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高表达H2型人类组织血型抗原HEK-293T细胞系的构建及其应用
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作者 秦海艳 谢忆 +6 位作者 张巧玲 马素娟 李晨 杨林鹏 付艳丽 李奇蒙 杨俊杰 《微生物学免疫学进展》 CAS 2024年第4期9-15,共7页
目的通过在人胚肾-293T(human embryo kidney-293T,HEK-293T)细胞中过表达岩藻糖转移酶2(fucosyltransferases 2,FUT2)基因,进而催化诺如病毒受体人类组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)的形成,构建介导诺如病毒和受体发生... 目的通过在人胚肾-293T(human embryo kidney-293T,HEK-293T)细胞中过表达岩藻糖转移酶2(fucosyltransferases 2,FUT2)基因,进而催化诺如病毒受体人类组织血型抗原(histo-blood group antigen,HBGA)的形成,构建介导诺如病毒和受体发生相互作用的细胞系。方法构建FUT2慢病毒质粒,采用Lipofectamine 2000将FUT2慢病毒质粒及pMD.2G和psPAX2包装质粒共转染HEK-293T细胞,收获慢病毒颗粒。慢病毒颗粒感染对数生长期的HEK-293T细胞,嘌呤霉素加压筛选获得HEK-293T/FUT2细胞系。PCR鉴定FUT2基因是否整合到基因组中,RT-qPCR检测HEK-293T/FUT2细胞FUT2 mRNA转录水平,流式细胞术分析HEK-293T/FUT2细胞HBGAs的表达,间接免疫荧光法分析HEK-293T/FUT2细胞与诺如病毒病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)的结合活性。结果成功构建了序列正确的慢病毒质粒PLVX-IRES-Puro-FUT2,并获得了慢病毒颗粒。慢病毒颗粒感染HEK-293T细胞后,通过嘌呤霉素加压筛选获得了HEK-293T/FUT2细胞系,PCR验证显示,FUT2基因成功整合到HEK-293T细胞基因组中。HEK-293T/FUT2细胞FUT2 mRNA水平提高了330倍。99.9%的HEK-293T/FUT2细胞表达H2型人类组织血型抗原。GI.1重组诺如病毒VLP可以与HEK-293T/FUT2细胞产生很好的结合反应,EC50为2.007μg/mL。结论建立了H2型人类组织血型抗原稳定高表达的HEK-293T细胞系,并基于该细胞系初步建立了GI.1型重组诺如病毒VLP结合活性评价方法。 展开更多
关键词 人类组织血型抗原 人胚肾293T细胞(HEK-293T细胞) 诺如病毒 α-1 2岩藻糖转移酶 结合活性
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GⅡ.4 Sydney[P31]型诺如病毒GZ19株进化及其受体结合特征分析
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作者 王金冬 马亚林 段招军 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期531-536,544,共7页
目的分析我国GⅡ.4型诺如病毒(norovirus,NoV)GZ19株的进化特征,并明确其结合组织血型抗原(histoblood group antigens,HBGAs)受体的能力和方式。方法根据GZ19株中的ORF2区序列,构建进化树,并分析其在HBGAs结合位点(HBGA binding sites,... 目的分析我国GⅡ.4型诺如病毒(norovirus,NoV)GZ19株的进化特征,并明确其结合组织血型抗原(histoblood group antigens,HBGAs)受体的能力和方式。方法根据GZ19株中的ORF2区序列,构建进化树,并分析其在HBGAs结合位点(HBGA binding sites,HBSs)和关键阻断表位的氨基酸序列。采用原核表达系统表达P颗粒并进行纯化,获得的蛋白经SDS-PAGE和间接ELISA法鉴定后,采用唾液结合试验和寡糖结合试验分析P颗粒的糖结合特征。结果GZ19株属于GⅡ.4 Sydney[P31]谱系,其受体结合位点和阻断表位的氨基酸序列相对保守,与近5年其他GⅡ.4Sydney[P31]毒株具有较高的同源性,而与GⅡ.4 Sydney 2012原型株和GⅡ.4 Sydney[P16]株的差异较大。P颗粒仅与A、B、O、AB分泌型唾液和H-di寡糖结合。结论GZ19株代表目前GⅡ.4 Sydney[P31]NoV的进化方向,P颗粒的成功表达及其与HBGAs受体的结合特征分析,为研究我国GⅡ.4 NoVs的流行进化规律及疫苗开发奠定了基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 GⅡ.4型 P颗粒 人类组织血型抗原
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我国GII.4型诺如病毒Sydney株P颗粒的表达及其组织血型抗原结合特征 被引量:2
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作者 张婷 龙艳 +2 位作者 张绪富 胡贵方 戴迎春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期344-348,共5页
目的表达我国新发现GII.4型诺如病毒优势流行株—Sydney株的P颗粒,并探究其结合人类组织血型抗原(HBGAs)受体特征及变化规律。方法扩增SH 2012_05株中的P区域序列,构建进化树分析其氨基酸序列,并在原核表达系统中表达P颗粒。目的重组蛋... 目的表达我国新发现GII.4型诺如病毒优势流行株—Sydney株的P颗粒,并探究其结合人类组织血型抗原(HBGAs)受体特征及变化规律。方法扩增SH 2012_05株中的P区域序列,构建进化树分析其氨基酸序列,并在原核表达系统中表达P颗粒。目的重组蛋白经Western blot确定其特异性,并采用ELISA法检测P颗粒结合HBGAs的能力及方式。结果 SH 2012_05毒株P区域与Sydney/2012原型株同源性为99.1%,为GII.4/Sydney基因簇。SDS-PAGE电泳和Western blot分析验证SH 2012_05株P颗粒具有特异性。其结合HBGAs受体方式与以往流行的基因簇一致,即与A、B、O、AB型分泌型唾液均能结合,其中与B型抗原亲和力最高。结论成功表达了我国新发现GII.4型诺如病毒Sydney株的P颗粒,明确了Sydney株能结合分泌型HBGAs受体的特征。本研究为诺如病毒疫苗株选择提供了技术储备,这将为GII.4型诺如病毒的预防和控制提供科学基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 GII.4型 Sydeny株 P颗粒 人类组织血型抗原
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