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慢病毒介导β-珠蛋白基因添加在β-地中海贫血基因治疗中的应用
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作者 曾雅畅 李慕军 +2 位作者 陈萍 黄千贻 蔡君英 《中国妇幼保健》 CAS 2015年第3期427-431,共5页
目的:构建全长人β-珠蛋白基因慢病毒载体,稳定转染K562细胞使得β-珠蛋白高效表达,为β-珠蛋白基因添加治疗奠定基础。方法:采用PCR扩增人正常β-珠蛋白基因,加上Sph I和Not I两个酶切位点进行T载体克隆,获得重组质粒p UC57-β-globin... 目的:构建全长人β-珠蛋白基因慢病毒载体,稳定转染K562细胞使得β-珠蛋白高效表达,为β-珠蛋白基因添加治疗奠定基础。方法:采用PCR扩增人正常β-珠蛋白基因,加上Sph I和Not I两个酶切位点进行T载体克隆,获得重组质粒p UC57-β-globin。用限制性内切酶连接目的基因片段和慢病毒载体,筛选获得慢病毒表达载体LV-β-globin,测序。将慢病毒载体转染293T细胞,包装病毒。用LV-β-globin感染K562细胞。采用流式细胞仪检测荧光效率,运用实时PCR及Western Blotting检测K562细胞中β-珠蛋白mRNA及蛋白表达情况。结果:通过PCR获得长度为2 128 bp的目的基因。连接p UC57载体和慢病毒表达载体,慢病毒表达载体LV-β-globin构建成功,序列正确。LV-β-globin转染K562细胞72 h后,显示大量绿色荧光表达,荧光效率为94.8%。β-珠蛋白mRNA 2-ΔΔCt值为4.080±0.078,高于对照组;β-珠蛋白灰度值为1.063±0.082,高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:成功构建并包装含人β-珠蛋白基因的慢病毒载体并高效稳定表达。 展开更多
关键词 β-地中海贫血 β-珠蛋白基因 慢病毒
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Proteins binding to the 5'-flanking regulatory elements of the human β-globin gene
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作者 CHENZHIGANG YADICHEN 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1993年第2期195-202,共8页
The binding of nuclear proteins prepared from mouse erythroid tissue in different developmental stages to the 5'-flanking regulatory elements of human β-globin gene, two negative control regions(NCR1,-610 to -490... The binding of nuclear proteins prepared from mouse erythroid tissue in different developmental stages to the 5'-flanking regulatory elements of human β-globin gene, two negative control regions(NCR1,-610 to -490 bp;NCR2, -338 to-233bp), was identified.Two stage specific protein factors corresponding to embryonic and fetal stages were found to be capable of binding to NCR2.These data provided evidence that the cis acting elements of the 5'-flanking region might be involved in the developmental control of β-globin gene and NCR2 might be responsible in part for the silence of β-globin gene in the embryonic and fetal stages. 展开更多
关键词 human β-globin gene negative control region stage specific factor.
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逆转录病毒介导的β-珠蛋白基因在小鼠骨髓单核细胞的表达
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作者 陈延文 徐炎 章静波 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期295-298,共4页
从小鼠C57BL/6J股骨分离得到骨髓单核细胞(bonemarrowmononuclearcells,BMMC),并在体外建立了BMMC细胞培养体系。将携带有人β-珠蛋白基因及其增强子的逆转录病毒载体(N2AβE36... 从小鼠C57BL/6J股骨分离得到骨髓单核细胞(bonemarrowmononuclearcells,BMMC),并在体外建立了BMMC细胞培养体系。将携带有人β-珠蛋白基因及其增强子的逆转录病毒载体(N2AβE36)经DNA磷酸钙共沉淀转染单向性包装细胞系(ψ-2)收集抗G418阳性ψ-2细胞克隆的病毒上清,感染体外培养的BMMC,同时加入白介素-3(Interleukin-3,IL-3)、白介素-6(Interleukin-6,IL-6)、红细胞生成素(erythropoietin,Epo)等造血调节因子以促进造血细胞的增殖及提高基因转移的效率。经Southernblot和Northern-blot分析证实在小鼠BMMC中具有β-珠蛋白基因的整合与表达。 展开更多
关键词 小鼠骨髓单核细胞 基因转移 逆转录病毒载体 β-珠蛋白基因
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Identification of the development stage-specific factors in mouse fetal liver binding to the human β-globin gene promoter
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作者 CHENYADI YULONGHU 《Cell Research》 SCIE CAS CSCD 1994年第1期9-15,共7页
In order to elucidate the molecular mechanisms of globin gene expression during embryonic development, the nuclear extracts from mouse hematopoietic tissue at different stages of development have been prepared. By usi... In order to elucidate the molecular mechanisms of globin gene expression during embryonic development, the nuclear extracts from mouse hematopoietic tissue at different stages of development have been prepared. By using DNase I footprinting and gel mobility shift assays, the binding of protein factors in these extracts to the human βglobin promoter was analyzed. The differences in the binding patterns of protein factors during development were observed. An erythroid-specific and stage-specific nuclear protein in the nuclear extract from d 18 mouse fetal liver was identified, which can bind to the sequence (from -66bp to -90bp) of human β-globin promoter. We therefore speculate that the function of this cis-acting element may be similar to stage selector element (SSE) in chieken βA- promoter. 展开更多
关键词 β-globin gene promoter trans-acting factor
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应用荧光原位杂交技术检测人β~E珠蛋白基因在转基因小鼠染色体上的整合状态 被引量:2
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作者 夏薇 刘德培 +5 位作者 董文吉 李斌 郭志晨 王晶 李铁昌 梁植权 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期397-400,共4页
为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中 ,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法 ,对小鼠腹腔注射秋水仙素后 ,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体 ,将传统的FISH方法加以改进 ,检测外源基因在转基因小鼠... 为将荧光原位杂交技术应用于基因定位研究中 ,探讨一种能有效地检测转基因动物染色体上外源基因整合状态的实验方法 ,对小鼠腹腔注射秋水仙素后 ,取转基因小鼠骨髓制备中期染色体 ,将传统的FISH方法加以改进 ,检测外源基因在转基因小鼠染色体上的整合状态。检测结果表明 ,外源人 βE 珠蛋白基因已稳定地整合于小鼠染色体上。FISH能直观地反映外源基因在转基因动物染色体上的整合状态 ,该方法可对转基因动物及基因转移研究中的外源基因整合后进行染色体定位检测。 展开更多
关键词 荧光原位杂交技术 β^E珠蛋白基因 基因小鼠 整合位点 染色体
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