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人β_2m转基因小鼠的制备、筛选及鉴定 被引量：2
1
作者 陈占昆 吕厚山 +5 位作者 艾京 蒋东芳 丁海明 王东 王申五 冯传汉 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期366-369,共4页
目的 :制备人β2 m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4的表达。方法 :应用显微注射将人 β2 m基因注入C5 7BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 ,出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行... 目的 :制备人β2 m转基因小鼠 ,研究HLA B2 70 4的表达。方法 :应用显微注射将人 β2 m基因注入C5 7BL/6×昆明鼠和昆明鼠×昆明鼠F1代受精卵 ,出生动物及其后代经PCR筛选 ,采用斑点杂交和Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定和测定整合拷贝数 ,利用RT PCR检测阳性鼠中人 β2 m转基因的表达。结果 :6只原代仔鼠及 7只它们的下一代 (F1)带有人 β2 m基因。由微注射基因后移卵出生的 86只小鼠中 ,C5 7BL/6×昆明鼠杂交仔鼠 35只 ,其中 4只阳性 (11.4% ) ,昆明鼠×昆明鼠杂交仔鼠 5 1只 ,其中 2只阳性 (3.9% ) ,含有人 β2 m基因的原代鼠×昆明鼠杂交仔鼠 2 0只 ,其中 7只阳性。整合的转基因均为单拷贝。Southern杂交证实上述阳性鼠确有转基因整合。阳性鼠的皮肤、结肠、睾丸和脾脏组织中均有人 β2 m转基因mRNA的表达。结论 :在转基因动物制备中 ,C5 7BL/6×昆明鼠F1代明显优于昆明鼠×昆明鼠F1代。与人HLA B2 70 4基因相比 ,人 β2 m基因不易整合 ,其整合率与整合拷贝数均较低。得到的人 β2 m转基因小鼠能够将人 β2 m基因传给下一代并可与人HLA B2 70 4转基因鼠交配。 展开更多
关键词 转基因小鼠 人β2m基因 基因组 制备 筛选 鉴定
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腺病毒载体介导的人β_2-肾上腺素能受体基因导入心肌细胞的研究
2
作者 高文谦 李小鹰 +1 位作者 李梁 裴雪涛 《中华老年心脑血管病杂志》 CAS 1999年第1期42-45,共4页
目的　观察重组缺陷型腺病毒即腺病毒载体介导的人 β2 肾上腺素能受体 (β2 AR)基因导入大鼠心肌细胞后 β2 AR的表达及其功能。方法　构建含人 β2 AR基因的腺病毒载体 (Adβ2 AR) ,转染大鼠的心肌细胞 ,检测心肌细胞对人 β2 A... 目的　观察重组缺陷型腺病毒即腺病毒载体介导的人 β2 肾上腺素能受体 (β2 AR)基因导入大鼠心肌细胞后 β2 AR的表达及其功能。方法　构建含人 β2 AR基因的腺病毒载体 (Adβ2 AR) ,转染大鼠的心肌细胞 ,检测心肌细胞对人 β2 AR的表达及环磷酸腺苷 (cAMP)的含量。结果　Northern印迹杂交显示Adβ2 AR转染的心肌细胞表达人 β2 -ARmRNA ;Western免疫印迹杂交分析表明转染的心肌细胞有人 β2 AR ;放射性配基检测显示转基因心肌细胞的 β AR密度 [(2 34± 6 .4)fmol/mg蛋白 ]是未转染的心肌细胞密度 [(76± 2 .8)fmol/mg蛋白 ]的 3倍 (P <0 .0 1 ) ;经 1 0 μmol/L异丙肾上腺素作用 ,转基因的心肌细胞的cAMP量 [(1 2 4± 6 .8)pmol/ 1 0 6 细胞 ]明显高于对照组 [(58.4± 4 .6)pmol/ 1 0 6 细胞 ] (P <0 .0 1 )。结论　人 β2 展开更多
关键词 腺病毒载体 人β2-AR基因 心肌细胞
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人β2微球蛋白基因的克隆与鉴定
3
作者 周最明 郭亚兵 骆抗先 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期321-321,共1页
关键词 基因克隆 基因鉴定 逆转录聚合酶链式反应 人β2微球蛋白基因
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