人SDCT2β3′-非翻译区基因表达负调控序列对mRNA稳定性的影响 被引量：1

1

作者 白雪源 陈香美 +1 位作者 傅博 汪杨 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2008年第7期785-790,共6页

为探索人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因(high affinity sodium-dependent dicarboxylate transporter,SDCT2)3′端非翻译区是否在基因表达调控中起作用,首先通过生物信息学分析发现,在SDCT2βmRNA的3′端非翻译区内存在585nt... 为探索人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因(high affinity sodium-dependent dicarboxylate transporter,SDCT2)3′端非翻译区是否在基因表达调控中起作用,首先通过生物信息学分析发现,在SDCT2βmRNA的3′端非翻译区内存在585nt的AU富含区(AU-rich region,AUR),其中包括3个AU富含元件(AU-rich element,ARE),然后将SDCT2β的AU富含区DNA片段插入报告基因GFP表达载体pcDNA-GFP的下游,构建pcDNA-GFP-AUR表达载体并转染HEK293、HKC和LLC-PK1细胞系,用Western blot和流式细胞仪检测细胞中GFP的表达水平.结果显示,SDCT2β的AU富含区序列可显著降低GFP的表达水平(P<0.01).利用放线菌素D阻断RNA转录后,每隔2h从稳定转染的HEK293细胞中提取总RNA,用RNA印迹分析GFP mRNA的稳定性.结果显示GFP-AURmRNA较GFP mRNA不稳定.这些结果提示,在SDCT2β3′非翻译区的AU富含区内存在基因表达负调控区,该区可降低mRNA的稳定性、促进mRNA的降解,从而在转录后水平调控基因的表达. 展开更多

关键词 二羧酸转运蛋白 3′非翻译区 转录后调控 MRNA稳定性

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高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白基因的克隆、表达及亚细胞定位研究

2

作者 白雪源 陈香美 +2 位作者 侯剀 冯哲 傅博 《科学技术与工程》 2004年第11期909-912,920,共5页

为了研究高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白(high affinity sodium-dependent dicarboxylate trans-porter,SDCT2,NaDC3)的功能,从小鼠肾组织中克隆出了其cDNA基因,并对其结构特征、基因表达谱及细胞内定位情况进行了分析。结果显示NaDC... 为了研究高亲和力钠离子依赖二羧酸转运蛋白(high affinity sodium-dependent dicarboxylate trans-porter,SDCT2,NaDC3)的功能,从小鼠肾组织中克隆出了其cDNA基因,并对其结构特征、基因表达谱及细胞内定位情况进行了分析。结果显示NaDC3蛋白由600个氨基酸组成,同源性分析表明其氨基酸序列与大鼠及人NaDC3分别有97％和87％相同。二级结构分析显示,该蛋白有13个跨膜α-螺旋区。Northern杂交显示该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达。激光共聚焦显微镜观察显示该蛋白定位于肾小管上皮细胞膜上。 展开更多

关键词 钠离子 二羧酸转运蛋白 克隆 肾小管 亚细胞定位 基因表达 生物信息学

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大鼠高亲和力二羧酸转运蛋白的克隆表达及细胞内定位

3

作者 侯剀 白雪源 +2 位作者 陈香美 冯哲 傅博 《生物技术通讯》 CAS 2008年第3期328-331,共4页

目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体... 目的:克隆大鼠高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT2)的全长cDNA,并明确其在肾小管上皮细胞内的定位表达情况。方法:从大鼠肾组织中提取总RNA,用带有8肽FLAG标签的PCR引物通过RT-PCR技术扩增出SDCT2全长基因并测序,将其插入真核表达载体中构建SDCT2真核表达载体,然后将它们转染到肾小管上皮细胞LLC-PK1中表达,并用激光共聚焦显微镜观察该蛋白的亚细胞定位情况。结果:扩增出2kb的SDCT2全长基因,Westernblot表明SDCT2基因在LLC-PK1细胞中得到了正确的表达;共聚焦显微镜分析显示正常SDCT2蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致;为了比较不同连接温度对重组DNA连接效率的影响,观察了3种连接温度下的转化效率,结果显示温度循环法的连接效率明显比其他2种常规连接温度要高。结论:高亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白全长基因被成功克隆,其主要表达于肾小管上皮细胞膜上。 展开更多

关键词 二羧酸转运蛋白 三羧酸循环 肾小管 亚细胞定位 连接效率

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人肾高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因的克隆和生物信息学分析 被引量：8

4

作者 白雪源 陈香美 邱强 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期404-410,共7页

为探讨人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (humanhigh affinitysodium dependentdicar boxylatetransporter,hSDCT2orhNaDC3 )基因在人体内的生理功能及其与疾病的关系 ,借助生物信息学成功地从人肾中克隆了hSDCT2基因 (GenBank接收... 为探讨人高亲和力钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 (humanhigh affinitysodium dependentdicar boxylatetransporter,hSDCT2orhNaDC3 )基因在人体内的生理功能及其与疾病的关系 ,借助生物信息学成功地从人肾中克隆了hSDCT2基因 (GenBank接收号 :AY0 72 810 ) .首先将大鼠SDCT2cDNA与人EST数据库进行同源性比较 ,获得具有高度同源性EST片段并用DNAstar软件将它们拼接成EST重叠群 .在重叠群上设计PCR引物从人肾总RNA中用RT PCR扩增出hSDCT2基因并测序 ,然后用软件对其结构特性、组织分布及基因定位进行分析 .序列测定结果显示 ,hSDCT2开放阅读框为180 9bp ,共编码 6 0 2个氨基酸 .蛋白同源性分析表明 ,其氨基酸序列与大鼠及小鼠SDCT2分别有85 %和 87%相同 .二级结构分析显示 ,该蛋白有 12个跨膜螺旋区 .Northern分析显示 ,该基因可在肾、肝、脑、胎盘等多种组织中表达 ,并定位于 2 0号染色体的q12～q13 展开更多

关键词 人肾 亲和力 钠离子依赖性二羧酸转运蛋白基因 克隆 生物信息学分析

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钠依赖二羧酸转运蛋白在IgA肾病患者肾组织表达的研究 被引量：3

5

作者 师锁柱 陈香美 +1 位作者 张雪光 吴杰 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期297-300,共4页

目的 研究人钠依赖二羧酸转运蛋白(human Na^+/dicarboxylate cotransporter,NaDC)在IgA肾病患者肾组织内表达的变化,探讨其在IgA肾病进展过程中的作用。方法 34例IgA肾病肾活检标本依据病理改变程度分为5级,同时对肾小管间质病变进行... 目的 研究人钠依赖二羧酸转运蛋白(human Na^+/dicarboxylate cotransporter,NaDC)在IgA肾病患者肾组织内表达的变化,探讨其在IgA肾病进展过程中的作用。方法 34例IgA肾病肾活检标本依据病理改变程度分为5级,同时对肾小管间质病变进行半定量分析。应用免疫组织化学技术观察肾组织内NaDC1和NaDC3的表达变化,并与临床指标进行相关分析。结果 随着IgA肾病病理改变程度的加重,肾小管间质病变亦加重。Ⅳ和Ⅴ级病变患者的24h尿蛋白定量、血肌酐和尿NAG酶均显著升高,尿渗透浓度显著下降(P<0.05)。NaDC1表达于近端肾小管上皮细胞的刷状缘上,与Ⅰ～Ⅲ级病例相比,Ⅳ和Ⅴ级病例中的NaDC1的表达减少,其中以Ⅴ级表达最少(P<0.05)。NaDC3表达于近端肾小管上皮细胞的基底侧膜上,与Ⅰ～Ⅱ级病例相比,Ⅱ～Ⅳ级病例中的NaDC3的表达增多,在Ⅴ级病例中,其表达显著减少(P<0.05)。肾小管NaDC1表达与尿NAG酶呈负相关(r=-0.627,P<0.05)。结论 钠依赖二羧酸转运蛋白的表达变化在IgA肾病进展过程中发挥重要的作用。 展开更多

关键词 钠依赖二羧酸转运蛋白 IGA肾病 肾组织 表达

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人钠依赖性二羧酸转运蛋白2(hSDCT2)的组织表达谱分析 被引量：1

6

作者 朱晗玉 陈香美 +4 位作者 刘章锁 何娅妮 彭丽霞 洪权 孙雪蜂 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期552-557,共6页

利用DNA重组技术 ,构建重组表达质粒pGEX hSDCT2 .IPTG诱导其表达后 ,采用谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的谷胱甘肽S 转移酶 (GST) hSDCT2重组融合蛋白 .以此为免疫原免疫兔制备GST hSDCT2融合蛋白抗体 .多组织Northern印... 利用DNA重组技术 ,构建重组表达质粒pGEX hSDCT2 .IPTG诱导其表达后 ,采用谷胱甘肽 Sepharose 4B亲和层析 ,获得纯化的谷胱甘肽S 转移酶 (GST) hSDCT2重组融合蛋白 .以此为免疫原免疫兔制备GST hSDCT2融合蛋白抗体 .多组织Northern印迹法结果显示 ,3 6kb的hSDCT2基因转录产物 ,在心、骨骼肌、胸腺、小肠、肺和外周血白细胞等组织中几乎不表达 ,在脑、结肠、脾、肝和胎盘中仅有少量表达 ,但在肾脏中大量表达 ;并且在肾脏和脾脏中还存在着另一种约 4 3kb的转录产物 .Western印迹法证实 ,hSDCT2蛋白以类似方式于上述组织表达 .免疫组化双重染色结果发现 ,与分布于近端肾小管刷状缘的hSDCT1不同 ,hSDCT2主要分布于近端肾小管的基底膜侧 .这些结果为进一步研究人钠依赖性二羧酸转运蛋白 2的结构和功能奠定了基础 . 展开更多

关键词 人钠依赖性二羧酸转运蛋白2 组织表达谱 抗体 表达质粒 跨膜转运蛋白

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甘蔗液泡膜二羧酸转运蛋白基因ScTDT克隆与表达分析 被引量：1

7

作者 冯小艳 王俊刚 +5 位作者 赵婷婷 彭李顺 王文治 冯翠莲 沈林波 张树珍 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期325-331,共7页

【目的】克隆甘蔗液泡膜二羧酸转运蛋白基因(ScTDT),并分析其在甘蔗不同组织及在铝胁迫下的表达模式,为深入研究该基因功能及抵抗铝胁迫的分子机制提供理论依据。【方法】利用同源克隆技术从甘蔗品种ROC22中克隆ScTDT基因,利用生物信息... 【目的】克隆甘蔗液泡膜二羧酸转运蛋白基因(ScTDT),并分析其在甘蔗不同组织及在铝胁迫下的表达模式,为深入研究该基因功能及抵抗铝胁迫的分子机制提供理论依据。【方法】利用同源克隆技术从甘蔗品种ROC22中克隆ScTDT基因,利用生物信息学软件进行序列分析,采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在甘蔗不同组织(根、茎和叶)及在铝胁迫(0、10和20μmol/L Al^(3+))下的表达水平。【结果】克隆获得的ScTDT基因,开放阅读框(ORF)全长1623 bp,编码540个氨基酸残基,蛋白相对分子量57.34 kD,理论等电点(pI)5.77,为不稳定的疏水蛋白,可能定位于质膜、液泡和/或高尔基体,其氨基酸序列与高粱(XP_002460443.1)、水稻(XP_015612609.1)和玉米(PWZ04635.1)的TDT氨基酸序列具有高度相似性,其中与高粱的TDT氨基酸序列相似性最高,达96.30%,说明ScTDT与高粱TDT的亲缘关系最近。ScTDT基因在甘蔗根、茎和叶中均有表达,但根中表达量显著高于茎和叶(P<0.05,下同)。在铝胁迫处理下,3个甘蔗品种(ROC22、柳城05-136和中糖1202)的根中ScTDT基因表达量较对照组(0μmol/L Al^(3+))均显著升高,尤其是柳城05-136和中糖1202随着营养液中Al^(3+)浓度增加,ScTDT基因的表达量呈显著升高趋势,说明高浓度Al^(3+)胁迫更能诱导ScTDT基因高效表达。3个甘蔗品种中,以中糖1202的ScTDT基因表达量变化最大,柳城05-136次之,以ROC22的变化最小。【结论】克隆获得的ScTDT基因表达具有组织特异性,在根中高效表达可能与甘蔗抵抗铝胁迫相关,即植株通过上调根中ScTDT基因表达,从而加快液泡中苹果酸的释放,促使苹果酸从根中分泌到土壤与Al^(3+)反应,从而减少铝毒害,表明ScTDT基因可能参与甘蔗抵抗铝胁迫,且不同甘蔗品种的抗铝胁迫能力有所不同。 展开更多

关键词 甘蔗 液泡膜二羧酸转运蛋白(TDT) 基因克隆 组织 铝胁迫

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钠离子依赖性二羧酸转运蛋白研究进展 被引量：1

8

作者 杨聚荣 何娅妮 《重庆医学》 CAS CSCD 2008年第4期427-429,共3页

关键词 钠离子依赖性二羧酸转运蛋白 肾脏 调控

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钠依赖二羧酸转运蛋白3和葡萄糖对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响 被引量：1

9

作者 何建英 陈香美 +1 位作者 白雪源 王建中 《解放军医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第7期600-602,共3页

目的　探讨钠离子依赖的二羧酸转运蛋白 3(NaDC3)对细胞能量代谢的作用以及NaDC3不同表达和不同葡萄糖浓度对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响。方法　应用Westernblot明确正义转染、反义转染、空质粒转染 (pcDNA3)及未转染的人近曲肾小... 目的　探讨钠离子依赖的二羧酸转运蛋白 3(NaDC3)对细胞能量代谢的作用以及NaDC3不同表达和不同葡萄糖浓度对肾小管上皮细胞琥珀酸转运的影响。方法　应用Westernblot明确正义转染、反义转染、空质粒转染 (pcDNA3)及未转染的人近曲肾小管上皮细胞 (HKC)中细胞hNaDC3蛋白表达的差异 ,用毛细管电泳技术测定不同时间点或同一时间不同葡萄糖浓度时细胞摄取缓冲液中琥珀酸的量。结果　正义转染细胞hNaDC3蛋白表达增强 ,约是未转染HKC细胞的 1 5倍 ,缓冲液中琥珀酸含量下降较快 ,琥珀酸摄取增快。反义转染细胞hNaDC3蛋白表达下降 ,约是未转染HKC细胞的 2 / 3,但两者缓冲液中琥珀酸含量下降差异无统计学意义 (P >0 0 5 )。空质粒转染对hNaDC3蛋白表达和琥珀酸摄取无明显影响。随葡萄糖浓度增加 ,缓冲液中琥珀酸含量下降增快。结论　hNaDC3蛋白过表达可加速三羧酸循环中间代谢产物的转运 。 展开更多

关键词 钠离子依赖的二羧酸转运蛋白-3 琥珀酸 葡萄糖

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钠/二羧酸转运蛋白研究进展

10

作者 何娅妮 陈香美 《生理科学进展》 CAS CSCD 北大核心 2003年第3期245-247,共3页

钠 /二羧酸转运蛋白 (NaDCs)是一类负责转运枸橼酸、琥珀酸及α 酮酸等三羧酸循环中间产物的跨膜有机阴离子转运蛋白。分布于小肠、肾脏、肝脏、肾上腺、脑、肺及胎盘等组织。它不仅参与能量代谢、酸碱平衡调节 ,而与氨基酸及糖皮质激... 钠 /二羧酸转运蛋白 (NaDCs)是一类负责转运枸橼酸、琥珀酸及α 酮酸等三羧酸循环中间产物的跨膜有机阴离子转运蛋白。分布于小肠、肾脏、肝脏、肾上腺、脑、肺及胎盘等组织。它不仅参与能量代谢、酸碱平衡调节 ,而与氨基酸及糖皮质激素的合成也有密切关系 ,新近研究发现它可能还是调控哺乳类寿限的重要基因之一。 展开更多

关键词 钠/二羧酸转运蛋白 有机阴离子 肾脏 生物学功能

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大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白对枸橼酸及草酸转运电生理特性的研究

11

作者 吴镝 丁瑞 +4 位作者 陈香美 侯剀 洪权 朱晗玉 冯哲 《中华肾脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期195-198,共4页

目的 探讨大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT1)对枸橼酸及草酸的转 运特点。方法 克隆出大鼠SDCT1全长cDNA基因。应用爪蟾卵母细胞异源性表达SDCT1,并 使用双电极电压钳法记录通道电流。通过改变灌流液中枸橼酸、草酸的浓度,以及... 目的 探讨大鼠低亲和力钠依赖二羧酸转运蛋白(SDCT1)对枸橼酸及草酸的转 运特点。方法 克隆出大鼠SDCT1全长cDNA基因。应用爪蟾卵母细胞异源性表达SDCT1,并 使用双电极电压钳法记录通道电流。通过改变灌流液中枸橼酸、草酸的浓度,以及两种底物转运 时钠离子的浓度及pH值,对其特性进行了研究。结果SDCT1对枸橼酸及草酸的转运均为底 物浓度及钠离子依赖。pH值变化显著影响2者的转运。但低pH对草酸的转运影响要远大于枸 橼酸。结论 在临床实践中,虽然升高尿液pH值可以抑制枸橼酸的重吸收,发挥其抑制钙盐沉 积的功能。但过度地碱化尿液也会使草酸的重吸收受到抑制,使草酸大量存留在尿中而导致结 石。保持适当的尿酸碱度是必要的。 展开更多

关键词 钠依赖二羧酸转运蛋白 低亲和力 枸橼酸 电生理特性 草酸 大鼠 CDNA基因 爪蟾卵母细胞 双电极电压钳 pH值变化 通道电流 临床实践 钙盐沉积 碱化尿液 尿酸碱度 钠离子 重吸收 异源性 灌流液 浓度 低pH 抑制 底物

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人SDCT2蛋白亚细胞定位信号分析 被引量：1

12

作者 白雪源 侯剀 +3 位作者 陈香美 冯哲 傅博 吴镝 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第10期881-886,共6页

为了确定人高亲和力钠离子依赖性二羧酸共转运蛋白 (high affinitysodium dependentdicarboxylateco transporter,SDCT2 ,NaDC3)在细胞内的定位 ,构建了SDCT2与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合蛋白表达载体 ,并转染肾小管上皮细胞LLC P... 为了确定人高亲和力钠离子依赖性二羧酸共转运蛋白 (high affinitysodium dependentdicarboxylateco transporter,SDCT2 ,NaDC3)在细胞内的定位 ,构建了SDCT2与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合蛋白表达载体 ,并转染肾小管上皮细胞LLC PK1,激光共聚焦显微镜观察显示 ,SDCT2蛋白主要定位于细胞的基底侧膜上 .同时将SDCT2 EGFP融合基因mRNA显微注射到爪蟾卵母细胞中表达 ,可见融合蛋白的绿色荧光仅分布在细胞膜上 .为了进一步确定该蛋白质的亚细胞定位信号序列 ,将SDCT2基因的N端及C端分别缺失 ,并构建缺失突变体与EGFP的融合蛋白表达载体 ,将它们转染到LLC PK1中 ,观察SDCT2缺失体在细胞内的分布情况 .结果显示 ,N端缺失的SDCT2蛋白主要位于细胞质中 ,顶膜和基底侧膜上也有表达 ;C端缺失的SDCT2蛋白主要位于基底侧膜上 ,顶膜几乎没有表达 ,细胞质中表达很少 .免疫组化结果也显示 ,SDCT2只表达于人近端肾小管上皮细胞的基底侧膜 .这表明SDCT2蛋白的N端序列对其亚细胞定位是必需的 ,人SDCT2蛋白的基底膜定位信号位于N端序列中 . 展开更多

关键词 二羧酸共转运蛋白 亚细胞定位 增强型绿色荧光蛋白 肾小管

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EGFP/SDCT1融合蛋白表达、亚细胞定位信号分析、组织分布及电生理功能研究

13

作者 白雪源 陈香美 +4 位作者 冯哲 吴镝 侯剀 程根阳 彭丽霞 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2004年第3期271-278,共8页

从正常人肾中克隆低亲和力钠离子依赖二羧酸共转运蛋白1(sodium-dependentdicarboxylateco-transporter1,SDCT1,NADC1)全长基因,并将其和N端及C端缺失突变的SDCT1基因分别插入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达载体中构建EGFP/SDCT1融... 从正常人肾中克隆低亲和力钠离子依赖二羧酸共转运蛋白1(sodium-dependentdicarboxylateco-transporter1,SDCT1,NADC1)全长基因,并将其和N端及C端缺失突变的SDCT1基因分别插入增强型绿色荧光蛋白基因(EGFP)表达载体中构建EGFP/SDCT1融合蛋白真核表达载体,然后将它们转染到人肾小管上皮细胞HKC中表达并用激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的亚细胞定位情况以确定其定位信号.双重PCR分析证实融合基因已整合到细胞基因组中,Westernblot显示融合基因已在细胞中得到表达.共聚焦显微镜分析显示正常人SDCT1蛋白主要定位于细胞膜上,与生物信息学的预测结果一致,而C端缺失的SDCT1基因转染的细胞,其绿色荧光位于细胞质,N端缺失基因转染的细胞,其绿色荧光主要位于细胞膜上.将体外转录的融合基因mRNA显微注射到爪蟾卵母细胞中表达并用双电极电压钳技术记录细胞跨膜电流,结果在卵细胞膜上测定出了Na+内向电流.免疫组化结果显示SDCT1主要表达于人近端肾小管上皮细胞的管腔侧,而在远端肾小管、集合管、肾间质和肾小球中未见SDCT1的表达.上述研究表明,正常人SDCT1蛋白定位于近端肾小管上皮细胞的管腔侧膜上,SDCT1蛋白的C端部分对于其合成后的迁移及靶向定位是必需的,人SDCT1蛋白的细胞膜定位序列可能位于其C端部分. 展开更多

关键词 融合蛋白 亚细胞 二羧酸共转运蛋白 三羧酸循环 肾小管 组织分布 电生理 生物信息学

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