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酰基甘油激酶敲低对结直肠肿瘤细胞HCT116增殖迁移的影响
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作者 高娜娜 贾平平 石汉平 《肿瘤代谢与营养电子杂志》 2021年第1期62-66,共5页
目的探讨AGK敲低对人结肠肿瘤细胞HCT‑116增殖、迁移的影响。方法本实验通过构建AGK基因的shRNA沉默慢病毒质粒,利用第二代慢病毒包装系统制备、浓缩慢病毒液,并感染人结肠肿瘤细胞HCT‑116细胞株。经过嘌呤霉素抗性筛选获得敲低AGK基因... 目的探讨AGK敲低对人结肠肿瘤细胞HCT‑116增殖、迁移的影响。方法本实验通过构建AGK基因的shRNA沉默慢病毒质粒,利用第二代慢病毒包装系统制备、浓缩慢病毒液,并感染人结肠肿瘤细胞HCT‑116细胞株。经过嘌呤霉素抗性筛选获得敲低AGK基因的HCT‑116细胞系。利用qRT‑PCR和Western blotting检测AGK敲低后在mRNA水平和蛋白水平表达情况;利用CCK‑8试剂盒检测AGK敲低稳定细胞株细胞增殖情况;利用划痕实验检测AGK敲低后对细胞迁移的影响。结果本实验构建的AGK基因的shRNA沉默慢病毒质粒可以有效敲低HCT116中内源性AGK。同野生型细胞株相比,AGK敲低稳转株HCT116‑ASR‑876和HCT116‑ASR‑878细胞中AGK的mRNA水平和蛋白水平表达显著地降低(P<0.001)。通过CCK‑8检测发现,AGK敲低后显著降低细胞增殖能力(P<0.05)。划痕实验表明,AGK敲低能显著抑制细胞迁移作用。结论shRNA慢病毒感染后,HCT‑116细胞中AGK基因的表达量显著低于野生型细胞株,并且初步验证了AGK可以促进HCT116细胞的增殖和迁移。 展开更多
关键词 酰基甘油激酶 敲低 直肠肿瘤细胞 增殖 迁移
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