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ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定
被引量：
1
1
作者
吴静
杨利敏
+2 位作者
施振声
黄立纲
刘文军
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期44-47,共4页
目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测...
目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测fat1的表达,并用间接免疫荧光(IFA)确定其在293T细胞中的定位情况。结果:构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,转染293T细胞后,可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论:成功构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达,为进行fat1的功能研究奠定了基础。
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关键词
ω
-3
多聚
不饱和
脂肪酸
脱氢酶
fat1
人胚肾细胞
下载PDF
职称材料
过表达ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1保护小鼠胚胎成纤维细胞避免凋亡
被引量：
1
2
作者
李芳芳
葛银林
+3 位作者
薛美兰
张金玉
李泉
单虎
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期755-760,共6页
由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱...
由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因(fat-l)cDNA,构建了真核表达载体pEGFPC1-fat-1,将该基因转染入小鼠胚胎成纤维细胞;激发荧光与RT-PCR方法检测转染pEGFPC1-fat-1细胞表达该基因,气相色谱分析显示该转染细胞中ω-6PUFAs/ω-3PUFAs的比例降低;细胞抑制率实验显示转染细胞的MTT吸光值升高(P<0.05);双染法流式细胞仪分析转染细胞凋亡降低,结果表明fat-1基因即使在高浓度ω-6PUFAs的细胞毒作用下,依然能够发挥将ω-6PUFAs脱氢转化为与ω-3PUFAs的生理功能,抑制3T3细胞凋亡,促进细胞生长增殖,实现了较强的细胞保护功能.
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关键词
ω
-3
多聚
不饱和
脂肪酸
脱氢酶
基因表达
胚胎成纤维细胞
细胞凋亡
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职称材料
题名
ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定
被引量：
1
1
作者
吴静
杨利敏
施振声
黄立纲
刘文军
机构
中国农业大学动物医学院临床医学系
中国科学院微生物研究所分子病毒中心
清华大学第一附属医院检验科
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第10期44-47,共4页
基金
中国科学院"百人计划"资助项目
文摘
目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测fat1的表达,并用间接免疫荧光(IFA)确定其在293T细胞中的定位情况。结果:构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,转染293T细胞后,可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论:成功构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达,为进行fat1的功能研究奠定了基础。
关键词
ω
-3
多聚
不饱和
脂肪酸
脱氢酶
fat1
人胚肾细胞
Keywords
ω
-
3
fatty acid desaturase fatl gene Western blot IFA Human kidney 29
3
T cells
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
过表达ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1保护小鼠胚胎成纤维细胞避免凋亡
被引量：
1
2
作者
李芳芳
葛银林
薛美兰
张金玉
李泉
单虎
机构
青岛大学医学院生物化学与分子生物学教研室
青岛农业大学动物科技学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第8期755-760,共6页
基金
国家自然科学基金项目(No.30671079)
教育部基金(No.20061065003)~~
文摘
由于膳食原因,人体摄入ω-6PUFAs/ω-3PUFAs比例过高,脂类代谢严重失衡.鉴于ω-3PUFAs获取困难而且人体无催化ω-6PUFAs向ω-3PUFAs转化的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶,本研究体外扩增来源于秀丽线虫(Caenorhabditis elegans)的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因(fat-l)cDNA,构建了真核表达载体pEGFPC1-fat-1,将该基因转染入小鼠胚胎成纤维细胞;激发荧光与RT-PCR方法检测转染pEGFPC1-fat-1细胞表达该基因,气相色谱分析显示该转染细胞中ω-6PUFAs/ω-3PUFAs的比例降低;细胞抑制率实验显示转染细胞的MTT吸光值升高(P<0.05);双染法流式细胞仪分析转染细胞凋亡降低,结果表明fat-1基因即使在高浓度ω-6PUFAs的细胞毒作用下,依然能够发挥将ω-6PUFAs脱氢转化为与ω-3PUFAs的生理功能,抑制3T3细胞凋亡,促进细胞生长增殖,实现了较强的细胞保护功能.
关键词
ω
-3
多聚
不饱和
脂肪酸
脱氢酶
基因表达
胚胎成纤维细胞
细胞凋亡
Keywords
ω
-
3
polyunsaturated fatty acids dehydrogenase
gene expression
embryo fibroblast
cell apoptosis
分类号
Q812 [生物学—生物工程]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定
吴静
杨利敏
施振声
黄立纲
刘文军
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
1
下载PDF
职称材料
2
过表达ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat-1保护小鼠胚胎成纤维细胞避免凋亡
李芳芳
葛银林
薛美兰
张金玉
李泉
单虎
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
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职称材料
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