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VPS34蛋白抑制剂PIKⅢ体外广谱抗冠状病毒作用研究
1
作者 于啸洋 矫立敏 +5 位作者 葛晨晨 李嘉琪 尚超 薛书江 金宁一 李霄 《动物医学进展》 北大核心 2023年第8期1-5,共5页
为了寻找有效抗冠状病毒感染的治疗靶点,用CCK-8法和结晶紫法检测VPS34蛋白抑制剂PIKⅢ对细胞的敏感性,通过CCK-8法检测PIKⅢ抗病毒活性,通过病毒滴度及RT-PCR检测PIKⅢ对冠状病毒复制的影响。结果显示,PIKⅢ可以抑制多种冠状病毒对细... 为了寻找有效抗冠状病毒感染的治疗靶点,用CCK-8法和结晶紫法检测VPS34蛋白抑制剂PIKⅢ对细胞的敏感性,通过CCK-8法检测PIKⅢ抗病毒活性,通过病毒滴度及RT-PCR检测PIKⅢ对冠状病毒复制的影响。结果显示,PIKⅢ可以抑制多种冠状病毒对细胞的杀伤作用,提高细胞活性并且减少冠状病毒复制。VPS34蛋白抑制剂PIKⅢ对SARS-CoV-2、PEDV和TGEV 3种冠状病毒感染具有抑制作用,可以减少病毒复制,PIKⅢ可能是一种有效的抗冠状病毒药物。 展开更多
关键词 冠状病毒 自噬 ⅲ型磷脂酰肌醇3-激酶 PIKⅲ 抗病毒药物
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IA型磷脂酰肌醇3-激酶和其下游分子蛋白激酶在大肠癌中的表达研究
2
作者 宋洋 徐正磊 +1 位作者 张茹 王立生 《当代医学》 2011年第21期75-76,共2页
目的探讨IA型磷脂酰肌醇3-激酶和其下游分子蛋白激酶(PI3K/Akt)在大肠癌中的表达情况,为大肠癌基因治疗的研究发现新的靶点。方法将40只小鼠随机分为正常组和大肠癌组,采用细胞免疫荧光标记法对正常组和大肠癌组小鼠的大肠粘膜上皮组织... 目的探讨IA型磷脂酰肌醇3-激酶和其下游分子蛋白激酶(PI3K/Akt)在大肠癌中的表达情况,为大肠癌基因治疗的研究发现新的靶点。方法将40只小鼠随机分为正常组和大肠癌组,采用细胞免疫荧光标记法对正常组和大肠癌组小鼠的大肠粘膜上皮组织的蛋白免疫荧光标记物进行测定。结果正常组20例正常大肠组织中有5例FI<1.0,阳性表达率为75.0%;大肠癌组20例均FI>1.0,阳性表达率为100.0%,且FI均比正常组高。两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。正常组平均FI=1.1±0.3,大肠癌组平均FI=1.4±0.2,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论在大肠癌的发生发展过程中存在PI3K蛋白的异常表达,IA型磷脂酰肌醇3-激酶和其下游分子蛋白激酶(PI3K/Akt)信号通路在大肠癌癌变过程中有重要作用。 展开更多
关键词 IA型磷脂酰肌醇3-激酶 下游分子蛋白激酶 大肠癌
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Ⅲ型磷脂酰肌醇-3激酶复合物调节自噬的研究进展
3
作者 张志民 曾斌 《社区医学杂志》 2015年第3期13-16,共4页
自噬指细胞内的物质通过膜转运方式运输到溶酶体进行降解,是一个多种因子参与的复杂过程。Ⅲ型磷脂酰肌醇-3激酶(classⅢphosphoinositide 3-kinase,PI3KC3)是酵母中Vps34的同源蛋白,通过与多种蛋白结合形成复合物,即PI3KC3复合物,主要... 自噬指细胞内的物质通过膜转运方式运输到溶酶体进行降解,是一个多种因子参与的复杂过程。Ⅲ型磷脂酰肌醇-3激酶(classⅢphosphoinositide 3-kinase,PI3KC3)是酵母中Vps34的同源蛋白,通过与多种蛋白结合形成复合物,即PI3KC3复合物,主要用于调节自噬。 展开更多
关键词 ⅲ型磷脂酰肌醇-3激酶 自噬 同源蛋白 隔离膜
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自噬基因pULK、PI3KC3在非小细胞肺癌中的表达及相关性研究 被引量：9
4
作者 吴楠 闵鹤鸣 +1 位作者 屈惠莹 包翠芬 《天津医药》 CAS 2015年第6期635-638,I0002,共5页
目的：探讨自噬基因pULK、PI3KC3在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及相关性。方法随机抽取NSCLC患者（肺癌组）77例（鳞癌31例、腺癌31例、大细胞未分化癌15例）及其癌旁正常组织21例作为对照。采用免疫组织化学染色及免疫印迹方法定性... 目的：探讨自噬基因pULK、PI3KC3在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及相关性。方法随机抽取NSCLC患者（肺癌组）77例（鳞癌31例、腺癌31例、大细胞未分化癌15例）及其癌旁正常组织21例作为对照。采用免疫组织化学染色及免疫印迹方法定性、定量检测pULK、PI3KC3在NSCLC和癌旁正常肺组织中的表达情况，并采用SPSS 13.0统计软件进行病理因素及相关性分析。结果免疫组化结果显示pULK和PI3KC3阳性表达定位于细胞质。pULK和PI3KC3在肺癌组中的阳性表达（35.1%、40.3%）显著低于癌旁正常肺组织（81.0%、76.2%，P＜0.01）。NSCLC中无淋巴结转移、TNM分期的Ⅰ～Ⅱ期和中高分化患者的pULK和PI3KC3蛋白表达阳性率均较高（P＜0.01），而不同年龄、性别、肿瘤直径大小的NSCLC的表达差异无统计学意义。相关性分析显示pULK与PI3KC3表达呈正相关关系。结论 pULK、PI3KC3在NSCLC中呈低表达。其表达与患者的临床分期、分化程度及淋巴结转移有关，而与患者年龄、性别、肿瘤组织学类型及大小无关。 展开更多
关键词 自噬 磷酸转移酶类(醇族体) 癌 非小细胞肺 自噬相关蛋白1 ⅲ型磷脂酰肌醇3激酶
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亮氨酸对增龄小鼠腓肠肌蛋白质合成的影响 被引量：6
5
作者 夏志 赵艳 +4 位作者 尚画雨 叶菊菲 杨力源 熊伟平 苏全生 《北京体育大学学报》 CSSCI 北大核心 2014年第11期79-85,共7页
目的:观察膳食补充亮氨酸对增龄小鼠骨骼肌蛋白质合成的影响并初步探讨其可能性机制。方法:13月龄雄性ICR小鼠据体重随机分为补充亮氨酸、补充丙氨酸以及空白对照组,补充亮氨酸和补充丙氨酸组分别在饲料中给予亮氨酸(5%)和丙氨酸(3.4%)... 目的:观察膳食补充亮氨酸对增龄小鼠骨骼肌蛋白质合成的影响并初步探讨其可能性机制。方法:13月龄雄性ICR小鼠据体重随机分为补充亮氨酸、补充丙氨酸以及空白对照组,补充亮氨酸和补充丙氨酸组分别在饲料中给予亮氨酸(5%)和丙氨酸(3.4%)添加8周,空白对照组则进食普通维持饲料。末次给食后禁食17 h并处死小鼠,用血糖仪检测血糖;ELISA检测血清胰岛素;HE染色观察腓肠白肌肌纤维适应性变化;Western blotting检测PI3K III(m VPS34)与MHCⅡ蛋白表达及m TOR、p70S6K、4E-BP1磷酸化率。结果:添加亮氨酸并未显著影响小鼠体重与采食量,且未致胰岛素与血糖水平变化不显著。腓肠白肌湿重、湿重/体重比值、肌纤维横截面积与直径表现出增大的趋势,但变化并不显著。但肌肉蛋白总量、m VPS34与MHCⅡ的蛋白表达及m TOR、p70S6K、4E-BP1磷酸化率均显著增加。结论:5%比例亮氨酸具有促进骨骼肌蛋白质合成并减缓老年前期小鼠肌肉的萎缩的潜力,其机制可能涉及肌细胞内PI3K III(m VPS34)/m TOR/p70S6K信号通路的活化。 展开更多
关键词 亮氨酸 蛋白质合成 肌肉萎缩 ⅲ型磷脂酰肌醇(-3)激酶 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白
原文传递
针刺通过PI3K-Ⅲ/Beclin-1通路抑制脑缺血-再灌注损伤大鼠的细胞凋亡 被引量：2
6
作者 江姗姗 吕倩忆 +5 位作者 唐红 汪红娟 王瑶 谢灿明 陈楚淘 田浩梅 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2023年第2期179-186,共8页
目的:利用大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)法制备大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,研究针刺对CIRI模型大鼠脑组织中Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K-Ⅲ)/Beclin-1通路的影响。方法:利用MCAO/R方法制备SD大鼠CIRI模型,分别给予针刺和(或)自... 目的:利用大脑中动脉闭塞/再灌注(MCAO/R)法制备大鼠脑缺血再灌注损伤(CIRI)模型,研究针刺对CIRI模型大鼠脑组织中Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K-Ⅲ)/Beclin-1通路的影响。方法:利用MCAO/R方法制备SD大鼠CIRI模型,分别给予针刺和(或)自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)进行治疗。利用采用Garcia评分法检测大鼠神经功能,TTC染色法检测大鼠脑梗死面积,Western Blot法检测海马组织PI3K-Ⅲ、Beclin-1和B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)蛋白的表达水平,TUNEL法检测细胞凋亡。结果:MCAO/R手术后大鼠神经功能评分降低(P<0.01),TTC染色观察到脑梗死,同时海马区PI3K-Ⅲ、Beclin-1和Bcl-2表达显著下调(P<0.01),脑皮质细胞凋亡增多(P<0.01)。针刺治疗不但提高了大鼠神经功能评分(P<0.01),并且减少了脑梗死面积(P<0.01);同时显著上调了海马组织中PI3K-Ⅲ、Beclin-1和Bcl-2表达(P<0.01),并减少了脑细胞凋亡(P<0.01)。3-MA阻断了针刺的治疗作用,而且使脑损伤更加严重。结论:针刺可改善CIRI大鼠神经功能并减轻神经损伤,其机制可能与激活PI3K-Ⅲ/Beclin-1通路增加细胞自噬并减少细胞凋亡有关。 展开更多
关键词 针刺 脑缺血再灌注损伤 ⅲ型磷脂酰肌醇-3-羟激酶/Beclin-1通路 细胞凋亡 大鼠
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小麦条锈菌Ⅲ型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(PsPik1)的功能分析 被引量：1
7
作者 何付新 张阳 +3 位作者 秦娟 马微 康振生 郭军 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第16期3156-3165,共10页
【目的】克隆小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(Ps Pik1),分析其在小麦条锈菌生长发育与致病过程中的作用。【方法】利用RT-PCR技术克隆Ps Pik1的c DNA序列,采用生物信息学技术分析该基因... 【目的】克隆小麦条锈菌(Puccinia striiformis f.sp.tritici)III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶基因(Ps Pik1),分析其在小麦条锈菌生长发育与致病过程中的作用。【方法】利用RT-PCR技术克隆Ps Pik1的c DNA序列,采用生物信息学技术分析该基因编码蛋白分子特征并构建进化树;运用实时荧光定量PCR技术,选用小麦条锈菌的延伸因子(elongation factor,EF)作为内参,明确该基因在小麦条锈菌夏孢子阶段和侵染小麦后6、12、18、24、36、48 h以及3、5、7、9、11 d共12个发育时期的表达特征;利用病毒介导的基因沉默技术(BSMV-host-induced gene silencing,BSMV-HIGS),分析沉默Ps Pik1后对小麦条锈菌生长发育及致病性的影响。通过传统酶切连接的方法构建重组载体BSMV:γ:Ps Pik1-as,利用体外转录技术获得BSMVα、β与γ3个组分,在小麦二叶一心期接种BSMV:γ:Ps Pik1-as、BSMV:γ:0-as与BSMV:γ:Ta PDS-as。接种病毒后第10天,在小麦第4叶接种条锈菌CYR32,接菌后24、48、120 h分别取样,以检测Ps Pik1的沉默效率和进行组织学观察。样品经染色处理后,统计分析接菌后48 h沉默植株与对照植株中条锈菌菌丝分支数、吸器母细胞数与菌丝长度的差异,及120 h沉默植株与对照植株中条锈菌菌落面积的差异。在接菌后12 d观察条锈病发病情况并照相记录。【结果】Ps Pik1开放阅读框(open reading frame,ORF)全长4 485 bp,编码1 494个氨基酸,具有III型磷脂酰肌醇4-羟基激酶典型的脂激酶特有结构域(LKU)、钙神经传感蛋白(NCS1)结合位点、Hom2结构域和PI3K/PI4K超家族激酶结构域。聚类分析表明,Ps Pik1聚于PI4KIIIβ类群,Ps Pik1与柄锈菌属的Pik1亲缘关系较近,与子囊菌Pik1亲缘关系次之,而与动物及植物的PI4KIIIβ亲缘关系较远。实时荧光定量PCR结果表明,Ps Pik1在接种后6、12、18、24 h呈诱导上调表达趋势,分别为夏孢子时期表达量的2.66、7.04、3.42、2.96倍,其中在12 h其表达� 展开更多
关键词 小麦条锈菌 ⅲ型磷脂酰肌醇4-羟基激酶 实时荧光定量PCR BSMV-HIGS
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核受体结合因子2对自噬起始复合物PI3KC3-C1活性的调节作用
8
作者 李杏 魏佳乐 +2 位作者 汤在明 钟清 留筱厦 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1243-1247,共5页
目的·研究核受体结合因子2(nuclear receptor-binding factor 2,NRBF2)的不同磷酸化水平对Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶复合物Ⅰ(classⅢphosphatidylinositol 3-kinase complexⅠ,PI3KC3-C1)的活性影响,寻找一种活性最高的PI3KC3-C1作... 目的·研究核受体结合因子2(nuclear receptor-binding factor 2,NRBF2)的不同磷酸化水平对Ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶复合物Ⅰ(classⅢphosphatidylinositol 3-kinase complexⅠ,PI3KC3-C1)的活性影响,寻找一种活性最高的PI3KC3-C1作为自噬特异性小分子抑制剂筛选的靶标。方法·首先通过建立体外蛋白纯化体系,分别获得四元不含NRBF2的PI3KC3-C1和五元包含不同磷酸化水平NRBF2的PI3KC3-C1,通过凝胶过滤色谱检测复合物的完整性,然后体外测定纯化的不同PI3KC3-C1的激酶活性差异,观察NRBF2的磷酸化对PI3KC3-C1活性的影响。结果·纯化的PI3KC3-C1具有良好的纯度和产量。包含NRBF2的五元PI3KC3-C1表现出比四元的蛋白复合物更高的激酶活性,其中包含持续去磷酸化NBRF2的PI3KC3-C1具有最高的酶活性。结论·NRBF2确实作为PI3KC3-C1的组分之一稳定存在,NRBF2的存在可提升PI3KC3-C1的激酶活性;包含持续去磷酸化NRBF2的PI3KC3-C1可以作为一种新的自噬调控靶标,用来筛选自噬特异性小分子抑制剂。 展开更多
关键词 核受体结合因子2 ⅲ型磷脂酰肌醇-3-激酶复合物Ⅰ 激酶活性检测 自噬调控
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