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题名重组人神经生长因子β基因腺病毒的构建与鉴定
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作者
柏宏亮
白转丽
王瑞
何佑成
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机构
西安交通大学医学院第一附属医院烧伤整形科
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出处
《山西医科大学学报》
CAS
2014年第11期1013-1017,1117,共6页
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文摘
目的构建表达人神经生长因子β基因片段的重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β。方法以健康人白细胞中DNA为模板,扩增h NGF-β基因片段,导入p GEM-T-Easy质粒,获得重组质粒p GEM-T/h NGF-β。经酶切鉴定后与复制缺陷型腺病毒穿梭质粒p ACCMV-p Lp A构建重组腺病毒穿梭质粒p ACCMV-h NGF-β。酶切鉴定后再与辅助包装质粒PJM17共转染293细胞,经同源重组后,构建复制缺陷型重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β。对Ad CMV-h NGF-β进行基因鉴定,并测定滴度及在He La细胞中的表达。结果顺利克隆出h NGF-β基因片段,构建的重组质粒p GEM-T/h NGF-β和重组腺病毒穿梭质粒p ACCMVh NGF-β,经酶切鉴定实际结果与理论推导符合。构建的复制缺陷型重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β滴度为1.2×1012pfu/ml,并能在He La细胞中表达。结论以h NGF-β基因片段为基础成功构建了重组腺病毒Ad CMV-h NGF-β,测试表明该重组病毒具有高滴度活性和良好的感染人类细胞、表达目的蛋白的能力。
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关键词
人神经生长因子(hngf)
基因表达
重组腺病毒
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Keywords
human nerve growth factor（hngf）
gene expression
recombinant adenovirus
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
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