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恶性血液病细胞株人端粒重复序列结合因子基因突变情况的研究
1
作者 孙洁 黄河 朱园园 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期269-272,共4页
目的　检测 1 1个端粒酶阳性的恶性血液病细胞株中人端粒重复序列结合因子 1(TERF1 )基因的突变情况并探讨其意义。方法　用生物医学软件预测TERF1基因组结构并用PCR和测序的方法证实 ,确定TERF1全长基因组结构。采用端粒重复序列扩增 (... 目的　检测 1 1个端粒酶阳性的恶性血液病细胞株中人端粒重复序列结合因子 1(TERF1 )基因的突变情况并探讨其意义。方法　用生物医学软件预测TERF1基因组结构并用PCR和测序的方法证实 ,确定TERF1全长基因组结构。采用端粒重复序列扩增 (TRAP) 酶联免疫吸附实验 (ELISA)检测细胞株的端粒酶活性。以PCR产物直接测序的方法检测髓系白血病细胞株K5 6 2、HL 6 0、U937、NB4、THP 1、HEL、Dami,淋巴细胞白血病细胞株 6T CEM、Jurkat和Raji,以及骨髓增生异常综合征 (MDS RAEB)细胞株MUTZ 1中TERF1外显子的突变情况 ,以正常人骨髓单个核细胞作对照。结果　TERF1基因组全长 38.6kb ,由 1 0个外显子和 9个内含子构成 ,外显子和内含子的接合边界获确认。 1 1种恶性血液病细胞株均呈端粒酶阳性。在所检测的细胞株中未发现外显子存在有意义的突变 ,但在外显子周边的部分内含子中发现 4个位点有变异 ,其中MUTZ 1的变异有别于白血病细胞株 ,未发现髓系和淋巴细胞系细胞株之间的变异情况有差异。 展开更多
关键词 恶性血液病 细胞株 人端粒重复序列 基因突变 DNA突变
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端粒重复序列结合因子在肾脏肿瘤中的表达水平 被引量：3
2
作者 施继敏 丁伟 +3 位作者 黄河 张志根 汤立旦 林茂芳 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2004年第6期496-499,508,共5页
目的 :研究 TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤及相应癌旁组织中的表达水平。方法 :定量分析肾组织中 TRF1蛋白的表达水平 ,应用经倍比稀释的 TRF13 3 -2 77纯化蛋白作为定量标准 ,建立了以抗 TRF13 3 -2 77单抗作定量 Wes-tern- blot的方法 ,并... 目的 :研究 TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤及相应癌旁组织中的表达水平。方法 :定量分析肾组织中 TRF1蛋白的表达水平 ,应用经倍比稀释的 TRF13 3 -2 77纯化蛋白作为定量标准 ,建立了以抗 TRF13 3 -2 77单抗作定量 Wes-tern- blot的方法 ,并以该方法检测 TRF1蛋白在组织中的表达水平。结果 :32例肾肿瘤样本均不同程度的表达TRF1蛋白质 ,均值为 2 .4 2 8± 1.35 2 μg/ μl,癌旁自身对照组织 TRF1的表达水平为 3.6 11± 1.92 2 μg/ μl(t=5 .776 ,P<0 .0 0 1)。肿瘤组织内 TRF13 3 -2 77表达水平较相应癌旁组织显著降低 ,并与肿瘤的恶性程度相关 ,差异具有显著性意义 (P<0 .0 1)。结论 :TRF1蛋白在肾脏恶性肿瘤中的表达明显减低 ,并与肿瘤恶性程度呈负相关。 展开更多
关键词 端粒 肾肿瘤 肾癌 人端粒重复序列结合因子 单克隆抗体 WESTERN-BLOT 蛋白表达水平
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人端粒重复序列结合因子(hTRF1)蛋白质在急性白血病中的表达水平与端粒酶活性关系的研究 被引量：3
3
作者 施继敏 黄河 +1 位作者 陈巧芳 林茂芳 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第5期858-861,共4页
为了研究人端粒重复序列结合因子(TRF1)蛋白质在急性白血病(AL)及正常骨髓组织中的表达水平,AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系,定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平,并应用经... 为了研究人端粒重复序列结合因子(TRF1)蛋白质在急性白血病(AL)及正常骨髓组织中的表达水平,AL和正常骨髓组织中端粒酶活性及TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系,定量分析了AL患者及正常人骨髓组织中TRF1蛋白质的表达水平,并应用经倍比稀释的TRF133-277纯化蛋白质作为定量标准,建立以抗TRF133-277单克隆抗体的定量Westernblot的方法,而且以该方法检测TRF1蛋白质在组织中的表达水平;另外,应用TRAP-PCR-ELISA法检测AL患者及正常人骨髓组织端粒酶活性,以研究TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性的关系。结果表明:20例AL患者骨髓组织中TRF1表达水平较正常人骨髓组织显著降低,差异具有显著性(P<0.01);急性淋巴细胞性白血病患者的TRF1表达水平较急性非淋巴细胞性白血病患者略减低,但差异无统计学意义(P>0.05);化疗缓解的患者TRF1表达水平较前增高,但仍低于正常(P<0.01);化疗后完全缓解患者的TRF1表达水平较未缓解的患者显著增高,差异具有显著性(P<0.01);AL患者初发未治时骨髓细胞端粒酶的活性明显高于正常人(P<0.05)和首次缓解者(P<0.01);初发未治时,ALL患者骨髓细胞端粒酶活性略高于ANLL患者,但差异无统计学意义(P>0.05)。TRF1蛋白质表达水平与端粒酶活性呈明显负相关(P<0.001)。结论:TRF1蛋白质在AL患者骨髓细胞中的表达明显减低,且与疗效及端粒酶活性相关。 展开更多
关键词 急性白血病 人端粒重复序列结合因子 蛋白质表达水平 端粒酶活性
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人端粒重复序列结合因子在急性白血病细胞中的表达及与端粒酶活性的关系 被引量：2
4
作者 孙洁 来晓瑜 +7 位作者 朱园园 蓝建平 汤立旦 李静远 余建 谭亚敏 林茂芳 黄河 《浙江大学学报（医学版）》 CAS CSCD 2004年第6期491-495,共5页
目的 :研究人端粒重复序列结合因子 (TRF1)在 30例急性白血病细胞中的表达 ,了解 TRF1表达与急性白血病分型的关系 ,以及与端粒酶活性的关系。方法 :用荧光定量 RT- PCR定量检测 30例急性白血病细胞中TRF1m RNA表达情况 ,同时检测 h TER... 目的 :研究人端粒重复序列结合因子 (TRF1)在 30例急性白血病细胞中的表达 ,了解 TRF1表达与急性白血病分型的关系 ,以及与端粒酶活性的关系。方法 :用荧光定量 RT- PCR定量检测 30例急性白血病细胞中TRF1m RNA表达情况 ,同时检测 h TERT m RNA的表达 ,并分析两者之间的相关性。结果 :TRF1在急性非淋巴细胞性白血病 (ANLL)细胞中的表达 0 .0 12 6 (0 .0 12 7～ 0 .0 5 46 )明显低于正常人骨髓单个核细胞中的表达 0 .0 4 5 7(0 .0 0 839～ 0 .2 6 2 ) (P<0 .0 0 1) ,但在急性淋巴细胞性白血病 (ALL)细胞中的表达 0 .0 74 5 (1.92× 10 -6～ 0 .193)与正常人骨髓单个核细胞比较差异无显著性 ,且在 ANL L细胞中的表达明显低于 ALL细胞中的表达 (P=0 .0 0 1)。TRF1和 h TERT在急性白血病细胞和正常人骨髓单个核细胞中的表达无显著相关性 (r=- 0 .173,P=0 .2 0 7)。结论 :TRF1m RNA在 ANLL细胞中表达明显降低 ,而在 ALL细胞中表达无显著改变 ,提示 ANLL细胞中 TRF1可能通过调控端粒长度对端粒酶起间接负调控作用。 展开更多
关键词 端粒 端粒酶 人端粒重复序列结合因子 急性白血病 表达
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抗人端粒重复序列结合因子多克隆抗体制备及纯化 被引量：2
5
作者 黄河 陈水云 +3 位作者 陈巧芳 郑伟燕 罗依 傅剑云 《浙江医学》 CAS 2001年第3期153-154,共2页
目的 制备并纯化抗人端粒重复序列结合因子片段 (TRF133 -277)的多克隆抗体。方法 运用基因工程的方法表达人工TRF133 -277,将表达蛋白经亲和层析大量纯化后免疫白兔 ,制备血清过柱纯化 ,将TRF133 -277 和GST交连于CNBr-活化的Sephrose4... 目的 制备并纯化抗人端粒重复序列结合因子片段 (TRF133 -277)的多克隆抗体。方法 运用基因工程的方法表达人工TRF133 -277,将表达蛋白经亲和层析大量纯化后免疫白兔 ,制备血清过柱纯化 ,将TRF133 -277 和GST交连于CNBr-活化的Sephrose4B柱 ,血清过GST柱以去除抗GST抗体 ,然后经GST-TRF1柱吸收抗TRF1抗体 ,获得兔抗人TRF1多克隆抗体。结果 用此抗体作为一抗 ,在人膀胱癌细胞总蛋白中检到68KD的特异条带 ,与阳性对照基本一致。 结论 兔抗人TRF1多克隆抗体制备方法有效 ,所获抗TRF133 -277 展开更多
关键词 人端粒重复序列结合因子 多克隆抗体 制备 纯化
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抗人端粒重复序列结合因子(TRF1^(33-277))单克隆抗体的制备及生物学特性初步鉴定 被引量：2
6
作者 黄河 施继敏 +3 位作者 陈巧芳 罗依 丁伟 楼基余 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第12期631-633,共3页
目的　制备抗人端粒重复序列结合因子片段 (TRF13 3 2 77)单克隆抗体 (单抗 ) ,探讨其生物学特性。方法　以GST TRF13 3 2 77融合蛋白为抗原 ,经细胞融合及ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞 ,对其进行染色体核型分析 ,将此单抗作为探... 目的　制备抗人端粒重复序列结合因子片段 (TRF13 3 2 77)单克隆抗体 (单抗 ) ,探讨其生物学特性。方法　以GST TRF13 3 2 77融合蛋白为抗原 ,经细胞融合及ELISA方法筛选获得阳性杂交瘤细胞 ,对其进行染色体核型分析 ,将此单抗作为探针用于Westernblot和免疫组化检测标本。结果　获得1个抗TRF1蛋白的杂交瘤细胞株。以抗TRF13 3 2 77单抗作Westernblot检测正常人及急性白血病患者骨髓、大肠癌组织及近旁正常粘膜组织提取蛋白 ,在相对分子质量 6 0 0 0 0处有一特异性条带 ,与阳性对照纯化TRF1蛋白相一致 ,免疫组化显示该抗体在上皮细胞及骨髓造血细胞胞浆中阳性着色。结论　制备了具有高度特异性的抗TRF13 3 2 77单抗 ;建立了Westernblot和免疫组化检测组织表达TRF1蛋白的方法。 展开更多
关键词 生物学特性 鉴定 人端粒重复序列结合因子 单克隆抗体 免疫组化 制备
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人端粒重复序列结合因子cDNA全长克隆及在大肠杆菌中的高效表达 被引量：1
7
作者 黄河 R Parwaresh +1 位作者 U Kellner 陈巧芳 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第5期424-425,共2页
关键词 肿瘤 人端粒重复序列结合因子 CDNA 大肠杆菌
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人端粒及端粒重复序列结合因子的研究现状
8
作者 刘新 《国际泌尿系统杂志》 2001年第S1期138-140,共3页
关键词 端粒长度 端粒酶 人端粒重复序列结合因子 染色体 结构和功能 氨基酸组成 调节因子 体外实验 突出端 负作用
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人端粒重复序列结合蛋白研究进展
9
作者 倪万茂 钱文斌 《国外医学（输血及血液学分册）》 2003年第6期522-525,共4页
近年来研究表明,端粒重复序列结合蛋白在调节端粒的长度和功能方面起着十分重要的作用。这种作用依赖或不依赖于端粒酶,与细胞衰老和肿瘤发生、发展有密切关系。本文介绍近年来发现的一些重要的端粒重复序列结合蛋白研究进展。
关键词 人端粒重复序列结合蛋白 细胞衰老 肿瘤 hRapl TRF2
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TRF1和TANK1在非小细胞肺癌中的异常表达及其临床意义 被引量：1
10
作者 胡坚 孙鹂 张翀 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期201-203,211,共4页
目的:研究端粒结合蛋白TRF1(telomeric repeat binding factor1)和端锚蛋白TANK1(tankyarse1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,探讨TRF1mRNA与NSCLC的组织类型、病理分级、TNM分期及淋巴结转移的关系。方法:... 目的:研究端粒结合蛋白TRF1(telomeric repeat binding factor1)和端锚蛋白TANK1(tankyarse1)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达,探讨TRF1mRNA与NSCLC的组织类型、病理分级、TNM分期及淋巴结转移的关系。方法:采用RT-PCR对40例NSCLC患者癌组织、癌旁组织的TRF1、TANK1mRNA进行半定量检测。40例患者中20例为腺癌,20例为鳞癌。结果:癌组织TRF1mRNA水平比癌旁组织明显下降,并且低分化癌组织中的TRF1mRNA水平比高分化癌组织中明显下降,差异均有显著性(P<0.05);癌组织TANK1mRNA表达水平比癌旁组织明显增加,差异有显著性(P<0.05)。结论:NSCLC组织中TRF1mRNA呈低表达;而TANK1mRNA呈高表达;TRF1mRNA的表达水平与组织分化程度相关。 展开更多
关键词 人端粒重复序列结合因子 端锚蛋白 非小细胞肺癌
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