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常规脂质体介导shRNA转染建立CYP2E1表达沉默的人肝实质细胞模型 被引量：2
1
作者 周明 李浩 +3 位作者 王子建 李登科 全正扬 孙震晓 《现代生物医学进展》 CAS 2018年第1期18-22,69,共6页
目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1(cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型。方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1的shRNA干扰载体(sh CYP2E1)以及同源无干扰作用的对照载体(sh... 目的:利用常规脂质体介导转染shRNA(short hairpin RNA)建立CYP2E1(cytochrome P450 2E1)表达沉默的人肝实质细胞模型。方法:采用文献报道的CYP2E1的高效干扰位点,构建CYP2E1的shRNA干扰载体(sh CYP2E1)以及同源无干扰作用的对照载体(sh NC,non-specific control),并通过阳离子脂质体Lipo Fiter TM介导转染人肝实质L02细胞,通过绿色荧光蛋白报告基因的表达指示及G418筛选阳性克隆,q RT-PCR(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction)测定稳定转染细胞系中CYP2E1的表达情况。结果:确定转染后G418最佳筛选浓度为400μg/m L,维持浓度为200μg/m L;获得了荧光表达率较高的L02-CYP2E1细胞(CYP2E1沉默组)和L02-NC细胞(转染对照组);q RT-PCR结果显示,所建细胞系L02-CYP2E1相对于L02-NC,其CYP2E1表达下调了近70%(P<0.05),表明CYP2E1干扰表达细胞模型构建成功。结论:利用常规脂质体转染法成功转染人肝实质L02细胞CYP2E1shRNA,建立了CYP2E1表达沉默的细胞系。 展开更多
关键词 脂质体转染 CYP2E1 shRNA 人肝实质细胞 G418 qRT—PCR
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基于细胞色素氧化酶CYP2D6的何首乌肝细胞毒性及相关成分研究 被引量：9
2
作者 王呈谕 李登科 +2 位作者 全正扬 胡英还 孙震晓 《中国药物警戒》 2021年第3期220-227,239,共9页
目的探究何首乌及其主要成分对人肝细胞L02中细胞色素氧化酶CYP2D6 mRNA表达的影响以及抑制CYP2D6活性或表达对何首乌肝细胞毒性的影响及相关成分辨识。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix,P... 目的探究何首乌及其主要成分对人肝细胞L02中细胞色素氧化酶CYP2D6 mRNA表达的影响以及抑制CYP2D6活性或表达对何首乌肝细胞毒性的影响及相关成分辨识。方法利用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)确定何首乌水提物(Polygoni Multiflori Radix,PMR)及其主要成分对L02细胞CYP2D6 mRNA表达的影响;使用CYP2D6抑制剂奎尼丁初步探究PMR对CYP2D6低活性L02细胞系的细胞毒作用;构建CYP2D6沉默的L02细胞系L02-shCYP2D6,进一步研究L02细胞中CYP2D6表达降低对PMR及其主要成分肝细胞毒性的影响;可能的肝细胞毒性成分与人肝微粒体进行体外孵育,通过考察加入不同CYP450酶特异性抑制剂对其代谢消除率的影响,探究影响其代谢的主要CYP450酶。结果在实验浓度下,PMR和芦荟大黄素(AE)对CYP2D6 mRNA表达有显著抑制作用(P<0.01),大黄素(EM)无明显影响,2,3,5,4’-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷(TSG)仅在高浓度有一定激活作用,其余浓度无影响;PMR联合奎尼丁作用于L02细胞,发现PMR在高浓度下对L02细胞有一定毒性(P<0.01),各浓度抑制剂与之联用后均明显加重了其肝细胞毒性(P<0.01);PMR及其主要成分作用于CYP2D6敲低的L02细胞系,除TSG在高浓度下提升了肝细胞毒性外(P<0.01),PMR、EM、AE在实验浓度范围内肝细胞毒性均显著增加(P<0.01);人肝微粒体体外孵育实验显示,CYP2D6为EM、AE重要的代谢酶。结论PMR能够抑制肝细胞中CYP2D6的表达,而CYP2D6的低活性或低表达能够加重PMR肝细胞毒性,其中主要的毒性成分为EM和AE。 展开更多
关键词 何首乌 代谢特异质肝毒性 细胞色素氧化酶CYP2D6 人肝实质L02细胞 大黄素 芦荟大黄素 RNA干扰
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