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蛋白质组分析中蛋白质分步提取方法的建立 被引量:33
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作者 兰彦 钱小红 +4 位作者 王阁 李勇 罗凌 柳正良 贺福初 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第3期415-418,共4页
利用细胞裂解液充分溶解细胞蛋白质是成功进行蛋白质组分析的先决条件 .尝试利用三步提取法 ,即以三种溶解性能不同的裂解液分步提取细胞中的蛋白质组 ,并分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 (two dimensionalpolyacrylamidegelelectrophor... 利用细胞裂解液充分溶解细胞蛋白质是成功进行蛋白质组分析的先决条件 .尝试利用三步提取法 ,即以三种溶解性能不同的裂解液分步提取细胞中的蛋白质组 ,并分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳 (two dimensionalpolyacrylamidegelelectrophoresis,2 DPAGE)分离 .通过对 2 DPAGE蛋白质图谱的比较 ,发现其与常规方法相比 ,具有蛋白质提取率高、双向电泳 (two dimensionalelectrophoresis,2 DE)分辨率高等优点 . 展开更多
关键词 分步提取 蛋白质组 二维丙烯酰胺凝胶电泳
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Plant Proteomics in the Post-genomic Era 被引量:12
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作者 郭奕明 沈世华 +1 位作者 荆玉祥 匡廷云 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2002年第6期631-641,共11页
Proteomics is one of the most active research fields in the post-genomic era. Here we briefly introduce the scientific background of the origination of proteomics and its content, research method. The new developments... Proteomics is one of the most active research fields in the post-genomic era. Here we briefly introduce the scientific background of the origination of proteomics and its content, research method. The new developments of proteomics at the levels of individual plants, tissues, organs and organells, as well as its applications in the area of plant genetic diversity, mutant characterization, and plant physiology, etc are reviewed. At last, the challenge and prospect of proteomics are discussed. 展开更多
关键词 genome post-genome PROTEOME plant proteomics matrix-assisted laser-desorption/ionizationtime-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF/MS) two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis (2D-PAGE)
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CCl_4大鼠肝纤维化形成与消减过程中肝组织蛋白质组的动态变化及扶正化瘀方的干预作用 被引量:8
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作者 刘莺 刘平 徐列明 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第3期146-148,共3页
目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子。方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化... 目的:通过大鼠纤维化肝组织高亲水性蛋白质分子差异展示及扶正化瘀方干预作用,寻找与扶正化瘀方治疗肝纤维化相关的蛋白质分子。方法:通过皮下注射大鼠CCl4,分别持续4、8、12周,对大鼠肝纤维化过程进行动态观察,并在不同时期进行扶正化瘀方干预,治疗从第12周始至16周止。采用蛋白质分步抽提方法,提取肝组织蛋白质,分别进行二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DE)分离、凝胶银染,显示各组蛋白质分子的差异表达的蛋白质分子。结果:在各组银染凝胶图谱上,可辨识的蛋白质斑点达1000~1400个左右,蛋白质表达中除有肝组织看家蛋白质,模型组也有特异蛋白质表达,且在不同时期蛋白质分子表达也有差异,特异表达蛋白质分子为100至300多个不等,在不同阶段表达是不相同的,经质谱鉴定确定了有几类功能不同的蛋白质分子。结论:扶正化瘀方抗肝纤维化作用机制是多方面的,其干预作用与多种蛋白质分子相关。 展开更多
关键词 扶正化瘀方 干预作用 CCl4 组织蛋白质组 肝纤维化形成 大鼠 动态变化 二维丙烯酰胺凝胶电泳 亲水性蛋白质分子 蛋白质表达 消减 纤维化肝组织 肝纤维化过程 不同时期 抗肝纤维化 差异展示 皮下注射 动态观察 抽提方法
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Comparative proteomics analysis of human gastric cancer 被引量:8
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作者 Wei Li Jian-Fang Li Ying Qu Xue-Hua Chen Jian-Min Qin Qin-Long Gu Min Yan Zheng-Gang Zhu Bing-Ya liu 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS CSCD 2008年第37期5657-5664,共8页
AIM: To isolate and identify differentially expressed proteins between cancer and normal tissues of gastric cancer by two-dimensional electrophoresis (2-DE) and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flig... AIM: To isolate and identify differentially expressed proteins between cancer and normal tissues of gastric cancer by two-dimensional electrophoresis (2-DE) and matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry (MALDI-TOF-MS). METHODS: Soluble fraction proteins of gastric cancer tissues and paired normal tissues were separated by 2-DE. The differentially expressed proteins were selected and identified by MALDI-TOF-MS and database search. RESULTS: 2-DE profiles with high resolution and reproducibility were obtained. Twenty-three protein spots were excised from sliver staining gel and digested in gel by trypsin, in which fifteen protein spots were identified successfully. Among the identified proteins, there were ten over-expressed and five under-expressed proteins in stomach cancer tissues compared with normal tissues. CONCLUSION: In this study, the well-resolved, reproducible 2-DE patterns of human gastric cancer tissue and paired normal tissue were established and optimized and certain differentially-expressed proteins were identified. The combined use of 2-DE and MS provides an effective approach to screen for potential tumor markers. 展开更多
关键词 PROTEOME Two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis Mass spectrometry Gastric cancer Tumor markers
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无核荔枝胚胎发育时期蛋白质图谱分析 被引量:4
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作者 李蕾 彭存智 +1 位作者 李明芳 郑学勤 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期312-317,共6页
通过二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DE)以及计算机辅助的图像分析技术,对荔枝开花后20d的正常与败育胚蛋白质图谱进行了初步分析。结果表明,正常胚总蛋白质斑点数为129,败育胚总蛋白质斑点数为130,其中24个蛋白质点在两种胚中的表达丰度没有... 通过二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2DE)以及计算机辅助的图像分析技术,对荔枝开花后20d的正常与败育胚蛋白质图谱进行了初步分析。结果表明,正常胚总蛋白质斑点数为129,败育胚总蛋白质斑点数为130,其中24个蛋白质点在两种胚中的表达丰度没有明显变化,35个蛋白质点在表达丰度上有明显差异,55%的蛋白则发生了蛋白质缺失、增加以及位置改变等变化。这两种蛋白质组的表达差异说明了胚内蛋白质成分在其败育过程中发生了变化,这些蛋白可能参与了胚败育的调节和控制。 展开更多
关键词 荔枝 胚发育 蛋白质图谱 二维丙烯酰胺凝胶电泳
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2-DE为基础的蛋白质组学方法在乳腺癌实际研究中的运用 被引量:6
6
作者 邓世山 《川北医学院学报》 CAS 2007年第5期494-499,共6页
蛋白质组(proteome)是指一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质。以二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)为基础的蛋白质组学技术,在阐明乳腺癌潜在的发生机制、寻找与诊断、治疗、预后、耐药等有关分子靶标的研究中有非常重... 蛋白质组(proteome)是指一个细胞在特定生理或病理状态下表达的所有种类的蛋白质。以二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)为基础的蛋白质组学技术,在阐明乳腺癌潜在的发生机制、寻找与诊断、治疗、预后、耐药等有关分子靶标的研究中有非常重要的地位。目前常用的样本主要有乳腺癌组织、细胞株、乳头吸出液、细胞间质及血清等,蛋白质组学方法对不同的样本蛋白质进行分离鉴定,在一定范围内对某一样本的总蛋白进行分析,是蛋白质组学方法在实际研究中的应用。不同样本来源蛋白具有不同的功能特性,表现形式也存在差异,反映的病理过程也有所不同。通过对不同来源样本的总蛋白进行分析,可从不同的角度对乳腺癌进行阐述,这在乳腺癌研究中具有重要的意义。 展开更多
关键词 乳腺癌 二维丙烯酰胺凝胶电泳 蛋白质组 发病机制 生物标记
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苯并(a)芘作用下的A549细胞株热休克蛋白70家族多态性表达 被引量:3
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作者 柯磊 徐谦 +3 位作者 杨进波 杨杪 谭皓 邬堂春 《中华劳动卫生职业病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期375-378,共4页
目的 研究不同浓度苯并(a)芘(BaP)作用下A549细胞株热休克蛋白70家族(HSP70)多态性表达规律及其可能的意义。方法 利用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)技术分析A549细胞株中HSP70家族多态性表达。结果 A549细胞接受不同浓度BaP(0.1、1.... 目的 研究不同浓度苯并(a)芘(BaP)作用下A549细胞株热休克蛋白70家族(HSP70)多态性表达规律及其可能的意义。方法 利用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)技术分析A549细胞株中HSP70家族多态性表达。结果 A549细胞接受不同浓度BaP(0.1、1.0、5.0、10.0μmol/L)染毒24、48 h后,随着染毒剂量的逐步增加,HSP70家族中HSP72亚型的表达水平呈现逐渐下降的趋势(染毒24 h后积分光密度值分别为:150.36±26.03、98.57±1.3.34、64.92±15.03、34.65±19.10、32.92.±18.71;染毒48 h后分别为:126.85±17.41、106.19±15.32、73.64±21.02、35.18 ±11.95、16.27±9.35),而HSP73亚型的表达水平在不同浓度BaP染毒作用下无明显变化(染毒24 h后积分光密度值分别为:102.29±21.24、87.71±18.70、71.19±14.08、71.87±15.16、72.78±17.31;染毒48 h后分别为:86.66±16.86、75.67±10.61、66.83±12.63、67.29±10.26、91.37±13.68)。结论BaP对于HSP72表达有抑制作用,并且具有一定的剂量-效应关系,而对HSP73表达未见明显影响。 展开更多
关键词 染毒 A549细胞 表达水平 HSP70 热休克蛋白70 多态性 苯并(A)芘 表达规律 二维丙烯酰胺凝胶电泳 家族
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蛋白组学差异揭示黑曲霉(Aspergillus niger)高产柠檬酸的分子机制 被引量:2
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作者 谢慧 王风清 魏东芝 《中国酿造》 CAS 北大核心 2018年第7期138-144,共7页
黑曲霉(Aspergillus niger)YX-1217是一株典型的柠檬酸高产菌株,基于二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)对黑曲霉YX-1217和退化菌株YX-1217G的胞外分泌蛋白进行比较,同时利用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术比较了两株菌的胞内蛋白差异... 黑曲霉(Aspergillus niger)YX-1217是一株典型的柠檬酸高产菌株,基于二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)对黑曲霉YX-1217和退化菌株YX-1217G的胞外分泌蛋白进行比较,同时利用同位素标记相对和绝对定量(i TRAQ)技术比较了两株菌的胞内蛋白差异,揭示黑曲霉YX-1217高产柠檬酸的分子机制。结果显示,菌株黑曲霉YX-1217G的胞外蛋白数量和浓度均显著低于菌株黑曲霉YX-1217(P<0.05),通过质谱鉴定了6个黑曲霉YX-1217高表达蛋白;利用i TRAQ技术共鉴定到3 553个蛋白,将差异蛋白按照京都基因与基因组百科全书(KEGG)代谢数据库进行分类,发现与柠檬酸生物合成相关的酶在菌株黑曲霉YX-1217中的表达量显著高于退化菌株(P<0.05),这些蛋白的高效表达是菌株黑曲霉YX-1217高产柠檬酸的原因之一,为开发柠檬酸或其他有机酸的高产菌株提供新的思路和观点。 展开更多
关键词 二维丙烯酰胺凝胶电泳 同位素标记相对和绝对定量 蛋白质组学技术 柠檬酸 黑曲霉
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转Bt基因大米与相应亲本大米差异蛋白质组学研究 被引量:1
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作者 程娟献 夏晴 +4 位作者 桑志红 毛劼 王心正 董方霆 何昆 《国际药学研究杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期768-773,共6页
目的利用差异蛋白质组学及生物信息学等技术方法,探讨外源Bt基因的导入对大米表达蛋白质组的影响,深化转基因大米在蛋白质组学方面的研究。方法在转基因大米"华恢1号"和亲本大米"明恢63"样品中提取大米总蛋白,通过... 目的利用差异蛋白质组学及生物信息学等技术方法,探讨外源Bt基因的导入对大米表达蛋白质组的影响,深化转基因大米在蛋白质组学方面的研究。方法在转基因大米"华恢1号"和亲本大米"明恢63"样品中提取大米总蛋白,通过二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D-PAGE)实验方法,得到相应的蛋白质组2D-PAGE谱,再选择差异明显的蛋白质点进行质谱鉴定及生物信息学分析。结果对转Bt(cry1Ab/1Ac)基因大米和亲本大米2D-PAGE图谱的蛋白质点进行了对比匹配,识别出明显的差异蛋白质点28个,以亲本大米为参照,转Bt基因大米相对高表达的18个,相对低表达的10个;选择转基因大米凝胶上的差异蛋白质点进行了质谱鉴定和生物信息学检索,发现差异蛋白质主要参与能量代谢,蛋白质合成、氧化还原和应激响应等生物过程。结论转Bt基因"华恢1号"及其亲本大米"明恢63"表达的蛋白质组存在一定差异,但未发现这些差异蛋白质具有抗营养性和致敏性,也未发现新蛋白和毒蛋白的表达。 展开更多
关键词 转基因大米 差异蛋白质组学 二维丙烯酰胺凝胶电泳 质谱鉴定
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利用双向凝胶电泳技术进行胃癌差异蛋白质组研究 被引量:1
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作者 马波 赵吉生 宋燕 《中国临床医学》 北大核心 2007年第2期191-193,共3页
目的:分离胃癌蛋白质组,找出胃癌组织的差异蛋白质点,为进一步鉴定胃癌的差异蛋白质打下基础。方法:利用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)分离胃癌组和正常胃粘膜对照组总蛋白质,并通... 目的:分离胃癌蛋白质组,找出胃癌组织的差异蛋白质点,为进一步鉴定胃癌的差异蛋白质打下基础。方法:利用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(two-dimensional polyacrylamide gel electrophoresis,2-DE)分离胃癌组和正常胃粘膜对照组总蛋白质,并通过优化的计算机图像分析软件分析电泳图谱。结果:在胃癌组织中点检测共有蛋白质点1 147个,正常胃粘膜组织中点检测共有蛋白质点1 079个,发现两者间共有164个差异蛋白质点,其中41个点仅在胃癌组织中表达,27个点仅在正常胃粘膜中表达,39个点在胃癌组织中高表达,57个点在胃癌组织中低表达。结论:通过优化的双向凝胶电泳和图像分析技术对胃癌蛋白质组进行研究,获得了胃癌蛋白质组与正常对照组的差异蛋白质点。为进一步利用质谱分析技术做差异蛋白质鉴定奠定了基础。 展开更多
关键词 胃癌 差异蛋白组 二维丙烯酰胺凝胶电泳
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稳定性心绞痛患者血清差异蛋白质的初步分析
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作者 范晓卿 周义文 +3 位作者 秦晓林 刘银河 涂植光 何咏婷 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期266-269,共4页
目的初步分析稳定性心绞痛(SAP)患者血清中差异蛋白质的表达。方法收集年龄与性别相匹配的50例SAP初诊患者与50例体检健康者的血清,分别混合血清后去除IgG和清蛋白,进行PAGE并观察去除效率;进行固相pH梯度SDS-PAGE二维凝胶电泳,对凝胶... 目的初步分析稳定性心绞痛(SAP)患者血清中差异蛋白质的表达。方法收集年龄与性别相匹配的50例SAP初诊患者与50例体检健康者的血清,分别混合血清后去除IgG和清蛋白,进行PAGE并观察去除效率;进行固相pH梯度SDS-PAGE二维凝胶电泳,对凝胶进行银染后用Image Master 5.00软件分析;对差异点用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术进行测定。结果去除IgG和清蛋白前后的SDS-PAGE电泳图效果良好,IgG和清蛋白去除率均>80%;分析获得的2个差异点经质谱分析,间-α-胰蛋白酶抑制剂家族重链相关蛋白(inter-α-trypsin inhibitor family heavy-chainrelated protein,IHRP)、锌指蛋白A20(zinc finger protein A20,A20)在SAP患者血清中表达而在健康人血清中无表达。结论IHRP和A20可能在SAP发病机制中起一定作用。 展开更多
关键词 稳定性心绞痛 二维丙烯酰胺凝胶电泳 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱 差异蛋白质
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人胰腺癌组织的差异蛋白质组学研究
12
作者 汪建国 侯令密 +3 位作者 敬保迁 杨正伟 张小明 邓世山 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2011年第11期961-965,共5页
目的探讨胰腺癌的发病机制,寻找与临床诊断及治疗相关的生物学标记或靶标。方法采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术对5例人胰腺癌组织及其癌旁组织的总蛋白进行分离,PDQuest 7.0软件分析获得差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行... 目的探讨胰腺癌的发病机制,寻找与临床诊断及治疗相关的生物学标记或靶标。方法采用二维聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)技术对5例人胰腺癌组织及其癌旁组织的总蛋白进行分离,PDQuest 7.0软件分析获得差异蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对蛋白质点进行鉴定,采用免疫组化染色进一步验证差异表达蛋白。结果共获得10个差异表达蛋白质点。质谱鉴定结果显示,尼克酰胺N-甲基转移酶(NNMT)和铁蛋白在胰腺癌组织中表达明显高于其在癌旁组织中表达(>4倍),而谷胱甘肽S-转移酶、DNA拓扑异构酶、T细胞受体β-链、IKK抑制因子ε1、转胶蛋白、二甲基精氨酸二甲基氨基水解酶1(DDAH1)、半乳糖激酶1、肌球蛋白等在胰腺癌癌旁组织中表达明显高于其在癌组织中表达(>4倍)。免疫组化结果显示,铁蛋白在胰腺癌组织中表达高于癌旁组织,DNA拓扑异构酶、谷胱甘肽S-转移酶、肌球蛋白在癌旁组织中表达高于癌组织。结论以2-DE和MALDI-TOF-MS为基础的蛋白质组学技术是研究肿瘤的一种重要手段,实验得到的差异蛋白可能是潜在诊断胰腺癌的分子标志或控制肿瘤生长的治疗靶点。 展开更多
关键词 胰腺癌 二维丙烯酰胺凝胶电泳技术 质谱 差异表达蛋白 生物学标记物
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中医证候学研究与证候蛋白质组学 被引量:37
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作者 刘为民 姚乃礼 +1 位作者 吴志奎 刘绍能 《中医药学报》 CAS 2003年第3期1-1,共1页
总结近年来中医证候学研究方法 ,提倡将蛋白质组学引入中医证候分类及证候演变规律的研究中 ,用蛋白质差示二维电泳及生物信息学方法 ,从分子流行病学水平着重阐述中医证候分类的分子基础。
关键词 中医证候学 蛋白质组学 生物信息学 二维丙烯酰胺凝胶电泳
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