为有效利用现存文献资源,深度剖析和挖掘颠覆性技术的演化脉络与演化特征,为把握科学动向、提升科技竞争力提供支撑,在系统梳理颠覆性技术演化相关研究进展的基础上,融合Web of Science论文、德温特专利索引数据库专利和美国临床试验数...为有效利用现存文献资源,深度剖析和挖掘颠覆性技术的演化脉络与演化特征,为把握科学动向、提升科技竞争力提供支撑,在系统梳理颠覆性技术演化相关研究进展的基础上,融合Web of Science论文、德温特专利索引数据库专利和美国临床试验数据库临床试验等数据源,运用主题识别、深度学习、网络分析、可视化分析等技术,利用专利、论文文献的Word2Vec词向量模型构建结果和LDA主题识别结果,结合临床试验应用范围,研究干细胞治疗技术在“科学发现—技术创新—技术应用”生命周期中的演化脉络与演化特征。实验结果梳理得到干细胞治疗技术发展演化路线图,分为萌芽期、起步期、突变发展期和快速发展期4个阶段,并分别从数据表现、实证技术本身和颠覆性技术3个层面归纳技术发展的滞后性、复合性、突变性、扩张性等4个演化特征,与干细胞治疗技术发展的科学事实以及当前学界对其的基本认识均相符。展开更多
目的:构建最优的基于2A多肽策略的抗CD19嵌合抗原受体表达载体,为后期的B细胞恶性肿瘤临床治疗研究提供基础。方法:通过分子克隆技术构建pGIZ-EF1α-19CAR和4-1BBL表达载体,然后连接到pGIZ-EF1α-19CAR-P2A-4-1BBL表达载体中。将构建的...目的:构建最优的基于2A多肽策略的抗CD19嵌合抗原受体表达载体,为后期的B细胞恶性肿瘤临床治疗研究提供基础。方法:通过分子克隆技术构建pGIZ-EF1α-19CAR和4-1BBL表达载体,然后连接到pGIZ-EF1α-19CAR-P2A-4-1BBL表达载体中。将构建的重组质粒与两种包装质粒(psPAX.2和PMD2.G)共转染293T细胞以制备所需的慢病毒;MACS珠粒分选技术在分选健康人外周血T细胞时,利用antiCD2-antiCD3-antiCD28单克隆抗体磁珠加IL-2 体外扩增培养T 细胞;浓缩后的慢病毒感染 T 细胞,建立CAR-T细胞,利用流式细胞术检测19CAR和4-1BBL的共表达;通过细胞杀伤实验等手段检测CAR-T特异性杀伤细胞的功能。结果:①通过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定构建的pGIPZ-19CAR-P2A-4-1BBL慢病毒表达载体构建成功。②19CAR-P2A-4-1BBL慢病毒转染 293T细胞,制得CAR-T 细胞,并利用流式细胞仪检测阳性细胞百分率,测定 CAR 的表达,流式结果表明CD19-CAR-构建成功,可以在细胞膜表面表达。③制备的病毒溶液感染T细胞。通过19CAR-IRES-4-1BBL和19CAR-P2A-4-1BBL感染T细胞后杀伤能力比较。两者均随效靶比的递增,细胞杀伤力变大,当CAR-T细胞与靶细胞比例达到40 ∶1时,细胞裂解率达到90%左右。两者CAR-T细胞的细胞杀伤能力差异无统计学意义( P >0.05)。结论:本课题成功构建了基于2A肽策略的慢病毒表达载体,通过转染获得所需病毒颗粒,慢病毒颗粒感染磁珠分选的 T细胞获得抗CD19 CAR-T细胞,初步构建了治疗B淋巴细胞白血病的CAR-T技术平台。展开更多
文摘为有效利用现存文献资源,深度剖析和挖掘颠覆性技术的演化脉络与演化特征,为把握科学动向、提升科技竞争力提供支撑,在系统梳理颠覆性技术演化相关研究进展的基础上,融合Web of Science论文、德温特专利索引数据库专利和美国临床试验数据库临床试验等数据源,运用主题识别、深度学习、网络分析、可视化分析等技术,利用专利、论文文献的Word2Vec词向量模型构建结果和LDA主题识别结果,结合临床试验应用范围,研究干细胞治疗技术在“科学发现—技术创新—技术应用”生命周期中的演化脉络与演化特征。实验结果梳理得到干细胞治疗技术发展演化路线图,分为萌芽期、起步期、突变发展期和快速发展期4个阶段,并分别从数据表现、实证技术本身和颠覆性技术3个层面归纳技术发展的滞后性、复合性、突变性、扩张性等4个演化特征,与干细胞治疗技术发展的科学事实以及当前学界对其的基本认识均相符。
文摘目的:构建最优的基于2A多肽策略的抗CD19嵌合抗原受体表达载体,为后期的B细胞恶性肿瘤临床治疗研究提供基础。方法:通过分子克隆技术构建pGIZ-EF1α-19CAR和4-1BBL表达载体,然后连接到pGIZ-EF1α-19CAR-P2A-4-1BBL表达载体中。将构建的重组质粒与两种包装质粒(psPAX.2和PMD2.G)共转染293T细胞以制备所需的慢病毒;MACS珠粒分选技术在分选健康人外周血T细胞时,利用antiCD2-antiCD3-antiCD28单克隆抗体磁珠加IL-2 体外扩增培养T 细胞;浓缩后的慢病毒感染 T 细胞,建立CAR-T细胞,利用流式细胞术检测19CAR和4-1BBL的共表达;通过细胞杀伤实验等手段检测CAR-T特异性杀伤细胞的功能。结果:①通过琼脂糖凝胶电泳和测序鉴定构建的pGIPZ-19CAR-P2A-4-1BBL慢病毒表达载体构建成功。②19CAR-P2A-4-1BBL慢病毒转染 293T细胞,制得CAR-T 细胞,并利用流式细胞仪检测阳性细胞百分率,测定 CAR 的表达,流式结果表明CD19-CAR-构建成功,可以在细胞膜表面表达。③制备的病毒溶液感染T细胞。通过19CAR-IRES-4-1BBL和19CAR-P2A-4-1BBL感染T细胞后杀伤能力比较。两者均随效靶比的递增,细胞杀伤力变大,当CAR-T细胞与靶细胞比例达到40 ∶1时,细胞裂解率达到90%左右。两者CAR-T细胞的细胞杀伤能力差异无统计学意义( P >0.05)。结论:本课题成功构建了基于2A肽策略的慢病毒表达载体,通过转染获得所需病毒颗粒,慢病毒颗粒感染磁珠分选的 T细胞获得抗CD19 CAR-T细胞,初步构建了治疗B淋巴细胞白血病的CAR-T技术平台。
