LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血细胞体外培养的影响 被引量：4

1

作者 郁心 苗莉 缪竞诚 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期105-107,共3页

目的观察经LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血干/祖细胞(HSC/HPC)体外培养的影响。方法用脂质体转染法将pcDNA3.0-LIF真核表达质粒导入ECV-304人脐静脉内皮细胞,并通过G418筛选获得能稳定表达LIF的ECV-304转基因细胞。用LIF基因修饰的... 目的观察经LIF基因修饰的ECV-304细胞对脐血造血干/祖细胞(HSC/HPC)体外培养的影响。方法用脂质体转染法将pcDNA3.0-LIF真核表达质粒导入ECV-304人脐静脉内皮细胞,并通过G418筛选获得能稳定表达LIF的ECV-304转基因细胞。用LIF基因修饰的ECV-304细胞与脐血CD34+细胞共培养,检测培养前后CD54+细胞、CD34+CD54+细胞和CD34+CD62L+细胞数量的变化,观察转LIF基因的ECV-304细胞对脐血造血细胞的影响。结果成功获得经LIF基因修饰的ECV-304转基因细胞,该细胞能支持脐血CD34+细胞的扩增,且能维持细胞表面与归巢有关的黏附分子的表达,培养后CD34+CD54+和CD34+CD62L+细胞亚群数量显著增加。结论经LIF基因修饰的ECV-304细胞可改善脐血造血细胞体外培养的微环境,有助于抑制HSC/HPC的分化并保持其归巢能力。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 真核表达 黏附分子 L选择素 CD34^+细胞

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人白血病抑制因子真核表达载体的构建及在哺乳动物细胞中的表达 被引量：1

2

作者 马涛 肖雪 +2 位作者 吕琦 王泽华 马岚 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2006年第S1期387-392,395,共7页

应用RT-PCR方法从人子宫内膜组织总RNA扩增出hLIF的全长基因,然后将其克隆至pcDNA3上,成功构建了重组真核表达载体pcDNA3/hLIF.利用脂质体介导将这一表达载体导入COS-7细胞和CHO-K1细胞,分别获得了hLIF的瞬时表达和稳定表达,为进一步进... 应用RT-PCR方法从人子宫内膜组织总RNA扩增出hLIF的全长基因,然后将其克隆至pcDNA3上,成功构建了重组真核表达载体pcDNA3/hLIF.利用脂质体介导将这一表达载体导入COS-7细胞和CHO-K1细胞,分别获得了hLIF的瞬时表达和稳定表达,为进一步进行hLIF生物学功能研究和hLIF在哺乳动物细胞中的高表达研究奠定了基础. 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 COS-7细胞 CHO-K1细胞 克隆 基因表达

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重组人白血病抑制因子的原核表达及优化 被引量：1

3

作者 曹顺 杨玉露 +2 位作者 徐光华 陈思佳 王天云 《新乡医学院学报》 CAS 2019年第3期228-233,共6页

目的在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件。方法将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0. 5、0. 6、0. 8、1. 0)、不... 目的在大肠杆菌中表达重组人白血病抑制因子(HLIF)蛋白,并探索其高效表达的条件。方法将HLIF重组质粒转化至大肠杆菌BL21,分别给予不同诱导时间(4、8、12、16、20、24 h)、不同浓度大肠杆菌(吸光度值分别为0. 5、0. 6、0. 8、1. 0)、不同诱导温度(20、25、30、37、42℃)、不同浓度诱导剂异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(0. 1、0. 2、0. 3、0. 4、0. 5 mmol·L-1)、不同浓度乙酸(0. 0、0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 mmol·L-1)进行培养,蛋白电泳考马斯亮蓝染色后,采用Image J软件分析HLIF蛋白的相对表达量,观察不同干预条件对HLIF表达的影响。结果不同诱导时间下HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=22. 088,P <0. 05),诱导16 h时的HLIF蛋白相对表达量显著高于诱导4、8、12、20、24 h(P <0. 05)。不同浓度(以吸光度值表示)大肠杆菌诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=17. 153,P <0. 05);吸光度值为0. 8时HLIF蛋白相对表达量显著高于吸光度值为0. 5、0. 6时(P <0. 05),吸光度值为1. 0时与吸光度值为0. 8时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。不同温度诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=18. 053,P <0. 05),25℃时HLIF蛋白相对表达量显著高于20、30、37、42℃时(P <0. 05)。不同浓度诱导剂诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(F=1. 181,P> 0. 05)。不同浓度乙酸诱导时HLIF蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(F=27. 181,P <0. 05),乙酸浓度为0. 00 mmol·L-1时HLIF蛋白相对表达量显著高于乙酸浓度为0. 1、0. 2、0. 3、0. 4 mmol·L-1时(P <0. 05)。结论成功在大肠杆菌表达了HLIF,并探索出了适合最佳表达的诱导时间、大肠杆菌浓度、诱导温度、诱导剂浓度、乙酸浓度等条件。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 原核表达 优化

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LIF真核表达载体的构建及其在MSCs中的稳定表达 被引量：1

4

作者 杨春辉 杜珍武 +1 位作者 杨光 尹维田 《中国实验诊断学》 北大核心 2009年第1期15-18,共4页

目的在人骨髓间充质干细胞内大量稳定的表达人白血病抑制因子(human Leukemia Inhibitory Factor,hLIF)。方法应用RT-PCR方法从人蜕膜组织中扩增出白血病抑制因子,并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上。利用脂质体进行基因骨髓间充质干... 目的在人骨髓间充质干细胞内大量稳定的表达人白血病抑制因子(human Leukemia Inhibitory Factor,hLIF)。方法应用RT-PCR方法从人蜕膜组织中扩增出白血病抑制因子,并将其构建于pcDNA3.1真核表达载体上。利用脂质体进行基因骨髓间充质干细胞的转染。利用G418进行基因的稳定表达筛选。通过RT-PCR和Western blot方法进行基因表达的检测。结果成功扩增出人白血病抑制因子基因,成功构建hLIF-pcDNA3.1真核表达载体。转染LIF-pcDNA3.1的骨髓间充质干细胞经G418筛选,存活十代以上。经RT-PCR及Western blot方法检测发现转染LIF-pcD-NA3.1的骨髓间充质干细胞表达白血病抑制因子明显高于未转染的骨髓间充质干细胞。结论成功构建LIF-pcD-NA3.1的真核表达载体并使其在骨髓间充质干细胞得到稳定表达。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 骨髓间充质干细胞 基因表达

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LIF基因在COS-7细胞中的表达及活性研究 被引量：1

5

作者 郁心 苗丽 +1 位作者 盛伟华 缪竞诚 《中国血液流变学杂志》 CAS 2006年第4期506-508,529,共4页

目的人白血病抑制因子(LIF)基囚在COS-7细胞中进行瞬时表达,检测表达产物对HL-60白血病细胞的作用。方法用脂质体转染法将pcDNA3．0-LIF真核表达质粒导入COS-7细胞,通过形态学观察、MTT、FCM法研究COS-7细胞表达产物对HL-60细胞的影响... 目的人白血病抑制因子(LIF)基囚在COS-7细胞中进行瞬时表达,检测表达产物对HL-60白血病细胞的作用。方法用脂质体转染法将pcDNA3．0-LIF真核表达质粒导入COS-7细胞,通过形态学观察、MTT、FCM法研究COS-7细胞表达产物对HL-60细胞的影响。结果人LIF基因可在COS-7细胞中进行有效表达,表达产物对HL-60白血病细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用。结论人LIF基囚在COS-7细胞中能有效表达,表达产物具有较强的抑制白血病细胞生长,诱导细胞凋亡的作用。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 COS-7细胞 真核表达 HL-60细胞

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人白血病抑制因子(LIF)基因的人工合成 被引量：1

6

作者 杨林 王全忠 +2 位作者 吴无畏 龙綮新 王珣章 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 1999年第S1期86-89,共4页

根据人白血病抑制因子基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列， 通过合理的引物设计、链延伸反应、 Ｐ Ｃ Ｒ 反应以及分子克隆等步骤， 成功地合成出编码成熟 Ｌ Ｉ Ｆ 蛋白的基因片段， 并将其克隆至ｐ Ｕ Ｃ１８ 载体质粒上． 序列分析和酶切鉴定显... 根据人白血病抑制因子基因的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 序列， 通过合理的引物设计、链延伸反应、 Ｐ Ｃ Ｒ 反应以及分子克隆等步骤， 成功地合成出编码成熟 Ｌ Ｉ Ｆ 蛋白的基因片段， 并将其克隆至ｐ Ｕ Ｃ１８ 载体质粒上． 序列分析和酶切鉴定显示 Ｌ Ｉ Ｆ 基因得到了正确合成和克隆， 同时还就基因人工合成的优越性和特殊序列的甲基化问题进行了探讨． 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 基因 人工合成

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重组人白血病抑制因子在大肠杆菌中的表达及纯化 被引量：1

7

作者 王晓雯 郗雪艳 +5 位作者 李小璐 关欣 郭阳 宋伟 杜伯雨 卫荣华 《湖北医药学院学报》 CAS 2017年第3期214-220,共7页

目的:利用大肠杆菌表达并制备重组人源白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)。方法:构建p ET-30a-rh LIF表达载体并转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)之中,IPTG诱导使无标签的目的蛋白呈可溶性表达,继而利用三步柱层析纯化目的蛋白... 目的:利用大肠杆菌表达并制备重组人源白血病抑制因子(Leukemia inhibitory factor,LIF)。方法:构建p ET-30a-rh LIF表达载体并转入大肠杆菌菌株BL21(DE3)之中,IPTG诱导使无标签的目的蛋白呈可溶性表达,继而利用三步柱层析纯化目的蛋白。最后对所获目的蛋白活性进行测定,并对其N端和C端的完整性分别应用Edman测序法以及质谱法进行鉴定。结果:通过三步柱层析以及中间的内毒素去除步骤可使无标签rh LIF获得纯化,检测结果提示所获目的蛋白内毒素水平<1 EU/μg,其活性同市售商品化LIF产品一致,Edman测序结果提示少部分目的蛋白N端存在甲硫氨酸修饰,质谱检测结果表明所获目的蛋白C端完整性较好。结论:建立了一种新的重组人源白血病抑制因子表达和纯化的方法,本方法不需利用标签蛋白,并可有效降低所获蛋白中内毒素水平,所获rh LIF蛋白可用于干细胞培养以及相关生物学研究。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 表达 纯化 大肠杆菌

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人白血病抑制因子在果蝇细胞S2中的表达

8

作者 汪轶 王一理 李旭 《中国妇幼健康研究》 2007年第4期288-290,共3页

目的克隆人白血病抑制因子基因并将其在果蝇细胞中表达。方法以人6w胚胎绒毛的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增人白血病抑制因子cDNA,测序后将其克隆到真核表达载体C,经电穿孔法将构建的重组人白血病抑制因子质粒转染果蝇细胞S2,48h后... 目的克隆人白血病抑制因子基因并将其在果蝇细胞中表达。方法以人6w胚胎绒毛的总RNA为模板,利用RT-PCR方法扩增人白血病抑制因子cDNA,测序后将其克隆到真核表达载体C,经电穿孔法将构建的重组人白血病抑制因子质粒转染果蝇细胞S2,48h后用免疫斑点法检测人白血病抑制因子的瞬时表达情况。结果从人早孕胚胎组织获得了长度为543bp的白血病抑制因子cDNA片段,新构建的人白血病抑制因子真核表达载体中,有人白血病抑制因子cDNA的正确插入,转染人白血病抑制因子cDNA的S2细胞培养上清中含有人白血病抑制因子蛋白。结论成功地构建了人白血病抑制因子真核表达载体,人白血病抑制因子可在果蝇细胞中呈分泌性表达。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 克隆 载体 果蝇细胞

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转白血病抑制因子基因人胚肺成纤维细胞对脐血CD34^+细胞体外扩增的影响

9

作者 夏卫 郁心 +3 位作者 姜健 田丽娜 陈瑶 缪竞诚 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 2012年第1期56-60,共5页

背景:单份脐血的造血细胞数量有限,难以满足成人的需要,如何有效地扩增脐血造血干/祖细胞是目前研究的热点。目的:构建人白血病抑制因子基因修饰的人胚肺成纤维细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响。方法:建立... 背景:单份脐血的造血细胞数量有限,难以满足成人的需要,如何有效地扩增脐血造血干/祖细胞是目前研究的热点。目的:构建人白血病抑制因子基因修饰的人胚肺成纤维细胞,观察转基因细胞对脐血CD34+造血干/祖细胞体外扩增的影响。方法:建立转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞,用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐血CD34+造血干/祖细胞,流式细胞术检测纯度;将CD34+造血干/祖细胞与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果;扩增后的造血干/祖细胞用跨膜迁移实验检测自发迁移率和基质细胞衍生因子1诱导迁移试验以鉴定体外扩增的造血干/祖细胞的归巢能力。结果与结论:成功建立转基因饲养层细胞,RT-PCR法和ELISA法证实有目的基因表达,与人白血病抑制因子转基因饲养层细胞共培养7d后CD34+造血干/祖细胞可大量扩增,同时表面黏附分子的表达量仍较高。体外迁移实验显示与转基因饲养层细胞共培养的造血细胞的诱导迁移率明显高于对照组,可以较好地保持其归巢能力。因此转人白血病抑制因子基因的饲养层细胞可有效扩增脐血CD34+造血干/祖细胞,延缓其分化,并且体外扩增后仍保持较高的归巢能力。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 饲养层 CD34+细胞 体外扩增 造血干/祖细胞

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转hLIF基因逆转录病毒载体饲养层细胞的建立及其对脐血CD34^+造血干/祖细胞的扩增作用

10

作者 井莹莹 杨吉成 +6 位作者 盛伟华 胡志清 郁心 包婉蓉 张日 朱南康 缪竞诚 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2009年第3期415-418,F0003,共5页

目的建立转人白血病抑制因子(hLIF)基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并观察其对CD34+造血干/祖细胞(HSPC)的扩增作用。方法建立转hLIF基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐带... 目的建立转人白血病抑制因子(hLIF)基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并观察其对CD34+造血干/祖细胞(HSPC)的扩增作用。方法建立转hLIF基因逆转录病毒载体的饲养层细胞,并用RT-PCR法和ELISA法鉴定目的基因的表达;采用免疫磁珠法分离脐带血CD34+HSPC,流式细胞术检测其纯度;将CD34+HSPC与饲养层细胞共培养,流式细胞术检测各组增殖效果。结果建立的转基因饲养层细胞均有绿色荧光,RT-PCR法和ELISA法证实均有目的基因表达,免疫磁珠法分离的CD34+HSPC纯度可达(95.6±2.58)%,与饲养层细胞共培养后CD34+HSPC可扩增8.74倍,表面黏附分子CXCR4和CD54表达量仍较高。结论建立的转hLIF基因饲养层细胞对CD34+HSPC有一定的扩增作用,且延缓其分化。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 逆转录病毒 脐带血 造血干/祖细胞

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人白血病抑制因子基因在巴斯德毕赤酵母中的表达

11

作者 王全忠 杨林 +2 位作者 欧阳菁 龙綮新 王珣章 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期582-586,共5页

将 575bp的人白血病抑制因子基因克隆到表达载体pPICZαA上 ,构建成重组质粒pPICZαA hLIF。pPICZαA hLIF经SacI酶切使之线性化后转化到巴斯德毕赤酵母细胞X 33中。转化子经Mut表型筛选和PCR分析鉴定后 ,利用甘油增菌和甲醇诱导 ,实现... 将 575bp的人白血病抑制因子基因克隆到表达载体pPICZαA上 ,构建成重组质粒pPICZαA hLIF。pPICZαA hLIF经SacI酶切使之线性化后转化到巴斯德毕赤酵母细胞X 33中。转化子经Mut表型筛选和PCR分析鉴定后 ,利用甘油增菌和甲醇诱导 ,实现了hLIF基因在毕赤酵母系统中的表达。SDS PAGE检测和Westernblot分析结果表明表达产物的分子量约为58 5kD ,与天然hLIF大小相近 ,并且具有免疫原性。凝胶薄层扫描分析显示 ,重组hLIF约占上清总蛋白的 32 8%。生物活性测定结果表明 。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 巴斯德毕赤酵母 基因表达 生物活性测定

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逆转录病毒载体介导的hLIF基因真核稳定表达体系的建立

12

作者 苗莉 郁心 +7 位作者 谢宇锋 盛伟华 杨吉成 刘铁连 单云波 井莹莹 胡志清 缪竞诚 《苏州大学学报（医学版）》 CAS 北大核心 2008年第3期353-356,F0002,共5页

目的构建逆转录病毒载体介导的人白血病抑制因子(human leukemia inhibitory factor,hLIF)基因真核稳定表达细胞株。方法采用DNA重组技术,构建并鉴定重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-hLIF;以脂质体转染法,将重组逆转录病毒载体与辅助质粒... 目的构建逆转录病毒载体介导的人白血病抑制因子(human leukemia inhibitory factor,hLIF)基因真核稳定表达细胞株。方法采用DNA重组技术,构建并鉴定重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-hLIF;以脂质体转染法,将重组逆转录病毒载体与辅助质粒HIT456、HIT60共转染入包装细胞系293T包装逆转录病毒,感染人胚肾成纤维细胞系,经zeocin筛选获得真核稳定表达细胞株;采用RT-PCR法和ELISA法鉴定hLIF基因的转录和翻译,并检测表达上清中hLIF因子对人白血病细胞HL-60的生物学活性。结果PCR产物电泳后于609 bp处见特异性条带。双酶切出现两条带,其中位于609 bp处可见相应条带。核酸测序结果与GenBank中所报道的hLIF基因的CDS序列完全一致。RT-PCR结果显示表达细胞中存在hLIF基因转录,ELISA结果测定表达上清中hLIF的浓度为110.134 pg/ml。结论携带hLIF基因的重组逆转录病毒载体pEGZ/MCS-HA-hLIF构建成功,并且获得了稳定表达hLIF基因的人胚肾成纤维细胞株,这为此基因的临床应用和实验研究打下了基础。 展开更多

关键词 人白血病抑制因子 逆转录病毒载体 基因重组 真核表达

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重组人白血病抑制因子对HL-60细胞的作用及机制研究 被引量：5

13

作者 杜冰 朱道银 唐恩洁 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第3期270-272,共3页

目的 :观察rh -LIF对HL - 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法 :不同剂量的rh -LIF作用HL -6 0细胞 3- 6天 ,观察细胞生长 ,流式细胞术分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3,P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA... 目的 :观察rh -LIF对HL - 6 0细胞生长与分化的影响及其可能的作用机制。方法 :不同剂量的rh -LIF作用HL -6 0细胞 3- 6天 ,观察细胞生长 ,流式细胞术分析细胞周期 ,用免疫组化法检测P5 3,P2 1蛋白表达的变化 ,原位杂交法检测P5 3mRNA表达水平的改变。结果 :rh -LIF可诱导HL - 6 0细胞向单核 /巨噬细胞分化 ,抑制HL - 6 0细胞的增殖 ,使细胞停滞于G1期 :P5 3,P2 1蛋白和P5 3mRNA表达明显增强。结论 :rh -LIF对HL - 6 0细胞具增殖抑制和诱导分化作用 ,其作用机制可能与G1期阻滞及P5 3,P2 1表达增高有关。 展开更多

关键词 重组人白血病抑制因子 诱导分化 生长抑制

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输卵管积水处理前后窗口期子宫内膜人白血病抑制因子(LIF)和白介素-2(IL-2)的表达 被引量：5

14

作者 卢珊 乔杰 +1 位作者 刘朝晖 李蓉 《中国妇产科临床杂志》 2009年第6期423-425,共3页

目的探讨输卵管积水预处理对改善窗口期子宫内膜的意义。方法选择输卵管积水患者17例为A组,输卵管积水处理(包括输卵管切除术及输卵管根部切断术)后的患者9例为B组,应用免疫组化法测定两组患者窗口期子宫内膜人白血病抑制因子(leukemia ... 目的探讨输卵管积水预处理对改善窗口期子宫内膜的意义。方法选择输卵管积水患者17例为A组,输卵管积水处理(包括输卵管切除术及输卵管根部切断术)后的患者9例为B组,应用免疫组化法测定两组患者窗口期子宫内膜人白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)和白介素-2(IL-2)的表达情况。结果LIF在A组患者的窗口期子宫内膜的表达明显低于B组(P<0.05),而IL-2在A组患者的窗口期子宫内膜的表达明显高于B组(P<0.05)。结论输卵管积水的患者窗口期子宫内膜LIF的低表达及IL-2的高表达可能是影响输卵管积水患者IVF-ET结局的因素之一。 展开更多

关键词 输卵管积水 人白血病抑制因子(LIF) 白介素-2(IL-2)

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人白血病仰制因子基因在酵母中的融合表达

15

作者 王全忠 杨林 +2 位作者 欧阳菁 龙綮新 王珣章 《中山大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期96-99,共4页

用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母... 用ＰＣＲ突变的方法使人白血病抑制因子基因的终止密码子缺失，并与质粒ｐＰＩＣＺαＡ上的ｍｙｃ表位及６个组氨酸处于同一读码框，构建融合表达载体ｐＰＩＣＺαＡ－ｈＬＩＦＭ．通过氯化理化学转化法使表达载体整合到毕赤巴斯德酵母Ｘ－３３的基因组ＤＮＡ中。转化子经甘油增菌和甲醇诱导，实现了ｈＬＩＦ基因在毕赤酵母表达载体系统中的表达．ＳＤＳ－ＰＡＧＥ检测和 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析结果表明在相对分子质量为６１ ０００处有一条人白血病抑制因子特异蛋白带．凝胶薄层扫描分析结果显示表达的目的蛋白占培养液上清总蛋白的 ３３．３％．且该表达产物具有抑制小鼠畸胎瘤细胞Ｆ９克隆形成的活性． 展开更多

关键词 人白血病抑制因子基因 毕赤酵母 融合表达 生物活性测定

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重组人白血病抑制因子体外诱导人巨核细胞白血病DAMI细胞株凋亡与P73蛋白表达 被引量：1

16

作者 毛彦娜 徐学聚 +3 位作者 白松婷 王飞 卢洁 张艳华 《实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第15期1156-1157,共2页

目的探讨重组人白血病抑制因子(rh-LIF)诱导人巨核细胞白血病DAMI细胞株凋亡和P73蛋白表达,探讨其作用机制。方法应用锥虫蓝拒染法、CCK-8法观察不同质量浓度(1～40μg/L)rh-LIF作用6、12、24、48h后对DAMI细胞株增殖及活力影响,用流式... 目的探讨重组人白血病抑制因子(rh-LIF)诱导人巨核细胞白血病DAMI细胞株凋亡和P73蛋白表达,探讨其作用机制。方法应用锥虫蓝拒染法、CCK-8法观察不同质量浓度(1～40μg/L)rh-LIF作用6、12、24、48h后对DAMI细胞株增殖及活力影响,用流式细胞仪测定早期凋亡指标Annexin V,免疫组织化学法检测用药前后P73蛋白表达变化。结果低质量浓度(1、2μg/L)rh-LIF对DAMI细胞增殖无明显抑制,诱导凋亡作用不明显,P73蛋白阳性表达低(P>0.05);当质量浓度>5μg/L时其作用随培养时间延长及药物质量浓度增加而增强(P<0.05)。结论低水平rh-LIF对DAMI细胞增殖无明显抑制,高水平rh-LIF抑制DAMI细胞增殖并诱导其凋亡,用药后P73蛋白阳性表达有明显增高。 展开更多

关键词 重组人白血病抑制因子 凋亡 DAMI细胞株 P73蛋白

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人白血病抑制因子(hLIF)单克隆抗体的制备与鉴定

17

作者 刘建军 卢敏南 +1 位作者 胡月新 吕琦 《云南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第S1期311-315,共5页

为了获得抗人白血病抑制因子(hLIF)单克隆抗体,以重组hLIF蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的小细胞融合、无限稀释法制备了10株杂交瘤的腹水hLIF抗体,并对腹水进行了纯化.腹水粗品抗体经rProteinA一步亲和层析法纯化和鉴定后,抗体... 为了获得抗人白血病抑制因子(hLIF)单克隆抗体,以重组hLIF蛋白为抗原,免疫Balb/c小鼠,采用传统的小细胞融合、无限稀释法制备了10株杂交瘤的腹水hLIF抗体,并对腹水进行了纯化.腹水粗品抗体经rProteinA一步亲和层析法纯化和鉴定后,抗体分子量都符合抗体的特性,抗体的纯度都达到了96.6%以上,抗体亲和常数在1.89×10^(-9)~1.51×10^(12)mol/L,其中1B8a、5C1b、5G4a细胞株制备的抗体属于高亲和力抗体,可以对其的应用进行进一步的研究和探讨. 展开更多

关键词 人白血病抑制因子(hLIF) 亲和常数 杂交瘤 单克隆抗体

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