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蚯蚓纤溶酶的成分分析 被引量：52
1
作者 赵晓瑜 静天玉 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1998年第4期407-411,共5页
蚯蚓纤溶酶（ｅａｒｔｈｗｏｒｍｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｓ，ＥＦＥ）是从蚯蚓体内提取的一类纤维蛋白水解酶，是一种新的溶栓药．利用亲和层析技术，自蚯蚓匀浆液一步提取蚯蚓纤溶酶，并对该酶的成分进行了分析．实验表... 蚯蚓纤溶酶（ｅａｒｔｈｗｏｒｍｆｉｂｒｉｎｏｌｙｔｉｃｅｎｚｙｍｅｓ，ＥＦＥ）是从蚯蚓体内提取的一类纤维蛋白水解酶，是一种新的溶栓药．利用亲和层析技术，自蚯蚓匀浆液一步提取蚯蚓纤溶酶，并对该酶的成分进行了分析．实验表明，蚯蚓纤溶酶是一组非均一的糖蛋白，含糖量为５％左右，以中性已糖为主；等电点（ｐＩ）在４．０以下；富含Ａｓｐ，而Ｍｅｔ、Ｔｒｐ和Ｌｙｓ含量很少；ｌｍｇ蚯蚓纤溶酶相当于２５０～３００尿激酶单位． 展开更多
关键词 蚯蚓 纤溶酶 成分分析 糖蛋白 亲和层析
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二化螟体内乙酰胆碱酯酶的分布及纯化方法 被引量：26
2
作者 彭宇 王荫长 +2 位作者 韩召军 陈长琨 李国清 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期209-214,共6页
研究了二化螟Chilosuppressalis乙酰胆碱酯酶 (AChE)的体躯和亚细胞分布 ,并用凝胶过滤层析和 2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明 :二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部 ,而成虫胸部乙酰... 研究了二化螟Chilosuppressalis乙酰胆碱酯酶 (AChE)的体躯和亚细胞分布 ,并用凝胶过滤层析和 2种亲和层析方法从二化螟幼虫体内分离、纯化乙酰胆碱酯酶。结果表明 :二化螟幼虫乙酰胆碱酯酶的活性主要集中于头部和胸部 ,而成虫胸部乙酰胆碱酯酶的活性最低 ,显著低于头部和腹部。成虫体内AChE的活性明显高于幼虫。在亚细胞的分布上 ,乙酰胆碱酯酶主要位于膜上 (86 % ) ,近 46 %的活性存在微粒体中。在 3种纯化乙酰胆碱酯酶的方法中 ,以 3 羧基苯基 乙基二甲基铵作配体的亲和层析法纯化效果最佳 ,乙酰胆碱酯酶的最高纯化倍数为 5 36 0 5倍 ,产率 30 46 %。 展开更多
关键词 二化螟 乙酰胆碱酯酶 分布 纯化方法 亲和层析
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茶叶β-葡萄糖苷酶亲和层析纯化与性质研究 被引量：24
3
作者 张正竹 宛晓春 坂田完三 《茶叶科学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期16-22,共7页
以化学合成的β-葡萄糖苷酶的抑制剂β-葡萄糖脒为配体,通过N-糖苷键交联到支持物上,使糖脒N-糖苷键一侧的氨基保持带正电荷的活化状态,合成了一种β-葡萄糖苷酶的亲和层析树脂。这种合成的亲和层析树脂在弱酸条件下非常稳定,能选择性... 以化学合成的β-葡萄糖苷酶的抑制剂β-葡萄糖脒为配体,通过N-糖苷键交联到支持物上,使糖脒N-糖苷键一侧的氨基保持带正电荷的活化状态,合成了一种β-葡萄糖苷酶的亲和层析树脂。这种合成的亲和层析树脂在弱酸条件下非常稳定,能选择性地吸附β-葡萄糖苷酶,并能多次重复使用。利用这种亲和层析树脂,在pH6和pH5条件下,从薮北种茶树叶片中纯化出两种分子量分别为63和75kDa的β-葡萄糖苷酶单体酶。以对硝基苯酚β-葡萄糖苷为底物,研究了两种酶的性质。TLC分析结果表明,这两种β-葡萄糖苷酶都能水解(Z)-3-己烯醇、苯甲醇和苯乙腈的β-D-葡萄糖苷。 展开更多
关键词 茶学 Β-葡萄糖苷酶 茶叶香气 亲和层析 薮北种 β-葡萄糖脒
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苦瓜籽核糖体失活蛋白的理化性质及生物活性 被引量：21
4
作者 孟延发 杜毅峰 张雪梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第6期920-923,共4页
采用硫酸铵分级分离，假配基亲和层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析等方法，从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ和ＰＡＳ方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．... 采用硫酸铵分级分离，假配基亲和层析和ＳｅｐｈａｃｒｙｌＳ－１００分子筛层析等方法，从苦瓜籽中获得核糖体失活蛋白（ＲＩＰ）．经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、ＰＡＧＥ、ＩＥＦ和ＰＡＳ方法分析均表明为单一蛋白着色带或单一糖蛋白着色带．根据ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和Ｓｅｐｈａｄｅｘ Ｇ－１５０分子筛层析结果计算其相对分子质量为３．０×１０４，经ＩＥＦ－ＰＡＧＥ结果计算其ｐＩ为８．９～９．０．对无细胞系统中蛋白质生物合成抑制活性明显，其ＩＣ５０为５．３×１０－ １０ ｍ ｏｌ／Ｌ左右．体外生物活性试验结果表明其对人肝癌细胞、Ｖｅｒｏ、ＳＰ２／０、３Ｔ３、Ｋｂ、Ｎａｖａｎａ 等肿瘤细胞株均表现有不同程度的抑制作用．而对完整细胞人胚肺二倍体细胞却毒性极小．因此，上述实验结果为该ＲＩＰ的进一步深入研究和有可能开发成免疫毒素的高效弹头药物提供了一定的工作基础． 展开更多
关键词 理化性质 亲和层析 苦瓜 RIP 蛋白毒素 生物活性
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早期类风湿关节炎患者和正常人血清蛋白质组学分析比较 被引量：22
5
作者 安媛 蒲海 +1 位作者 何思志 栗占国 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第18期1261-1265,共5页
目的探讨类风湿关节炎(RA)早期患者血清蛋白质与正常人的差异。方法(1)选取10例病程1年内的早期RA患者血清以及10名正常对照。(2)血清样品处理高分子量蛋白质通过亲和层析以HiTrapTMBlue柱亲和除去白蛋白随后以HiTrapTMrPriteinA柱亲和... 目的探讨类风湿关节炎(RA)早期患者血清蛋白质与正常人的差异。方法(1)选取10例病程1年内的早期RA患者血清以及10名正常对照。(2)血清样品处理高分子量蛋白质通过亲和层析以HiTrapTMBlue柱亲和除去白蛋白随后以HiTrapTMrPriteinA柱亲和除去IgG进行富集。低分子量蛋白质通过C18吸附剂吸附梯度洗脱处理血清进行富集。(3)通过双向电泳进行差异比较,利用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI TOF MS)鉴定差异蛋白点。结果通过比较RA患者与正常对照血清的高分子量及低分子量蛋白质双向电泳,发现了RA患者中存在多个表达异常蛋白质点,差异蛋白质点质谱鉴定结果(1)RA患者血清中髓系相关蛋白(MRP)14阳性比例为10/10,正常对照均阴性;RA中MRP8阳性比例为10/10,正常对照为5/10;RA中泛素阳性比例为9/10,正常对照为1/10。(2)RA患者中载脂蛋白A I(ApoA I)、血清淀粉样蛋白(SA)A1、A2和转甲状腺蛋白含量明显高于正常人。结论MRP14/MRP8,SAA1/SAA2和泛素可能在RA致病过程中发挥了作用。 展开更多
关键词 血清蛋白质组学 正常人 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 关节炎患者 分析比较 血清淀粉样蛋白 RA患者 正常对照 类风湿关节炎 高分子量 低分子量 双向电泳 MRP14 性比例 早期患者 亲和层析 样品处理 梯度洗脱 差异比较
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人血浆MBL的分离纯化及其特性鉴定 被引量：17
6
作者 陈政良 韩强涛 +3 位作者 易正山 张丽芸 卢晓 彭良平 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第1期12-14,共3页
应用甘露聚糖－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析，从人血浆中分离纯化了甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）。在还原条件下进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，该结合蛋白显示２９ＫＤ的单一条带。１２５Ｉ－甘露聚糖与ＭＢＬ的结合是浓度依赖、可饱和... 应用甘露聚糖－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和层析，从人血浆中分离纯化了甘露聚糖结合凝集素（ＭＢＬ）。在还原条件下进行ＳＤＳ－ＰＡＧＥ，该结合蛋白显示２９ＫＤ的单一条带。１２５Ｉ－甘露聚糖与ＭＢＬ的结合是浓度依赖、可饱和的，且受Ｎ－乙酰甘露糖胺、Ｎ－乙酰葡糖胺、甘露糖及Ｌ－岩藻糖的抑制，但葡萄糖、半乳糖及其它单糖则否。这种结合依赖Ｃａ２＋，达５０％最大结合量的Ｃａ２＋浓度大约为１ｍｍｏｌ／Ｌ。 展开更多
关键词 甘露聚糖 结合蛋白 亲和层析 糖识别 钙依赖性
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以硅胶为载体的交联壳聚糖作为亲和层析填料基质的研究 被引量：15
7
作者 邬建敏 陈正贤 阮东梁 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第9期1063-1066,共4页
采用硅胶为载体的交联壳聚糖 (CTS SiO2 )作为亲和层析填料基质 ,对其卵清蛋白的偶联能力 ,以及亲和纯化小鼠抗卵清蛋白抗体效果等进行了研究。结果显示卵清蛋白能方便地用戊二醛偶联于CTS SiO2 基质 ,该新型亲和层析填料稳定性高 ,选... 采用硅胶为载体的交联壳聚糖 (CTS SiO2 )作为亲和层析填料基质 ,对其卵清蛋白的偶联能力 ,以及亲和纯化小鼠抗卵清蛋白抗体效果等进行了研究。结果显示卵清蛋白能方便地用戊二醛偶联于CTS SiO2 基质 ,该新型亲和层析填料稳定性高 ,选择性好 ,非特异性吸附小 ,每克交联壳聚糖上可偶联卵清蛋白 5 4.2 5mg ,用该填料可有效地亲和吸附小鼠抗卵清蛋白抗体 ,并可用碱性缓冲液将该抗体洗脱 ,初步显示出较好的分离纯化效果。 展开更多
关键词 载体 填料基质 交联壳聚糖 硅胶 亲和层析 酶联免疫分析 卵清蛋白 色谱法 分离 纯化
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沙田柚花柱S-糖蛋白的纯化和N-端序列测定 被引量：19
8
作者 杨继华 饶桂荣 薛妙男 《广西师范大学学报（自然科学版）》 CAS 2001年第1期72-79,共8页
以人工自花授粉 3 d后的沙田柚 (Citrusgrandisvar.Shatinyu Hort.)花柱为材料 ,切取 1 /2部位处花柱组织 ,匀浆后 ,进行抽提和硫酸铵盐析 ,得到 3 5%级分的蛋白质粗提液 ,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,显示出 9条蛋白质带 ;经 Con A-... 以人工自花授粉 3 d后的沙田柚 (Citrusgrandisvar.Shatinyu Hort.)花柱为材料 ,切取 1 /2部位处花柱组织 ,匀浆后 ,进行抽提和硫酸铵盐析 ,得到 3 5%级分的蛋白质粗提液 ,此液经聚丙烯酰胺凝胶电泳检测 ,显示出 9条蛋白质带 ;经 Con A-Sepharose 4 B亲和柱层析 ,特异峰 (S#)仅显示 1条蛋白质带 ,恰好是 3 5%级分中近正极端的 2种蛋白质中的一种最优势蛋白质 ;部分生化性质测定结果表明 ,该蛋白质为碱性糖蛋白 ,糖含量为 9.2 % ,由 2个亚基组成 ,相对分子质量分别为 3 8.0 ku,3 2 .0 ku,等电点分别约为 7.5,7.2 ;生物活性测定结果表明 ,该蛋白质能抑制离体 (in vitro)萌发自花花粉花粉管的生长 ;氨基酸序列分析表明 ,3 2 .0 ku组分 N-端 1 5个氨基酸序列与矮牵牛 ,花烟草等的 展开更多
关键词 沙田柚 花柱S-糖蛋白 亲和层析 N-端氨基酸序列 纯化 序列分析 生物活性
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昆虫谷胱甘肽S-转移酶分离纯化的新方法 被引量：11
9
作者 周先碗 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 1999年第2期269-273,共5页
谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷... 谷胱甘肽Ｓ－转移酶（ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅＳ－ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅｓ，ＧＳＴ）是一类具有多种生理功能的同功酶．从蜡螟幼虫（Ｇａｌｅｒｉａｍｅｌｏｎｅｌａ）的提取液中分离纯化谷胱甘肽Ｓ－转移酶的基本方法如下：首先将冷冻的蜡螟幼虫在磷酸缓冲液中匀桨，经１００００ｇ和１０００００ｇ分级离心；取上清液通过ＱＡＥ－ＳｅｐｈａｄｅｘＡ－２５离子交换柱层析除去部分色素和杂蛋白；然后采用谷胱甘肽－琼脂糖凝胶亲和层析（ＧＳＨ－ＱＴ４），四溴酚酞二磺酸盐－琼脂糖凝胶亲和层析（ＢＳＰ－ＱＴ４），铜离子－琼脂糖凝胶螯合层析（Ｃｕ２＋－ＱＴ４）及ＰＢＥ９４－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（ＰＢＥ９４）聚焦层析等层析技术进一步分离纯化．将上述方法获得的色谱峰以ＣＤＮＢ和ＤＣＮＢ为底物检测生物活性．具有生物活性部分的蛋白质，通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ测定其分子量．实验结果表明，采用ＧＳＨ－ＱＴ４亲和层析法获得的活性峰，在ＳＤＳ－ＰＡＧＥ图谱上呈现出两条带，分子量为２４ｋＤ，２４．５ｋＤ左右；Ｃｕ２＋－ＱＴ６螯合层析法分离的活性峰，呈现出一条带，分子量为２４ｋＤ左右；ＰＢＥ９４－聚焦层析法分离获得三个活性峰：第一色谱峰，呈现出一条带，分子量为２３ｋＤ左右? 展开更多
关键词 谷胱甘肽S 转移酶 层析聚焦 亲和层析 螯合层析
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O型口蹄疫病毒VP1表位重组蛋白疫苗的构建、表达和纯化 被引量：15
10
作者 冉波 邵明玉 +7 位作者 张培因 冯宇 卫红飞 王莉 王燕媚 胡大利 王丽颖 于永利 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期265-268,共4页
目的为了克服灭活口蹄疫病毒疫苗可能存在的传播病毒的潜在危险,构建一种能预防O型口蹄疫病毒感染的VP1表位重组蛋白疫苗。方法采用O型口蹄疫病毒(FMDV)表面VP1蛋白上的B细胞表位肽和T细胞表位肽,以PCR扩增和克隆连接等方法构建VP1表位... 目的为了克服灭活口蹄疫病毒疫苗可能存在的传播病毒的潜在危险,构建一种能预防O型口蹄疫病毒感染的VP1表位重组蛋白疫苗。方法采用O型口蹄疫病毒(FMDV)表面VP1蛋白上的B细胞表位肽和T细胞表位肽,以PCR扩增和克隆连接等方法构建VP1表位六聚体重组蛋白(VP1epi)基因,并在大肠杆菌中进行诱导表达,镍亲和层析纯化。用ELISA法检测VP1epi免疫豚鼠血清中抗FMDV抗体的水平。结果构建了一种由FMDV表面VP1中B细胞表位肽重复六次的蛋白质多肽,采用pET28原核表达系统,在大肠杆菌BL21(DE3)中获得了高效表达,表达产量约占菌体蛋白的30%左右,经镍亲和层析后获得纯度高于90%的VP1表位重组蛋白。VP1epi免疫的豚鼠血清中含有一定量的抗FMDV抗体。结论VP1epi重组蛋白能诱导机体产生抗O型FMDV的抗体,说明这种重组蛋白可能成为预防O型FMDV感染的基因工程蛋白质疫苗。 展开更多
关键词 基因工程疫苗 FMDV 亲和层析
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亲和层析技术在现代蛋白质研究中的应用及新发展 被引量：11
11
作者 李洪利 黄倢 周丽 《海洋湖沼通报》 CSCD 北大核心 2005年第3期86-94,共9页
亲和层析技术是目前重要的蛋白质研究技术之一。本文介绍了免疫亲和层析、凝集素亲和层析、核酸亲和层析、金属螯合亲和层析以及染料配体亲和层析等几类常规亲和层析的原理及在蛋白质分离纯化以及分析鉴定方面的应用;简要叙述了当今蛋... 亲和层析技术是目前重要的蛋白质研究技术之一。本文介绍了免疫亲和层析、凝集素亲和层析、核酸亲和层析、金属螯合亲和层析以及染料配体亲和层析等几类常规亲和层析的原理及在蛋白质分离纯化以及分析鉴定方面的应用;简要叙述了当今蛋白质组研究中新出现的两种与亲和层析有关的技术,串联亲和层析技术和SELDI芯片技术。并且提出了存在的问题以及今后发展趋势。 展开更多
关键词 亲和层析 蛋白质 纯化 鉴定
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蒜氨酸酶的分离纯化及其动力学特性 被引量：14
12
作者 乔旭光 张振华 秦晓春 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第9期1-4,共4页
采用 (NH4 ) 2 SO4 盐析、SephadexG 2 0 0凝胶过滤和ConA Sepharose亲和层析方法对蒜氨酸酶进行了部分纯化 ,并研究了其酶动力学特性 ,结果表明其最适反应温度为 3 0℃ ,最适pH值为6 2 4,以蒜氨酸为底物 ,最大反应速度Vmax =1 2 0u/mg... 采用 (NH4 ) 2 SO4 盐析、SephadexG 2 0 0凝胶过滤和ConA Sepharose亲和层析方法对蒜氨酸酶进行了部分纯化 ,并研究了其酶动力学特性 ,结果表明其最适反应温度为 3 0℃ ,最适pH值为6 2 4,以蒜氨酸为底物 ,最大反应速度Vmax =1 2 0u/mg(蛋白质 ) ,米氏常数 Km =6 0 2× 1 0 - 3mol/L。 展开更多
关键词 蒜氨酸酶 亲和层析 酶动力学 分离纯化 抑制 凝胶过滤 影响 米氏常数 最适PH值 底物
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糖化血红蛋白不同测定法的评价 被引量：18
13
作者 苏作军 《检验医学》 CAS 北大核心 2004年第6期514-517,共4页
目的　对 3种测定糖化血红蛋白的方法进行方法学评价。方法　用离子交换高效液相层析 (HPLC)法 (X)、微柱亲和层析手工法 (Y1)、胶乳凝集免疫法 (Y2 )测定糖化血红蛋白 ,进行线性范围、回收率、精密度、干扰因素及参考范围的分析。结果... 目的　对 3种测定糖化血红蛋白的方法进行方法学评价。方法　用离子交换高效液相层析 (HPLC)法 (X)、微柱亲和层析手工法 (Y1)、胶乳凝集免疫法 (Y2 )测定糖化血红蛋白 ,进行线性范围、回收率、精密度、干扰因素及参考范围的分析。结果　X、Y1、Y2 法的线性范围分别为 2 .8%～ 18%、3.6 %～ 15 .3%、2 .3%～15 .5 %。3种方法的平均回收率均在 95 %～ 10 4 %以内 ,批内、批间平均变异系数 (CV )均 <5 %。 10 .2mmol/L三酰甘油、8.0mmol/L胆固醇、6 84 μmol/L胆红素、10 .1%的HbF对 3种方法均无干扰。Y1法测定结果显著高于X法 (P <0 .0 1) ,回归方程 :Y1=1.15X - 0 .17(r =0 .86 ,P <0 .0 1) ;Y2 法与X法的测定结果差异有显著性(P <0 .0 5 ) ,Y2 法的测定结果偏低 ,回归方程 :Y2 =1.0 4X - 0 .6 9(r =0 .92 ,P <0 .0 1) ;X、Y1、Y2 法的参考范围分别是 4 .3%～ 6 .7%、3.5 %～ 8.3%、3.6 %～ 6 .7%。结论　与HPLC法相比 ,微柱亲和层析手工法测定结果偏高 ,而胶乳凝集免疫法的测定结果偏低。 展开更多
关键词 糖化血红蛋白 胶乳凝集 亲和层析 高效液相层析
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亲和层析在蛋白质研究中的应用进展 被引量：7
14
作者 王莉 刘道杰 李连之 《理化检验（化学分册）》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期515-517,共3页
文中介绍了生物、免疫、固定化金属离子拟生物几类常规亲和层析的原理及其在蛋白质分离纯化以及分析鉴定方面的应用(引用文献25篇)。
关键词 亲和层析 蛋白质 综述
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亲和层析技术在生物科学中的应用及发展 被引量：9
15
作者 李杨 韩梅 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第1期12-17,共6页
近几十年来,亲和层析技术发展十分迅速,广泛应用于生物分子(如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等)及组织(如细胞、细胞器、病毒等)的分离和纯化,是蛋白质组学研究中重要的技术之一.介绍了亲和... 近几十年来,亲和层析技术发展十分迅速,广泛应用于生物分子(如结合蛋白、酶、抑制剂、抗原、抗体、激素、激素受体、糖蛋白、核酸及多糖类等)及组织(如细胞、细胞器、病毒等)的分离和纯化,是蛋白质组学研究中重要的技术之一.介绍了亲和层析的基本类型及配体合成的研究进展,概述了亲和层析技术在蛋白质组学以及在其他方面的应用和发展动态. 展开更多
关键词 亲和层析 基本原理 类型 应用
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蚯蚓纤溶酶的亲和层析纯化及部分性质 被引量：7
16
作者 林少琴 余萍 兰瑞芳 《药物生物技术》 CAS CSCD 2000年第4期229-232,共4页
用牛血纤溶酶原Separose4B亲和层析方法从蚯蚓粗提物丙酮粉中分离纯化一种纤维蛋白溶解酶。该酶为糖蛋白 ,含糖量约为 1.43 % ,Mr为 30 0 0 0。实验结果表明此酶具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的间接溶解纤维蛋白的双重作用 ,并对... 用牛血纤溶酶原Separose4B亲和层析方法从蚯蚓粗提物丙酮粉中分离纯化一种纤维蛋白溶解酶。该酶为糖蛋白 ,含糖量约为 1.43 % ,Mr为 30 0 0 0。实验结果表明此酶具有直接溶解纤维蛋白和激活纤溶酶原的间接溶解纤维蛋白的双重作用 ,并对人血凝块有明显的溶解作用。 1%PMSF对酶有显著的抑制作用 。 展开更多
关键词 蚯蚓纤溶酶 纤溶酶原 亲和层析 纯化 抗血栓药
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亲和层析微柱法测定肝癌特异性AFP 被引量：14
17
作者 吴玮 姚登福 +5 位作者 顾丽华 樊冀伟 陆秀凤 李小华 邱历伟 吴信华 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期10-12,共3页
目的建立一种方便、经济的方法检测血清中肝癌(HCC)特异性AFP(AFP-L3)。方法用小扁豆凝集素(LCA)亲和层析柱分离血清中AFP-L3,放射免疫法测定AFP及AFP-L3。结果肝癌患者血清经LCA-Sepharose4B亲和层析柱分离和含α-甲基-D-甘露糖苷的解... 目的建立一种方便、经济的方法检测血清中肝癌(HCC)特异性AFP(AFP-L3)。方法用小扁豆凝集素(LCA)亲和层析柱分离血清中AFP-L3,放射免疫法测定AFP及AFP-L3。结果肝癌患者血清经LCA-Sepharose4B亲和层析柱分离和含α-甲基-D-甘露糖苷的解吸液洗脱可得到AFP-L3。以AFP-L3在总AFP中所占百分比≥15%作为临界值,本法诊断HCC的敏感性为92·7%,特异性为88·2%。结论该法特异性强、敏感性高、重复性好,且方便、经济,为临床早期诊断肝癌的有用指标。 展开更多
关键词 肝癌特异性AFP 亲和层析 肝癌
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赤子爱胜蚓纤维蛋白溶解酶的亲和层析纯化和生化特性 被引量：12
18
作者 徐建民 张国桢 +2 位作者 陈松鹤 周元聪 陈远聪 《上海医科大学学报》 CSCD 1991年第4期252-256,共5页
用慈菇蛋白酶抑制剂Sepharose 4B亲和层析方法从蚯蚓丙酮粉抽提液中得到较高纯度和活性的蚯蚓纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)制剂。经快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,内含9个纤溶活性峰。对其中第九峰进行电泳测定,为单一条带,分子量为27000,还... 用慈菇蛋白酶抑制剂Sepharose 4B亲和层析方法从蚯蚓丙酮粉抽提液中得到较高纯度和活性的蚯蚓纤维蛋白溶解酶(纤溶酶)制剂。经快速蛋白质液相色谱(FPLC)分析,内含9个纤溶活性峰。对其中第九峰进行电泳测定,为单一条带,分子量为27000,还测定了其氨基酸组成,糖含量及酶的底物特异性。 展开更多
关键词 蚯蚓 纤维蛋白酶 溶解酶 亲和层析
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hCuZn-SOD基因的克隆、表达及其产物的初步纯化和表征 被引量：11
19
作者 陈春 陈躬瑞 +2 位作者 刘树滔 卢菀华 饶平凡 《福州大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2004年第6期763-768,共6页
为获得hCuZn-SOD基因,根据GenBank中人铜锌超氧化物歧化酶(hCuZn-SOD)基因碱基序列,设计扩增引物,用RT-PCR方法从人的肝细胞中克隆出hCuZn-SODcDNA序列,并将它插入pUCm-T载体中,经过DNA序列测定证实,该片段序列的一个碱基发生突变(与报... 为获得hCuZn-SOD基因,根据GenBank中人铜锌超氧化物歧化酶(hCuZn-SOD)基因碱基序列,设计扩增引物,用RT-PCR方法从人的肝细胞中克隆出hCuZn-SODcDNA序列,并将它插入pUCm-T载体中,经过DNA序列测定证实,该片段序列的一个碱基发生突变(与报道基因相比),引起其编码第116个氨基酸由G变为D.采用定向克隆的方法将hCu Zn-SOD的cDNA片段克隆到表达载体pGEX-2T上,构建表达质粒pGEX-SOD,并转化大肠杆菌BL21(DE3).SDS-PAGE分析证实,经IPTG诱导,融合蛋白GST-SOD获得高效表达.破碎菌体、上清经谷胱甘肽亲和层析初步纯化后,得到纯度达90%的目的蛋白.活性实验表明,GST-SOD具有生物活性. 展开更多
关键词 人铜/锌超氧化物歧化酶 克隆 RT-PCR 表达 融合蛋白 亲和层析
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血管紧张素转换酶纯化与性质研究 被引量：13
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作者 刘宏 陈兰英 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 2000年第6期788-792,共5页
为了深入了解猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)的性质和功能 ,对猪肺 ACE的分离纯化以及部分酶学性质进行了研究 .猪肺组织匀浆经 1 .6～ 2 .6mol/L硫酸铵分级沉淀等步骤后 ,利用亲和胶进行亲和层析分离 .2 0 ... 为了深入了解猪肺血管紧张素转换酶 (angiotensin converting enzyme,ACE)的性质和功能 ,对猪肺 ACE的分离纯化以及部分酶学性质进行了研究 .猪肺组织匀浆经 1 .6～ 2 .6mol/L硫酸铵分级沉淀等步骤后 ,利用亲和胶进行亲和层析分离 .2 0 0 g猪肺组织中提纯出 0 .79mg ACE,比活力 38.8U/mg,SDS- PAGE电泳鉴定为一条带 ,分子量约 1 80 k D,等电点 (p I)为 p H4.5,糖含量约 2 3.6% ,氨基酸组成分析发现猪肺 ACE分子中含有 1 346个氨基酸 ,其中酸性氨基酸含量较高 ,碘乙酸的修饰结果表明猪肺 ACE中巯基基团未参与酶的催化反应 .酶反应动力学结果显示 ,ACE催化 Fa PGG底物反应时的最适 p H大约为 p H 7.6,反应活化能 Ea=4.37× 1 0 4 J/mol,酶活性部位附近的组氨酸和具有类似 α-氨基性质的氨基酸可能参与了 ACE催化反应 .有关猪肺 ACE的基本生化性质、氨基酸组成以及酶学性质的结果 ,为今后深入研究奠定了基础 . 展开更多
关键词 血管紧张素转换酶 分离纯化 亲和层析 酶学性质
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