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人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶单克隆抗体的制备及鉴定
1
作者 李有强 尹一兵 +3 位作者 胥文春 张云燕 张雪梅 尹楠林 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第20期2001-2004,共4页
目的通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Wes... 目的通过构建人Ⅰ型丙氨酸氨基转移酶(ALT1)的原核表达载体,并用纯化的ALT1重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备有生物活性的单克隆抗体。方法用GST-ALT1融合蛋白作为免疫原,通过杂交瘤技术制备抗ALT1的单克隆抗体,用间接ELISA、Dot-Elisa、Westernblot等方法对抗体的抗原结合特性进行鉴定。结果获得1株能稳定分泌抗ALT1单克隆抗体的细胞株8A9,亚类鉴定这种单抗为IgG2。间接ELISA法测定细胞株腹水抗体的效价为10×105。Dot-ELISA、Western blot显示ALT1单克隆抗体能特异性地识别免疫原。结论成功制备ALT1单克隆抗体。 展开更多
关键词 ⅰ型丙氨酸氨基转移酶 单克隆抗体 制备与鉴定
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人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达
2
作者 涂向东 兰凤华 +1 位作者 朱忠勇 谢飞 《福州总医院学报》 2003年第2期93-94,共2页
关键词 人类 Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶 大肠杆菌 ALTl 基因 肝脏功能 诊断
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人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶表达载体的构建及在大肠杆菌中的表达
3
作者 谢飞 涂向东 +1 位作者 兰风华 朱忠勇 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期273-275,共3页
目的　构建基因工程菌株 ,以获得重组人II型丙氨酸氨基转移酶 (ALT2 )蛋白。方法　逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段 ,插入原核表达载体pET - 2 8a ,构建成融合表达质粒pET2 8 ALT2 ,将其转化大肠杆菌BL2 1DE3,IPTG诱导... 目的　构建基因工程菌株 ,以获得重组人II型丙氨酸氨基转移酶 (ALT2 )蛋白。方法　逆转录PCR法从人肌肉组织总RNA中扩增ALT2基因片段 ,插入原核表达载体pET - 2 8a ,构建成融合表达质粒pET2 8 ALT2 ,将其转化大肠杆菌BL2 1DE3,IPTG诱导表达。SDS PAGE、活力测定、活性染色及westernblot鉴定表达产物。结果　重组质粒pET2 8 ALT2测序和酶切结果与预期完全符合。IPTG诱导后 ,阳性菌体裂解物上清ALT2活性很高 ,PAGE出现一分子量 5 80 0 0蛋白条带 ,可被抗ALT1抗血清识别 ,酶活性染色显示有ALT活性。结论　已成功将ALT2基因克隆到pET 2 8a载体 ,ALT2蛋白得到可溶性高效表达。 展开更多
关键词 人Ⅱ型丙氨酸氨基转移酶 表达载体 构建 大肠杆菌 表达
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