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恒温隔绝式荧光PCR检测非洲猪瘟病毒核酸方法的建立 被引量:1
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作者 陈雪蓉 徐林 +2 位作者 王远微 汤承 岳华 《中国动物检疫》 CAS 2022年第3期80-84,共5页
恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)是一种简便、快速及可使用于现场检测的荧光PCR方法。本研究采用农业农村部推荐的检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸的荧光定量PCR方法的引物和探针,通过对引物、探针、Taq酶等反应体系的... 恒温隔绝式荧光PCR(iiPCR)是一种简便、快速及可使用于现场检测的荧光PCR方法。本研究采用农业农村部推荐的检测非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)核酸的荧光定量PCR方法的引物和探针,通过对引物、探针、Taq酶等反应体系的优化,建立了基于恒温隔绝式荧光PCR的ASFV检测方法。所建立的方法可特异性检出ASFV核酸,对猪常感染的其他6种病毒核酸进行检测,结果均为阴性;检测下限为2.55 copies/μL,组内和组间变异系数均<2%。100份临床样本的检测结果均与农业农村部推荐的荧光定量PCR方法检测结果一致。综上,本研究建立的ASFV核酸iiPCR检测方法的特异性、稳定性及敏感度与传统荧光定量PCR方法一致,实现了ASFV检测的规范化和现场化,为ASFV的快速检测提供了可靠手段。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 恒温隔绝式荧光pcr 现场检测
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辽宁地区腹泻患者大肠杆菌分离株Ⅱ型不耐热肠毒素的检测及测序分析 被引量:3
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作者 袁超文 江馗语 +1 位作者 张力国 刘文鑫 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期644-650,共7页
目的对辽宁地区人源性腹泻样本中致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)的毒力因子进行检测,掌握产Ⅱ型不耐热肠毒素(Type Ⅱ heat labile enterotoxin,LT-Ⅱ)大肠杆菌在我国北方地区的流行现状并阐明LT-Ⅱ与其他致病因子间的关... 目的对辽宁地区人源性腹泻样本中致病性大肠杆菌(Pathogenic Escherichia coli)的毒力因子进行检测,掌握产Ⅱ型不耐热肠毒素(Type Ⅱ heat labile enterotoxin,LT-Ⅱ)大肠杆菌在我国北方地区的流行现状并阐明LT-Ⅱ与其他致病因子间的关系。方法于2014年3月至2015年3月收集辽宁地区人源性腹泻粪便样品,用麦康凯培养基和生化试验的方法分离出大肠杆菌,并用多重PCR方法对毒力基因(elt-Ⅱ、elt-I、sta、stb、K88、K99等)进行检测,对分离到的LT-Ⅱ阳性大肠杆菌中elt-Ⅱ基因进行测序及分型。结果 354份腹泻样品中共分离到携带有毒力因子的大肠杆菌139株,检出率为39.2%。毒力因子阳性大肠杆菌中,有12株携带elt-Ⅱ(8.6%)基因。在12株携带elt-Ⅱ的大肠杆菌中,2株单独携带elt-Ⅱ,6株携带F1,1株携带K88,1株携带astA,2株携带irp2/astA;测序结果表明12株elt-Ⅱ阳性大肠杆菌中有10株携带elt-Ⅱc1亚型,2株携带elt-Ⅱc4亚型。结论在引起人源性腹泻的毒力因子中有大肠杆菌Ⅱ型不耐热肠毒的存在,且主要以LT-Ⅱc1为主要流行型。 展开更多
关键词 大肠杆菌型不耐热肠毒素 pcr检测 测序分析
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恶性疟原虫FCC—1/HN株EBA—175和HRP─Ⅱ基因片段的体外扩增与克隆 被引量:3
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作者 陈海峰 余新炳 +3 位作者 吕芳丽 刘彦文 方建民 罗树红 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 1998年第3期13-15,共3页
目的构建恶性疟原虫FCC—1/HN株红细胞结合抗原(EBA—175)和富组氨酸蛋白Ⅱ(HRP─Ⅱ)抗原的重组质粒并进行初步鉴定。方法通过聚合酶链反应(PCR)对恶性疟原虫FCC—1/HN株的EBA─175和HRP─Ⅱ基因进行体外扩增,用HindⅢ/BamHI... 目的构建恶性疟原虫FCC—1/HN株红细胞结合抗原(EBA—175)和富组氨酸蛋白Ⅱ(HRP─Ⅱ)抗原的重组质粒并进行初步鉴定。方法通过聚合酶链反应(PCR)对恶性疟原虫FCC—1/HN株的EBA─175和HRP─Ⅱ基因进行体外扩增,用HindⅢ/BamHI和BamHI/EcoRI分别消化扩增产物,定向克隆pcDNA3载体,转化至感受态大肠杆菌TG1,经抗性筛选和快速凝胶电泳鉴定,再经PCR和酶切鉴定。结果从恶性疟原虫FCC—1/HN株基因组DNA中扩增出EBA—175和HRP─Ⅱ两基因片段并定向插入PCDNA3载体构建重组质粒。结论所获重组克隆含有编码恶性疟原虫FCC—1/HN株EBA—175和HRP—Ⅱ的基因片断。 展开更多
关键词 恶性 疟原虫 EBA-175 HRP- 克隆
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中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性的研究 被引量:7
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作者 孙筱放 黎青 +6 位作者 孙逸平 黄艳仪 廖宝平 陈元本 杨泽 M.A.Femandez-Vina P.Stastny 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期270-273,共4页
为探讨中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性,采用PCR/SSO方法,随机选择102名广东籍汉族人进行了HLAⅡ类基因的DNA分型。测定了包括HLA-DRB1,DRB3,DRB5,DQA1,DQB1和DPB1等6个基因... 为探讨中国广东汉族群体HLAⅡ类基因多态性,采用PCR/SSO方法,随机选择102名广东籍汉族人进行了HLAⅡ类基因的DNA分型。测定了包括HLA-DRB1,DRB3,DRB5,DQA1,DQB1和DPB1等6个基因座位的等位基因。结果:共检出23种DRB1,3种DRB3,4种DRB5,8种DQA1,12种DQB1和12种DPB1基因。该人群的HLAⅡ类等位基因多态性的典型性表现在HLA-DRB*1202的不寻常优势和DRB1*02单倍型的结构的高度复杂性。还发现了很高频率的一个近年才被正式命名的DP新型:HLA-DPB1*2101,并且此型具有极不寻常的DRB1*1202-DPB1*2101的连锁不平衡。为分子流行病学研究提供了资料。 展开更多
关键词 HLA类基因 pcr/SSO 分型 基因多态性 群体
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PCR技术在猪圆环病毒2型检测中的应用 被引量:8
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作者 车勇良 王隆柏 +3 位作者 魏宏 周伦江 庄向生 陈少莺 《动物医学进展》 CSCD 2006年第6期78-80,102,共4页
根据猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计并合成了一对引物,以本室分离鉴定的PCV-2为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PCV-2的PCR方法。应用该方法对PCV-2进行基因扩增,获得长度为559 bp的特异性目的DNA片段,而对PRRSV、CSFV、PPV... 根据猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计并合成了一对引物,以本室分离鉴定的PCV-2为模板,筛选最佳反应条件,建立了检测PCV-2的PCR方法。应用该方法对PCV-2进行基因扩增,获得长度为559 bp的特异性目的DNA片段,而对PRRSV、CSFV、PPV等病毒进行同条件检测,结果均为阴性,无交叉反应;敏感性试验表明,该体系可检测到10.8 pg的PCV-2基因组DNA。对2004年-2005年期间送检的81份临床样品进行检测,阳性率为22.2%。表明所建立的PCR技术可用于PCV感染的诊断和流行病学调查。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 聚合酶链式反应 检测
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牛病毒性腹泻病毒基因分型双重RT-PCR方法的建立 被引量:4
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作者 熊浩 季新成 +4 位作者 王克栋 史茜 冉多良 彭武丽 于学辉 《中国动物检疫》 CAS 2013年第4期39-42,共4页
根据GenBank已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因Ⅰ型和Ⅱ型5’端非编码区(5’-UTR)保守序列,设计两对针对基因Ⅰ型和Ⅱ型的特异性引物,经反应条件的优化,建立了在同一反应体系中同时检测BVDV基因Ⅰ型和Ⅱ型的RT-PCR方法。该方法对两个... 根据GenBank已发表的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)基因Ⅰ型和Ⅱ型5’端非编码区(5’-UTR)保守序列,设计两对针对基因Ⅰ型和Ⅱ型的特异性引物,经反应条件的优化,建立了在同一反应体系中同时检测BVDV基因Ⅰ型和Ⅱ型的RT-PCR方法。该方法对两个基因型的病毒检测灵敏度均为2TCID50,只比单重PCR的灵敏度低了10倍。且具有较好的特异性和可重复性。经临床应用验证,该方法可用来对两个基因型的BVDV进行同步分型检测。 展开更多
关键词 牛病毒性腹泻病毒基因I型 牛病毒性腹泻病毒基因II型 双重RT-pcr 共扩增
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副猪嗜血杆菌在感染猪体内的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化 被引量:1
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作者 庞琳琳 赵秋华 +9 位作者 王欣 张俊杰 郭爽 李蓓蓓 刘珂 邵东华 邱亚峰 马志永 袁万哲 魏建超 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2021年第6期62-67,共6页
为了解副猪嗜血杆菌感染猪后的组织分布和排毒情况,应用建立的SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法,分析了副猪嗜血杆菌在猪各组织的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化情况。结果显示:高剂量感染组出现明显的临床症状,且平均体温高于其... 为了解副猪嗜血杆菌感染猪后的组织分布和排毒情况,应用建立的SYBR Green Ⅱ荧光定量PCR检测方法,分析了副猪嗜血杆菌在猪各组织的分布及其在血液、鼻拭子中载量的变化情况。结果显示:高剂量感染组出现明显的临床症状,且平均体温高于其他各组1~2℃;对试验组各组猪内脏组织进行检测发现,副猪嗜血杆菌主要集中在气管、扁桃体、颌下淋巴结、肺等组织中,不同组织器官中的细菌载量也存在着一定的差异;血液中并未检测到副猪嗜血杆菌,但在感染的8~20 d高剂量组鼻拭子中副猪嗜血杆菌的载量显著高于其他组。本文研究了副猪嗜血杆菌感染仔猪后的临床症状和体外排毒情况,为以后副猪嗜血杆菌的防治及致病机理研究奠定一定理论基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 SYBR Green荧光定量pcr 鼻拭子
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