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题名3种中毒性弧菌融合毒素基因的表达与免疫学性质研究
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作者
李涛
许文超
宿雅彬
马飞
崔奕杰
李华锋
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机构
唐山出入境检验检疫局
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出处
《中国畜牧兽医》
CAS
北大核心
2017年第8期2443-2449,共7页
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基金
河北出入境检验检疫局科技项目(HE2014K034)
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文摘
为构建3种中毒性弧菌多联融合毒素基因及重组表达载体,制备多联融合毒素的血清抗体,本试验采用柔性Linker序列(Gly4Ser)对目的基因进行串联(tdh-vvhA-ctB),构建重组表达质粒pET-22b(+)-TVC并在原核表达载体内进行表达,将表达蛋白纯化后免疫动物制备多联融合毒素血清抗体,利用琼脂扩散试验和酶联免疫吸附试验验证抗体的特异性与敏感性。结果表明,试验成功构建了多联融合毒素重组表达质粒pET-22b(+)-TVC,并在原核表达载体内成功表达,表达量为11.38%,表达蛋白主要为包涵体,少量为可溶性蛋白,基因序列全长2 196bp,编码731个氨基酸,蛋白分子质量为81.7ku,测序结果与设计序列同源性为99.6%。ELISA和琼脂扩散试验表明,融合毒素TVC与3种目标中毒性弧菌均发生反应,与多种非目标菌均不反应。本试验成功构建了多联融合毒素基因的表达质粒并制备了抗血清,为利用重组毒素的方法检测目标毒素,进而建立更广谱的食物中毒菌快速检测方法奠定基础。
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关键词
中毒性弧菌
多联融合毒素
表达
免疫学特性
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Keywords
food-poisoning Vibrios
poly-recombinant toxin
expression
immunological character
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分类号
Q786
[生物学—分子生物学]
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