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可视化多重荧光LAMP鉴别诊断牛轮状病毒和产肠毒素性大肠杆菌的研究 被引量：5
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作者 范晴 谢芝勋 +8 位作者 谢志勤 谢丽基 黄娇玲 张艳芳 曾婷婷 王盛 罗思思 邓显文 刘加波 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第9期1119-1127,共9页
本研究旨在建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和产肠毒大肠杆菌(ETEC)的多重荧光LAMP检测方法。根据GenBank中BRV和ETEC的基因保守区域设计3套LAMP引物,在每条内引物FIP的5’端标记荧光基团,在同一体系中进行多重LAMP扩增,对各反应条件... 本研究旨在建立一种同时检测牛轮状病毒(BRV)和产肠毒大肠杆菌(ETEC)的多重荧光LAMP检测方法。根据GenBank中BRV和ETEC的基因保守区域设计3套LAMP引物,在每条内引物FIP的5’端标记荧光基团,在同一体系中进行多重LAMP扩增,对各反应条件进行优化,应用该方法对采集自广西各地牛场的56份样品进行检测。结果显示,该方法能特异地鉴别牛轮状病毒和产肠毒大肠杆菌,并与其他对照病原不发生交叉反应;每个反应的检测灵敏度均为100拷贝。对56份腹泻样品的检测结果显示,BRV的感染率为14.3%,ETEC的感染率为57.1%,2种病原的混合感染率为8.9%;与荧光PCR和常规PCR检测方法相比,此多重LAMP方法敏感性为100%,符合率为100%。建立的方法可快速、准确地检测2种犊牛腹泻病原体,为病原学诊断和分子流行病学调查提供了有效技术支持。 展开更多
关键词 牛 轮状病毒 产肠毒大肠杆菌 多重LAMP 检测
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植物提取物对感染产肠毒性大肠杆菌仔猪生长性能、粪便特性及肠道健康的影响 被引量：2
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作者 王申锋 钱明珠 +3 位作者 李爱心 胡梅 王德刚 朱金凤 《中国饲料》 北大核心 2021年第20期33-36,共4页
文章旨在评估基础日粮补充植物提取物对感染产肠毒性大肠杆菌仔猪断奶后3周生长性能、粪便特征及肠道健康的影响。试验将432头21 d断奶、平均体重为6.12 kg的仔猪随机分为3组,每组8个重复,每个重复18头。断奶后前1周,各组断奶仔猪饲喂... 文章旨在评估基础日粮补充植物提取物对感染产肠毒性大肠杆菌仔猪断奶后3周生长性能、粪便特征及肠道健康的影响。试验将432头21 d断奶、平均体重为6.12 kg的仔猪随机分为3组,每组8个重复,每个重复18头。断奶后前1周,各组断奶仔猪饲喂基础日粮,在断奶第7天,感染组和植物提取物组仔猪通过口服接种4×10^(9) CFU/头产肠毒性大肠杆菌,对照组不做任何处理。之后对照组、感染组分别饲喂基础日粮,植物提取物组仔猪饲喂基础日粮+200 mg/kg植物提取物,试验从断奶当天开始持续3周。结果:断奶后3周感染组仔猪体重、15~21 d和1~21 d平均日增重显著低于对照组和植物提取物组(P<0.05),而料重比显著提高(P<0.05)。同时,感染组仔猪15~21 d平均日增重显著低于对照组(P<0.05),料重比显著提高(P<0.05)。粪便评分0~1%时,感染组和植物提取物组仔猪在感染后7 d显著高于对照组(P<0.05),同时,感染组仔猪在感染后14 d也显著高于对照组(P<0.05)。粪便评分大于1%时,感染组仔猪在感染后7 d表现最高(P<0.05),同时感染组仔猪在感染后14 d也显著高于对照组(P<0.05)。对照组与植物提取物组对仔猪断奶后3周十二指肠绒毛高度的影响无显著差异(P>0.05),但对照组十二指肠绒毛高度较感染组显著提高15.85%(P<0.05),同时,对照组和植物提取物组断奶仔猪空肠绒毛高度较感染组分别显著提高11.73%和9.93%(P<0.05)。结论:在本研究环境条件下,仔猪断奶后1周感染产肠毒性大肠杆菌会提高腹泻率,降低十二指肠和空肠绒毛高度,进而对日增重和饲料效率产生负面作用,日粮补充200 mg/kg植物提取物可以缓解肠毒性大肠杆菌对仔猪断奶后前3周的生长抑制作用。 展开更多
关键词 植物提取物 产肠毒大肠杆菌 断奶仔猪 生长性能 粪便特性 肠道健康
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ETEC F4-F5融合基因表达及间接ELISA方法建立 被引量：5
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作者 张强 张雪寒 +1 位作者 何孔旺 王春凤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1312-1317,共6页
表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入... 表达产肠毒素性大肠杆菌(enterotoxigenic Escherichia coli,ETEC)黏附素F4和F5融合蛋白,建立间接ELISA方法,旨在监测猪场ETEC感染以及疫苗免疫情况。根据GenBank中登录F4和F5基因序列,分析保守区,优化密码子,合成F4-F5串联基因,克隆入原核表达载体,表达重组蛋白His-F4-F5。以纯化的His-F4-F5蛋白作为检测抗原,建立检测ETEC抗体的间接EIISA方法。经酶切和DNA序列分析,成功构建重组菌BL21(pCold I-F4-F5),SDS-PAGE和Western blot分析,融合表达F4-F5相对分子质量为29 000,与ETEC高免血清发生特异性反应,条带单一。经优化筛选的间接ELISA最佳反应条件:抗原包被浓度6ng/孔,待检血清稀释比例1∶200,HRP-羊抗猪二抗的工作浓度1∶15 000,5%脱脂奶封闭l h,底物作用时间15min。本研究建立F4-F5间接ELISA方法具有特异性好、敏感性高、重复性好、稳定性强的特点,是猪场ETEC感染和疫苗免疫效果检测的有效工具,进而指导疫苗使用和新型疫苗研发。 展开更多
关键词 产肠毒索性大肠杆菌 F4菌毛 F5菌毛 间接酶联免疫吸附试验
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大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的减毒鼠伤寒沙门疫苗菌的构建与表达
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作者 杨冬梅 陈创夫 +3 位作者 王鹏雁 王远志 李有文 刘君 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期104-108,共5页
本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含... 本研究为构建表达产肠毒素性大肠杆菌融合基因K88ac-STⅡ的无抗性减毒鼠伤寒沙门氏菌疫苗株,从质粒pET-K88ac-STⅡ中扩增编码融合蛋白K88ac-STⅡ的基因并插入线性T载体pBS-T中,经酶切、PCR、测序鉴定正确后,再用限制性内切酶切下,插入含有asd基因的表达载体pYA3334,构建pYA-K88ac-STⅡ重组质粒。重组质粒鉴定正确后电穿孔转入缺失腺苷酸环化酶基因(△cya)、环腺苷酸受体蛋白基因(△crp)以及天冬氨酸β-半醛脱氢酶基因(△asd)的鼠伤寒沙门菌(X4550)中,以获得重组菌株X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。结果显示该无抗药性的重组菌株在体外营养选择压力下,可较稳定地携带重组质粒传代繁殖,口服该疫苗菌株无明显的毒性作用。通过本试验成功构建了表达K88ac-STⅡ融合基因平衡致死的减毒鼠伤寒沙门重组菌X4550(含pYA-K88ac-STⅡ)。为防治仔猪腹泻提供了口服活菌疫苗候选株。 展开更多
关键词 产肠毒索性大肠杆菌 融合基因 耐热肠毒素 鼠伤寒沙门氏菌 重组
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