词 亚硫酸钠 Aβ前体蛋白 人胚肾293细胞

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北京口腔医学2006年第14卷分类索引

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《北京口腔医学》 CAS 2006年第4期302-304,共3页

关键词 口腔医学 分类索引 人胚肾293细胞 腺病毒相关病毒 北京 体外基因转导 颌下腺细胞 致病基因

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HIV-1 vif基因的RNA干扰体外研究 被引量：3

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作者 江雪艳 卢洪洲 +3 位作者 陈秋丽 潘卫 张云智 沈银忠 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期32-36,共5页

目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,... 目的利用RNAi技术对HIV-1 vif基因的转录后水平进行下调,达到抑制vif蛋白表达的目的,为新的抗HIV治疗和预防研究提供理论基础。方法通过体外转录法合成siRNA,与转接有vif基因的表达质粒共同转染HEK293T细胞,荧光显微镜下观察干扰效果,并利用Real-time PCR和Western blot对HIV-1 vif分别从转录和表达水平进行验证。结果将pEGFP-N1-vif重组载体转染HEK 293T细胞后,结果显示vif蛋白可以在细胞中高水平表达;针对vif设计的3段特异的siRNA可以有效且特异地降低vif蛋白的表达。结论RNAi技术可以下调HIV-1蛋白的表达,此技术可以作为一项新的治疗和预防HIV-1的方法用于进一步的研究。 展开更多

关键词 人类免疫缺陷病毒(HIV) vif基因 vif蛋白 RNAI siRNA 人胚肾293T细胞 pEGFP—N1质粒

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小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2基因真核重组表达质粒的构建及其对微管蛋白聚合的影响 被引量：2

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作者 温丽敏 白欣艳 +4 位作者 王玉晶 赵文静 张蘋 王海龙 郭睿 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2017年第8期800-805,共6页

目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响。方法利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技... 目的构建小鼠丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2(serine/arginine-rich protein specific kinase 2,SRPK2)基因(srpk2)的真核重组表达质粒,并分析其对微管蛋白α-Tubulin聚合的影响。方法利用RT-PCR法扩增srpk2的全长cDNA序列,通过分子克隆技术构建真核重组表达质粒pLV-EGFP(2A)Puro-srpk2;在脂质体Lipofectamine 2000的介导下,将真核重组表达质粒及空载体pLV-EGFP2(A)Puro分别转染人胚肾HEK293T细胞,同时设空白对照组(未转染)。采用RT-PCR及Western blot法分别检测HEK293T细胞中srpk2基因mRNA转录及SRPK2蛋白的表达情况;Western blot法分析HEK293T细胞中聚合态和游离态α-Tubulin的含量。结果双酶切及DNA序列鉴定证明真核重组表达质粒pLV-EGFP2(A)Puro-srpk2构建正确,且在HEK293T细胞中实现了srpk2基因过表达。真核重组表达质粒转染组HEK293T细胞中游离态α-Tubulin含量显著低于空载体转染组及空白对照组(P<0.05),而聚合态α-Tubulin水平明显高于空载体转染组及空白对照组(P<0.05)。结论成功构建了srpk2基因的真核重组表达质粒,SRPK2可促进α-Tubulin微管蛋白聚合。 展开更多

关键词 丝氨酸/精氨酸蛋白特异激酶2 真核细胞 基因表达 人胚肾HEK293T细胞 微管蛋白

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