以兔抗鸭疫里默氏杆菌(RA)阳性血清对 RA 血清1型 CH-1株表达型 DNA 文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行了原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除,噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp 的插入 DNA 片段。运...以兔抗鸭疫里默氏杆菌(RA)阳性血清对 RA 血清1型 CH-1株表达型 DNA 文库中已通过蓝白斑筛选的一个阳性克隆进行了原位杂交筛选。经过5次免疫筛选后,阳性斑经过体内删除,噬菌粒经酶切分析和序列测定,得到一段4434bp 的插入 DNA 片段。运用 NCBI 的 BLASTN、BLASTP、ORF Finder、Conserved Domains、EMBL 的 FASTA 等程序对该片段中的一个命名为 ORF1689的开放阅读框架进行了全面的生物信息学分析。结果显示ORF1689起始密码子上游存在核糖体结合位点,完整 ORF 含1689bp,编码562个氨基酸,其编码蛋白的理论分子量为59.5kD,等电点为5.82。ORF1689具有 phosphodiest 蛋白家族的保守区域,与丙杆菌属的 Caulobacter sp.K31、鞘氨醇单胞菌(Sphingomonas sp.)、Sphin-gopyxis alaskensis 和 Novosphingobium aromaticivorans 的Ⅰ型磷酸二酯酶基因的氨基酸序列同源性分别为49.283%、38.716%、38.693%和38.313%,表明该基因是一种新的Ⅰ型磷酸二酯酶基因。该研究结果对阐明Ⅰ型磷酸二酯酶的生物学功能和 RA 的生理特性与致病机理提供了理论基础和实验数据。展开更多
目的:建立快速检测保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的离子迁移谱方法。方法:采用离子迁移谱正离子模式检测西地那非、那红地那非...目的:建立快速检测保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的离子迁移谱方法。方法:采用离子迁移谱正离子模式检测西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂,离子源电压为2.5 k V,迁移管电压为7.5 k V,进气口温度和迁移管温度均为180℃。利用所建立方法对20批市售缓解体力疲劳类保健食品进行非法添加筛查,并通过LC-MS进行确认。结果:7种5型磷酸二酯酶抑制剂迁移时间在13.8~16.2 ms之间,检出限为0.05~2μg·m L^(-1)。20批市售样品中13批检出西地那非,2批检出他达拉非,2批同时检出西地那非与他达拉非,与LC-MS检测结果一致。结论:离子迁移谱检测方法快速、灵敏,可以作为缓解体力疲劳类保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的快速初筛方法。展开更多
文摘目的:建立快速检测保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的离子迁移谱方法。方法:采用离子迁移谱正离子模式检测西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂,离子源电压为2.5 k V,迁移管电压为7.5 k V,进气口温度和迁移管温度均为180℃。利用所建立方法对20批市售缓解体力疲劳类保健食品进行非法添加筛查,并通过LC-MS进行确认。结果:7种5型磷酸二酯酶抑制剂迁移时间在13.8~16.2 ms之间,检出限为0.05~2μg·m L^(-1)。20批市售样品中13批检出西地那非,2批检出他达拉非,2批同时检出西地那非与他达拉非,与LC-MS检测结果一致。结论:离子迁移谱检测方法快速、灵敏,可以作为缓解体力疲劳类保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的快速初筛方法。
