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Nrf2信号因子在镉所致HEK细胞氧化损伤中的作用 被引量：10
1
作者 陈嘉兴 陈智健 +4 位作者 吴礼康 田亚锋 鲜敏 邹志辉 余日安 《华中科技大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期145-149,154,共6页
目的研究Nrf2信号因子在镉所致人胚肾上皮(HEK)细胞氧化应激中的作用。方法取对数生长期HEK细胞,分别以终浓度为0、2.5、5、10、20μmol/L的氯化镉染毒24、48和72h后,收获细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应法检测HEK细胞核因子NF-E2相关... 目的研究Nrf2信号因子在镉所致人胚肾上皮(HEK)细胞氧化应激中的作用。方法取对数生长期HEK细胞,分别以终浓度为0、2.5、5、10、20μmol/L的氯化镉染毒24、48和72h后,收获细胞,采用荧光定量聚合酶链式反应法检测HEK细胞核因子NF-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)mRNA相对表达水平,采用免疫印迹法检测HEK细胞Nrf2核蛋白相对翻译水平。结果 HEK细胞在染镉浓度为20μmol/L下作用48h,SOD活性和GSH-Px活性显著降低(均P<0.05),而作用至72h,GSH-Px活性则有所升高;10μmol/L和20μmol/L镉作用72h,MDA含量均显著高于同时间点对照组和同组24h时间点(均P<0.05)。在10μmol/L和20μmol/L镉作用48和72h,Nrf2mRNA相对表达水平均有显著变化(均P<0.05);在20μmol/L作用48和72h,Nrf2核蛋白相对翻译水平显著升高(均P<0.05)。在镉染毒浓度为20μmol/L下作用于HEK细胞72h时,HEK细胞内GSH-Px活性、MDA含量均与Nrf2核蛋白相对翻译水平呈正相关关系(均P<0.05)。结论镉在引起HEK细胞发生氧化应激反应的同时,还能通过诱导Nrf2信号因子的活化来抑制氧化应激损伤,其机制可能是通过促进抗氧化酶表达实现的。 展开更多
关键词 氯化镉 人胚肾上皮细胞 氧化应激 NRF2
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齐墩果酸拮抗赭曲霉毒素A诱导的HEK293T细胞自噬性死亡 被引量：6
2
作者 廖忻 陈文莹 +3 位作者 李逸舟 李晨 刘鑫淼 谌小立 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第3期286-289,295,共5页
目的:探索齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的肾细胞毒性的拮抗机制。方法:将实验分为6组(对照组、OTA组、OA组、OA预处理组、OA和OTA同时处理组和OA后处理组)处理人胚肾上皮细胞(HEK293T),通过测定细胞存... 目的:探索齐墩果酸(oleanolic acid,OA)对赭曲霉毒素A(ochratoxin A,OTA)的肾细胞毒性的拮抗机制。方法:将实验分为6组(对照组、OTA组、OA组、OA预处理组、OA和OTA同时处理组和OA后处理组)处理人胚肾上皮细胞(HEK293T),通过测定细胞存活率确定OA的拮抗剂量为1μmol/L,并进一步通过OA和OTA对活性氧簇(ROS)含量和自噬相关蛋白表达影响的研究,探明OA拮抗OTA诱导的HEK293T细胞毒性的机制。结果:低浓度的OA(1μmol/L)能够显著提高细胞存活率(p <0.05)。虽然1μmol/L OA不会明显诱导ROS产生和激活自噬(p> 0.05),但是能够通过调节p-m TOR、p-p70S6K、p-Beclin1和LC3的表达来不同程度缓解OTA诱导的HEK293T细胞的自噬性死亡,OA后处理方式效果最为明显(p <0.05)。结论:摄入含OA的食品能够对OTA诱导的肾细胞毒性有一定的拮抗作用。 展开更多
关键词 齐墩果酸 赭曲霉毒素A 人胚肾上皮细胞 自噬
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DNA单链断裂与8-羟基脱氧鸟苷生成在镉所致人胚肾上皮细胞毒性作用分析 被引量：2
3
作者 吴礼康 陈嘉兴 +4 位作者 田亚锋 鲜敏 邹志辉 陈智健 余日安 《中国职业医学》 CAS 北大核心 2016年第4期424-428,共5页
目的研究镉对人胚肾上皮细胞（HEK）DNA单链断裂与8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）生成的影响。方法取对数生长期HEK细胞,分为0.0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L组,分别以相应终浓度的氯化镉染毒24、48和72 h后,收获细胞,采用单细胞凝胶电泳... 目的研究镉对人胚肾上皮细胞（HEK）DNA单链断裂与8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）生成的影响。方法取对数生长期HEK细胞,分为0.0、2.5、5.0、10.0和20.0μmol/L组,分别以相应终浓度的氯化镉染毒24、48和72 h后,收获细胞,采用单细胞凝胶电泳技术检测细胞DNA单链断裂情况,采用酶联免疫吸附法检测细胞内8-OHdG水平。结果 HEK细胞Olive尾距在染毒处理的主效应上有统计学意义（P〈0.01）;其中,HEK细胞Olive尾距在氯化镉染毒剂量为5.0μmol/L时即开始出现较0.0μmol/L组有统计学意义的增长（P〈0.05）;当氯化镉染毒剂量为2.5-10.0μmol/L时,HEK细胞Olive尾距呈随着染毒剂量增加而增加的剂量-效应关系（P〈0.05）。HEK细胞尾部DNA百分率在染毒处理和染毒时间的交互效应上有统计学意义（P〈0.01）;其中,在染毒24 h时间点、当氯化镉染毒剂量为2.5-10.0μmol/L时,以及在染毒48 h时间点、当氯化镉染毒剂量为5.0-20.0μmol/L时,HEK细胞尾部DNA百分率均呈随着氯化镉染毒剂量升高而升高的剂量-效应关系（P〈0.05）;而20.0μmol/L组HEK细胞的尾部DNA百分率在24、48和72 h 3个时间点上,均呈随着染毒时间增加而升高的时间-效应关系（P〈0.05）。HEK细胞内8-OHdG水平在染毒处理的主效应上有统计学意义（P〈0.05）;其中,HEK细胞内8-OHdG水平在氯化镉染毒剂量为10.0μmol/L时才出现较0.0μmol/L组有统计学意义的升高（P〈0.05）。经氯化镉处理后,HEK细胞的尾长、尾/头长比以及细胞内8-OHdG水平均与氯化镉染毒不存在剂量-效应关系和时间-效应关系的改变。结论氯化镉可同时引起HEK细胞发生一定程度的DNA单链断裂与8-OHdG生成;相对于8-OHdG,DNA单链断裂在更低镉染毒剂量下即可出现明显变化,可能与DNA单链断裂比8-OHdG对镉毒性更为敏感有关。 展开更多
关键词 氯化镉 人胚肾上皮细胞 DNA损伤 8-羟基脱氧鸟苷
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化学致癌物诱导人胚肾上皮细胞转化模型的构建 被引量：1
4
作者 唐石伏 王庆 +7 位作者 庞雅琴 赖延东 肖勇梅 张波 李道传 陈丽萍 杨萍 陈雯 《环境与健康杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期399-403,共5页
目的探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值。方法利用siRNA技术构建DNA损伤修复基因缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和... 目的探讨DNA修复缺陷和癌基因高表达人胚肾上皮细胞转化模型在化学致癌物筛查中的应用价值。方法利用siRNA技术构建DNA损伤修复基因缺陷人胚肾上皮细胞(human embryonic kidney epithelial cell,HEK),采用微核实验检测DNA修复基因缺陷和H-rasV12癌基因高表达对DNA损伤修复功能的影响,并测定已知致癌物[硫酸镍(NiSO4)、N-甲基-N'-硝基-N-亚硝基胍(MNNG)]和促癌剂佛波酯(TPA)诱导上述细胞的转化活性,比较两种类型的HEK细胞模型筛查化学致癌物的应用价值。结果应用慢病毒介导的siRNA干扰技术成功构建了HEK-shERCC1、HEK-shERCC2、HEK-shATM和HEK-shMLH1等DNA损伤修复基因缺陷细胞株。与对照细胞HEK-shGFP相比,各DNA修复缺陷HEK细胞的生长速度、细胞形态和琼脂糖克隆的克隆形成率均没有差异,但HEK-sh ERCC2和HEK-shATM细胞对MMC(mitomycin C,MMC)所致遗传损伤的修复能力显著降低,1.0μg/ml MMC处理后,HEK-shERCC2和HEK-shATM细胞的微核率比对照细胞HEK-shGFP分别增加了34‰和30‰(P<0.05)。2μmol/L MNNG、400μmol/L NiSO4和800ng/ml TPA诱导HEKR细胞转化的时间分别是8周、8周和11周,但在染毒后20周均未能诱导各DNA损伤修复缺陷HEK细胞发生转化。结论癌基因高表达转化模型用于化学物质致癌活性的筛查,其灵敏性高于DNA修复基因缺陷细胞转化模型。 展开更多
关键词 DNA损伤修复基因 癌基因 人胚肾上皮细胞 N-甲基-N′-硝基-N-亚硝基胍 硫酸镍 佛波酯 细胞转化
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罗红霉素对转染HERG基因人胚肾上皮细胞HERG钾通道的抑制作用 被引量：1
5
作者 马新方 韩圣娜 +3 位作者 张雨 陈秋 段彦彦 张莉蓉 《郑州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2010年第5期763-766,共4页
目的:研究罗红霉素对转染HERG基因人胚肾上皮细胞(HEK-293)HERG钾通道的抑制作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染法分别将野生型、Y652A和F656C突变型HERG基因转染HEK-293细胞。观察不同浓度的罗红霉素对野生型HERG钾通道电流量效曲线、激活... 目的:研究罗红霉素对转染HERG基因人胚肾上皮细胞(HEK-293)HERG钾通道的抑制作用。方法:采用磷酸钙瞬时转染法分别将野生型、Y652A和F656C突变型HERG基因转染HEK-293细胞。观察不同浓度的罗红霉素对野生型HERG钾通道电流量效曲线、激活和失活曲线的影响,以及对突变型HERG钾通道电流的作用;HERG钾通道电流的记录采用全细胞膜片钳技术。结果:罗红霉素(0.1、1、3、10、30、100和300μmol/L)浓度依赖性地抑制野生型HERG钾通道电流,其IC50为(55.8±9.1)μmol/L,对野生型HERG钾通道电流的激活曲线和失活曲线无影响(激活曲线:tV1/2=1.011,tk=1.824;失活曲线:tV1/2=0.749,tk=0.859,P均>0.05);与野生型HERG比较,Y652A和F656C突变型HERG可显著减弱100、300和1000μmol/L罗红霉素对HERG钾通道电流的阻断作用(tY652A=18.908、18.184和26.738,tF656C=2.926、4.260和4.143,P均<0.05)。结论:罗红霉素能阻断HEK-293细胞HERG钾通道,Y652A和F656C是罗红霉素与HERG钾通道结合的关键位点。 展开更多
关键词 罗红霉素 HERG钾通道 人胚肾上皮细胞
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