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重组人神经肽Y融合蛋白的表达、纯化及生物信息学分析研究 被引量：9
1
作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第17期2198-2202,共5页
目的在大肠杆菌中表达人神经肽Y,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-NPY转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-... 目的在大肠杆菌中表达人神经肽Y,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-NPY转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western印迹鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析NPY蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-NPY重组质粒的DE3菌,表达出重组人NPY融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了NPY的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-NPY在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对NPY蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 人神经肽y 融合蛋白 包涵体 纯化 生物信息学
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重组人神经肽Y受体Y1融合蛋白的表达、纯化及其生物信息学分析研究 被引量：1
2
作者 丁克祥 董萍 +6 位作者 郑永晨 杨永鹏 朱晓亮 韩晋云 单志新 丁宇 丁振华 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第18期2331-2334,共4页
目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY1受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western Blot鉴定,表达产物包涵体经... 目的在大肠杆菌中表达人神经肽YY1受体,并对之进行纯化、鉴定及生物信息学分析。方法取已构建好且经测序确认无误的重组质粒pET28a-Y1转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白,并经SDS-PAGE检测和Western Blot鉴定,表达产物包涵体经Ni2+-NTA亲和层析纯化。然后利用相关在线软件进行生物信息学分析Y1受体蛋白。结果经IPTG诱导含有pET28a-Y1重组质粒的DE3菌,表达出重组人Y1融合蛋白。重组蛋白经Ni2+-NTA亲和层析进行纯化后,得到了较高纯度的融合蛋白。经相关在线软件分析后获得了Y1受体的相关生物学特性。结论重组质粒pET28a-Y1在大肠杆菌DE3中成功表达,亲和层析纯化后获得较高纯度融合蛋白,并对Y1受体蛋白的生物学特征进行了预测,为进一步研究其生物学功能及其抗体的研制奠定了基础。 展开更多
关键词 人神经肽y y1受体 融合蛋白 包涵体 纯化 生物信息学
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抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：1
3
作者 丁克祥 董萍 +7 位作者 杨永鹏 孙乐 孙哲 尹晴 韩晋云 左夏林 丁宇 丁振华 《国际老年医学杂志》 2011年第4期145-150,共6页
目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，用ELISA法筛选出阳性克隆，经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株，并对得到的单抗进行亚类、效价... 目的：建立抗人神经肽Y（NPY）的单克隆抗体细胞株。方法：用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB／c小鼠，取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2／0融合，用ELISA法筛选出阳性克隆，经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株，并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析。结果：获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株，IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG2b、IgG1，腹水效价为1：20万～1：200万，纯化抗体效价为0．05μg／ml-0．0005μg／ml，4A8抗体纯度达到95％以上，抗体亲和常数分别为5．27×10^6L／mol、3．39×10^6L／mol、1．05×10^7L／mol，不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇。结论：成功制备了3株抗hNPY单抗，为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础。 展开更多
关键词 人神经肽y 多肽合成 BALB/C小鼠 单克隆抗体 制备 鉴定
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