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亲和超滤-液质联用技术筛选补骨脂治疗子宫内膜癌的有效成分
1
作者 蒋本贵 陈思越 +2 位作者 钱文秀 阎星旭 李遇伯 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2024年第14期4663-4669,共7页
目的采用亲和超滤-液质联用技术筛选补骨脂Psoralea Fructus中治疗子宫内膜癌的潜在活性成分。方法以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor erbB1,EGFR)为靶蛋白,将补骨脂水提液和EGFR蛋白液共同孵育,利用基于亲和超滤原... 目的采用亲和超滤-液质联用技术筛选补骨脂Psoralea Fructus中治疗子宫内膜癌的潜在活性成分。方法以表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor erbB1,EGFR)为靶蛋白,将补骨脂水提液和EGFR蛋白液共同孵育,利用基于亲和超滤原理的超速离心法和解离剂对活性配体进行分离和筛选,借助超高效液相色谱-四级杆飞行质谱技术对与EGFR蛋白亲和的补骨脂化学成分进行鉴定,并通过计算结合变化率比较活性成分与蛋白之间的结合能力。结果共筛选得到4种与EGFR亲和的补骨脂活性成分,通过对结合变化率进行比较,发现psorachalcone A与EGFR蛋白结合变化率最大。结论该研究为补骨脂防治子宫内膜癌的药效物质基础和作用机制研究提供了理论依据。 展开更多
关键词 补骨脂 亲和超滤-液质联用 子宫内膜癌 EGFR蛋白 活性成分 补骨脂素 psorachalcone A 补骨脂呋喃查耳酮 delta(1 3)-补骨脂酚
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重组人Tim-3蛋白的制备及基于亲和超滤-液质联用技术的天然配体筛选 被引量：2
2
作者 杨忠杰 李森森 +3 位作者 曹娟 应真真 张永威 王瑞 《药物评价研究》 CAS 2023年第3期545-551,共7页
目的构建人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)-His表达载体,表达纯化Tim-3重组蛋白,建立亲和超滤-液质联用技术筛选Tim-3蛋白天然配体。方法利用DNA重组技术构建人Tim-3-His表达质粒,转染HEK293细胞表达Tim-3重组蛋白,通过Ni柱亲和色谱柱... 目的构建人T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3(Tim-3)-His表达载体,表达纯化Tim-3重组蛋白,建立亲和超滤-液质联用技术筛选Tim-3蛋白天然配体。方法利用DNA重组技术构建人Tim-3-His表达质粒,转染HEK293细胞表达Tim-3重组蛋白,通过Ni柱亲和色谱柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析Tim-3重组蛋白纯度。10μL受试物(黄芪甲苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、白术内酯Ⅰ、芒柄花黄素、毛蕊异黄酮)溶液、180μL磷酸盐缓冲溶液(pH 7.4,50 mmol·L−1)与10μL Tim-3(0.84 mg·mL^(−1))混合,在37°C黑暗孵育1 h后,转移至1×10^(4)超滤离心管中以12000 r·min^(−1)离心10 min,将沉淀加入200μL甲醇-水(90∶10)中室温解离10 min,12000 r·min^(−1)离心10 min,收集滤液,进行UPLC-MS/MS分析。通过比较受试物组和Tim-3蛋白变性组中超滤液中待测物的峰面积,计算各待测物特异结合率。结果经双酶切及测序鉴定证明,人Tim-3-His重组表达质粒构建正确;纯化的人Tim-3重组蛋白质量分数达90%以上;建立的亲和超滤-液质联用筛选体系专属性、精密度、重复性、稳定性良好;白术内酯Ⅰ可与Tim-3蛋白特异性结合。结论成功表达了可溶性、高纯度的人Tim-3重组蛋白,成功建立亲和超滤-液质联用筛选体系,白术内酯Ⅰ可与Tim-3蛋白特异性结合。 展开更多
关键词 T细胞免疫球蛋白黏蛋白-3 重组蛋白 亲和超滤-液质联用 白术内酯Ⅰ
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