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人真核翻译起始因子3C基因的克隆及表达
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作者 赵谦 孙潇 +2 位作者 罗真真 董怡萍 韩苏夏 《西部医学》 2019年第9期1328-1333,共6页
目的构建人真核翻译起始因子3C(Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3 C)编码区全长的真核表达载体,转染FaDu人下咽鳞癌细胞系,为探讨EIF3C的生物学功能奠定基础。方法从人下咽鳞癌细胞系中提取总RNA,反转录成cDN... 目的构建人真核翻译起始因子3C(Eukaryotic Translation Initiation Factor 3 Subunit C,EIF3 C)编码区全长的真核表达载体,转染FaDu人下咽鳞癌细胞系,为探讨EIF3C的生物学功能奠定基础。方法从人下咽鳞癌细胞系中提取总RNA,反转录成cDNA后用特异性引物PCR扩增EIF3C基因编码区全长(NM_001037808.2),双酶切后将EIF3C基因编码区全长克隆到载体pCMV-Blank上,构建真核表达载体pCMV-EIF3C。转染FaDu细胞系,real-timePCR和Westernblot检测EIF3C表达水平。将未加质粒转染FaDu细胞作为未加质粒转染组,加质粒pCMV-Blank作为pCMV-Blank转染组,以及加质粒pCMV-EIF3C作为pCMV-EIF3C转染组。分别将pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA和蛋白表达水平与未加质粒转染组、pCMV-Blank转染组进行比较,以及比较未加质粒转染组和pCMV-Blank转染组。通过生物信息学网站和软件分析人EIF3C氨基酸序列的理化性质、磷酸化位点、二级结构和三维结构。结果测序结果表明构建的真核表达载体pCMV-EIF3C中人EIF3C序列正确。转染实验表明载体pCMV-EIF3C转染组EIF3C的mRNA水平相比载体pCMV-Blank转染组升高7.08倍,未加质粒转染组升高8.02倍(P<0.001),且载体pCMV-EIF3C转染组蛋白表达水平相比于载体pCMV-Blank转染组和未加质粒转染组也显著升高(P<0.05)。EIF3C蛋白质由913个氨基酸组成,预测含有27个磷酸化位点,其二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主。结论成功构建真核表达载体pCMV-EIF3C,并使EIF3C在下咽鳞癌细胞系中过表达。 展开更多
关键词 真核翻译起始因子3C 下咽癌细胞 基因克隆 真核表达
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康莱特注射液对人下咽鳞状癌细胞裸鼠移植瘤放疗敏感性影响及其机制研究
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作者 王钇力 黄莉 +3 位作者 许明君 衷敬华 廖家华 袁军 《中国现代医生》 2019年第34期35-38,42,共5页
目的研究康莱特注射液对人下咽鳞状癌细胞(FADU)裸鼠移植瘤的放射增敏作用,并探讨其对肿瘤微血管生成的影响及机制。方法采用皮下注射法对裸鼠建立鳞状癌细胞荷瘤模型,并根据实验目的的不同随机分为对照组、单纯放射治疗组、单纯药物(... 目的研究康莱特注射液对人下咽鳞状癌细胞(FADU)裸鼠移植瘤的放射增敏作用,并探讨其对肿瘤微血管生成的影响及机制。方法采用皮下注射法对裸鼠建立鳞状癌细胞荷瘤模型,并根据实验目的的不同随机分为对照组、单纯放射治疗组、单纯药物(康莱特注射液)治疗组及联合(放射+康莱特注射液药物治疗)组。通过测量各组裸鼠肿瘤的体积并绘制生长曲线,计算抑瘤率;采用免疫荧光检测移植瘤中CD31的表达情况并进行计数微血管密度(NVD);提取肿瘤组织总蛋白,实时定量PCR和Western blot分别检测移植瘤组织中Periostin和VEGF-C的mRNA和蛋白表达。结果与单独药物治疗及单纯放疗相比,联合治疗组肿瘤体积显著减少(P<0.05),此时其联合指数(CI=0.83)。免疫荧光结果显示联合治疗组也能显著减少微血管密度,与对照组、单纯药物组和放疗组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。此外,虽然放疗和康莱特注射液单独处理也能降低移植瘤组织中Periostin和VEGF-C的mRNA和蛋白表达,但两者联合后其mRNA和蛋白表达水平进一步减少。结论康莱特注射液可增强FADU细胞裸鼠移植瘤对放疗的敏感性,其机制可能与影响Periostin和VEGF-C的表达有关。 展开更多
关键词 喉咽肿瘤 康莱特注射液 放射增敏 下咽癌细胞
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