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血红素合成酶特异性RNAi表达载体的构建及其干扰效果鉴定
1
作者 黄前川 李津婴 +3 位作者 曹军皓 丁进亚 周虹 许艳群 《山东医药》 CAS 北大核心 2009年第13期11-13,共3页
目的利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-б-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定。方法根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列... 目的利用含红色荧光报告基因(DsRed)的pGCsi-U6/Neo/DsRed/质粒构建干扰人红系特异的γ-氨基-б-酮戊酸合成酶(eALAS)基因表达的短发夹RNA(shRNA)表达载体,并进行活性鉴定。方法根据GenBank中eALAS的序列,设计3条表达shRNA的互补DNA序列,分别克隆至质粒载体pGCsi-U6/Neo/DsRed中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株扩增后,提取质粒测序分析,以相同的方法构建并鉴定eALAS基因的真核表达载体pEGFP-N1-eALAS;将3种pGCsi-U6/Neo/DsRed/eALAS-shRNA分别与pEGFP-N1-eALAS共转染HEK293细胞株,通过流式细胞仪检测pEGFP-N1-eALAS融合蛋白的荧光强度,选择最佳RNA干扰(RNAi)靶点,并在基因和蛋白水平检测eALAS的表达,进一步验证最佳RNAi靶点的敲减效率。结果经测序,模板序列与设计序列完全正确,最佳RNAi靶点敲减效率达72.45%,eALAS在基因和蛋白水平显著下降。结论成功构建了eALAS特异性RNAi表达载体,为下一步研究铁效应元件eALAS在铁代谢异常所致红系统疾病的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 铁效应元件 亚铁鳌合酶 短发夹RNA
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低温对羽衣甘蓝白鸽血红素含量及其合成基因表达的影响
2
作者 周爽 马超 +4 位作者 李学来 原佳乐 刘晓冉 孙堃峰 史国安 《河南农业科学》 CSCD 北大核心 2018年第8期102-108,共7页
为了解低温条件下羽衣甘蓝白鸽叶片失绿的血红素调控机制,以常温条件作为对照,系统研究了低温处理对白鸽植株血红素含量及血红素、叶绿素生物合成相关基因表达的影响。结果表明:常温条件下,白鸽嫩叶表现为正常的绿色,低温条件下,白鸽中... 为了解低温条件下羽衣甘蓝白鸽叶片失绿的血红素调控机制,以常温条件作为对照,系统研究了低温处理对白鸽植株血红素含量及血红素、叶绿素生物合成相关基因表达的影响。结果表明:常温条件下,白鸽嫩叶表现为正常的绿色,低温条件下,白鸽中心嫩叶明显失绿;低温条件下,白色嫩叶中血红素含量为[(0.021 2±0.007 01)mg/mL],显著高于常温条件下绿色嫩叶中血红素含量[(0.000 973±0.000 542 8)mg/mL];半定量RT-PCR结果显示,血红素和叶绿素共有合成基因的表达水平在常温及低温条件下没有显著差异;血红素合成途径基因FC1在低温白色嫩叶中的相对表达量为(2 000±160.934 8),显著高于常温绿色嫩叶中的相对表达量(1 440±170.587 2);叶绿素合成途径基因PORB、PORC及Chl P在低温条件下显著下调。 展开更多
关键词 低温 羽衣甘蓝白鸽 生物合成途径 叶绿素 亚铁鳌合酶 NADPH-原脱植基叶绿素氧化还原酶
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