【目的】筛选并克隆表达高酶活且具有-定热稳定性的新型普鲁兰酶.【方法】克隆 Turne bacillus/ Zaelu GST4 的普鲁兰酶基因构建重组质粒后转化宿主菌大肠杆菌进行诱导表达,再运用亲和层析进行纯化并分析其酶学性质和结构.【结果】在大...【目的】筛选并克隆表达高酶活且具有-定热稳定性的新型普鲁兰酶.【方法】克隆 Turne bacillus/ Zaelu GST4 的普鲁兰酶基因构建重组质粒后转化宿主菌大肠杆菌进行诱导表达,再运用亲和层析进行纯化并分析其酶学性质和结构.【结果】在大肠杆菌中实现可溶性表达,发酵液上清酶活力达到78 U / m L,粗酶液经纯化后比活力为258 U /mg.重组酶P u l B 最适反应温度和p H 值分别为55曟和5 . 0 ,在较窄的酸性范围内（ 日值4 . 5 -5 . 5 ） 酶活力比较稳定;对普鲁兰糖的Km= （ 1 6 . 2 8 ± 0 . 0 3 ） mg/mL , Vmax =（22. 0 5 ± 0 . 0 2 ） μmol . m i n^-1 . mg^-1.P u l B 的D N A 序列与GenBank数据库里的任何序列都没有同源性,在蛋白质序列上,由基因pulB 编码的氨基酸序列与T.aegyptius的环麦芽糖糊精酶相似性最高,B l a s t X 比对的Identities为54 % Positives 为69 % ,SMART 结构预测分析发现,pulB 具有淀粉酶的结构域.底物特异性分析表明,它可水解普鲁兰糖和支链淀粉生成线性的低聚糖或麦芽三糖.【结论】重组酶pilB是尚未报道的新型普鲁兰酶,它可水解普鲁兰糖和支链淀粉,属栺型普鲁兰酶.展开更多
文摘【目的】筛选并克隆表达高酶活且具有-定热稳定性的新型普鲁兰酶.【方法】克隆 Turne bacillus/ Zaelu GST4 的普鲁兰酶基因构建重组质粒后转化宿主菌大肠杆菌进行诱导表达,再运用亲和层析进行纯化并分析其酶学性质和结构.【结果】在大肠杆菌中实现可溶性表达,发酵液上清酶活力达到78 U / m L,粗酶液经纯化后比活力为258 U /mg.重组酶P u l B 最适反应温度和p H 值分别为55曟和5 . 0 ,在较窄的酸性范围内（ 日值4 . 5 -5 . 5 ） 酶活力比较稳定;对普鲁兰糖的Km= （ 1 6 . 2 8 ± 0 . 0 3 ） mg/mL , Vmax =（22. 0 5 ± 0 . 0 2 ） μmol . m i n^-1 . mg^-1.P u l B 的D N A 序列与GenBank数据库里的任何序列都没有同源性,在蛋白质序列上,由基因pulB 编码的氨基酸序列与T.aegyptius的环麦芽糖糊精酶相似性最高,B l a s t X 比对的Identities为54 % Positives 为69 % ,SMART 结构预测分析发现,pulB 具有淀粉酶的结构域.底物特异性分析表明,它可水解普鲁兰糖和支链淀粉生成线性的低聚糖或麦芽三糖.【结论】重组酶pilB是尚未报道的新型普鲁兰酶,它可水解普鲁兰糖和支链淀粉,属栺型普鲁兰酶.
