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植物ω-3脂肪酸去饱和酶的研究进展 被引量:10
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作者 刘训言 孟庆伟 李滨 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第1期34-38,共5页
众多的ω-3脂肪酸去饱和酶是由来源于同一祖先基因的多基因家族的成员编码的,定位于质体或内质网膜上。它们催化十八碳三烯酸(18:3)和十六碳三烯酸(16:3)的生物合成,使脂肪酸形成第三个双键。它们在改变植物膜脂脂肪酸的组成、提高其不... 众多的ω-3脂肪酸去饱和酶是由来源于同一祖先基因的多基因家族的成员编码的,定位于质体或内质网膜上。它们催化十八碳三烯酸(18:3)和十六碳三烯酸(16:3)的生物合成,使脂肪酸形成第三个双键。它们在改变植物膜脂脂肪酸的组成、提高其不饱和度、叶绿体的发育及叶片成熟过程中三烯脂肪酸含量的增加、抗冷性的增强、低温光抑制后光合能力的恢复等方面具有重要作用。近年来,许多植物的ω-3脂肪酸去饱和酶基因已被克隆,并在这些基因的表达调控、遗传转化及转基因植株生理功能研究等方面取得了较大进展。 展开更多
关键词 植物 ω-3脂肪酸去饱和酶 研究进展 膜脂脂肪酸组成 生理功能 低温胁迫
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大豆ω-3脂肪酸脱氢酶基因GmFAD3C在酿酒酵母中的表达 被引量:7
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作者 张洪涛 杨家森 +1 位作者 单雷 毕玉平 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期33-38,共6页
α亚麻酸(ALA)被称为必需脂肪酸,对人体有一系列的保健作用。ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD)催化亚油酸(LA)生成ALA。大豆种子油中ALA含量较高,为了研究大豆ω3FAD的功能,用RTPCR方法从大豆未成熟种子中扩增出GmFAD3C的cDNA,克隆到酵母表达载体p... α亚麻酸(ALA)被称为必需脂肪酸,对人体有一系列的保健作用。ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD)催化亚油酸(LA)生成ALA。大豆种子油中ALA含量较高,为了研究大豆ω3FAD的功能,用RTPCR方法从大豆未成熟种子中扩增出GmFAD3C的cDNA,克隆到酵母表达载体p416中,并用醋酸锂法转化酿酒酵母营养缺陷型K601,经筛选鉴定,得到阳性克隆。气相色谱分析脂肪酸成分,发现工程菌产生了新的脂肪成分ALA,含量占总脂肪酸的3.1%,LA含量与对照相比相应地下降,证明该基因编码的蛋白具有催化18碳多不饱和脂肪酸(PUFA)底物LA在Δ15位脱氢生成ALA的ω3FAD功能,首次实现大豆ω-3脂肪酸脱氢酶基因在酿酒酵母K601p416系统中的表达,建立了一种新的高效低成本的FAD酵母表达系统。 展开更多
关键词 Α-亚麻酸 ω-3脂肪酸脱氢酶 GmFAD3C 酿酒酵母
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ω-3脂肪酸脱氢酶在高、低油大豆品种中的克隆与序列分析 被引量:2
3
作者 刘文浩 李伟 +2 位作者 陈相艳 戴海英 张礼凤 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期569-571,共3页
α-亚麻酸(ALA)被称为必需脂肪酸,对人体有一系列的保健作用。ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD)催化亚油酸(LA)生成ALA。大豆种子中ALA含量较高,为了比较高、低油大豆ω-3FAD的序列差异,用RT-PCR方法从大豆品种鲁豆11和郑9525的未成熟种子中扩增Gm... α-亚麻酸(ALA)被称为必需脂肪酸,对人体有一系列的保健作用。ω-3脂肪酸脱氢酶(FAD)催化亚油酸(LA)生成ALA。大豆种子中ALA含量较高,为了比较高、低油大豆ω-3FAD的序列差异,用RT-PCR方法从大豆品种鲁豆11和郑9525的未成熟种子中扩增GmFAD3C的cDNA,获得的cDNA长度为1174bp,编码380个氨基酸。在推测的氨基酸序列中发现19处差异,为研究GmFAD3C基因在高、低油大豆种质中的差异表达奠定了基础。 展开更多
关键词 大豆 亚麻酸 ω-3脂肪酸脱氢酶 序列差异
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野生蕉ω-3脂肪酸去饱和酶基因FAD7密码子偏性分析 被引量:2
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作者 赖志宸 林玉玲 《福建农业学报》 CAS 北大核心 2017年第5期503-507,共5页
为了解FAD7的密码子使用特性,试验采用CodonW、SPSS19.0、MEGA5.0等软件和EMBOSS在线程序对野生蕉FAD7密码子偏性进行分析,同时与其他单/双子叶植物FAD7和模式生物基因组进行比较。结果显示,野生蕉FAD7密码子偏性水平较弱,密码子组成和... 为了解FAD7的密码子使用特性,试验采用CodonW、SPSS19.0、MEGA5.0等软件和EMBOSS在线程序对野生蕉FAD7密码子偏性进行分析,同时与其他单/双子叶植物FAD7和模式生物基因组进行比较。结果显示,野生蕉FAD7密码子偏性水平较弱,密码子组成和结尾偏好使用G或C,而CUC、CAG和AGG等在该基因中具有较高的使用频率;物种间FAD7比较结果发现,单子叶植物FAD7密码子组成明显偏好G或C,而双子叶植物则完全相反;基于密码子使用频率FAD7聚类结果与CDS分类结果一致,均能将单/双子叶植物区分开来;此外,大肠杆菌原核表达受体系统可作为野生蕉FAD7基因异源表达理想试验体系。研究结果为野生蕉FAD7后续结构和功能研究提供了科学依据。 展开更多
关键词 野生蕉 密码子偏性 ω-3脂肪酸去饱和酶 聚类分析
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高山被孢霉ω-3脂肪酸脱饱和酶基因在麦胚无细胞蛋白质合成系统中的表达 被引量:1
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作者 杨芹 陈海琴 +4 位作者 陈思 顾震南 张灏 陈永泉 陈卫 《生物技术进展》 2016年第5期346-351,F0003,共7页
无细胞蛋白质合成系统具有快速、方便等特点,能表达对活细胞具有一定毒性的膜蛋白和抗菌肽,近年来被广泛应用。以来自产油丝状真菌高山被孢霉多不饱和脂肪酸合成途径中的关键膜结合酶——ω-3脂肪酸脱饱和酶为研究对象,构建了适宜体外... 无细胞蛋白质合成系统具有快速、方便等特点,能表达对活细胞具有一定毒性的膜蛋白和抗菌肽,近年来被广泛应用。以来自产油丝状真菌高山被孢霉多不饱和脂肪酸合成途径中的关键膜结合酶——ω-3脂肪酸脱饱和酶为研究对象,构建了适宜体外表达ω-3脂肪酸脱饱和酶的表达载体p IVEX WG1.4-FADS15,并利用麦胚无细胞蛋白质合成系统实现了对该基因的高效表达。同时,通过在麦胚无细胞蛋白质合成过程中添加脂质体的方法,将所表达的膜蛋白正确定位至脂质体磷脂双分子层,以便目标蛋白质的正确折叠。研究结果显示,在此实验条件下目标蛋白质的表达量达1.8 mg/m L,经碘海醇密度梯度超速离心纯化后,该蛋白质的纯度可以达到90%以上。研究结果为后续对该酶进行催化特性研究和蛋白质晶体结构解析奠定了基础。 展开更多
关键词 高山被孢霉 ω-3脂肪酸脱饱和酶 麦胚无细胞蛋白质合成系统 脂质体 蛋白纯化
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甜高粱FAD7基因的功能分析 被引量:1
6
作者 宋玉双 隋娜 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期35-41,共7页
从甜高粱自交系M81-E中分离并克隆出ω-3脂肪酸去饱和酶FAD7(Fatty acid desaturase)基因,然后构建表达载体侵染拟南芥获得SbFAD7过表达拟南芥的纯合植株,通过测定和分析低温处理条件下野生型和过表达植株的Fo、Fv/Fm、电导率、MDA、超... 从甜高粱自交系M81-E中分离并克隆出ω-3脂肪酸去饱和酶FAD7(Fatty acid desaturase)基因,然后构建表达载体侵染拟南芥获得SbFAD7过表达拟南芥的纯合植株,通过测定和分析低温处理条件下野生型和过表达植株的Fo、Fv/Fm、电导率、MDA、超氧阴离子自由基和过氧化氢含量等指标,初步说明该基因在提高植物抗冷性方面具有重要的作用。 展开更多
关键词 甜高粱 耐冷性 ω-3脂肪酸去饱和酶
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Fat-1基因载体构建及其在家鸡中的体外表达
7
作者 王颖 顾真真 +3 位作者 郭若婷 欧科鹏 刘乙 刘小军 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第4期921-927,共7页
试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体... 试验旨在构建一种适合于家禽体外表达的ω-3脂肪酸脱氢酶Fat-1基因的真核生物表达载体,为后续转基因鸡的生产奠定基础。根据家鸡密码子使用频率,对秀丽隐杆线虫Fat-1基因进行优化改造;将改造后的Fat-1基因(cFat-1)连接至pLL3.7表达载体,构建重组质粒pLL3.7-cFat-1;经PCR、酶切、序列分析等手段对重组质粒进行鉴定;用胰酶消化法培养鸡成纤维细胞,利用TurboFect TM转染试剂将pLL3.7-cFat-1转染体外培养的成纤维细胞;通过RT-PCR检测和绿色荧光观察分析cFat-1基因在细胞中的表达。结果表明cFat-1基因在鸡成纤维细胞中高效转录并表达,成功构建了可在家禽体外表达cFat-1基因的特异性表达载体。本研究首次获得可在家禽体外表达cFat-1基因的转基因细胞系,证实了经基因改造后cFat-1基因可在家禽体外的高效转录和表达,为后续制备富含ω-3脂肪酸的转基因鸡奠定基础。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸脱氢酶 载体构建 成纤维细胞 基因表达 转基因
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骨骼肌特异表达载体的构建与验证
8
作者 于永生 曹阳 +1 位作者 罗晓彤 张树敏 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期14-17,共4页
目的:构建肌肉特异性表达线虫ω-3脂肪酸去饱和酶的肌肉特异性载体,证明其表达的有效性。方法:化学合成292bp的带有肌肉特异性转录因子结合位点的DNA序列,然后与线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因cDNA、去除CMV启动子的表达载体pcDNA3.1连接... 目的:构建肌肉特异性表达线虫ω-3脂肪酸去饱和酶的肌肉特异性载体,证明其表达的有效性。方法:化学合成292bp的带有肌肉特异性转录因子结合位点的DNA序列,然后与线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因cDNA、去除CMV启动子的表达载体pcDNA3.1连接构成肌肉特异性表达载体pcDNA3.1-SF,4w龄C57BL/6小鼠肌肉注射该重组载体,RT-PCR检测证明其表达有效性。结果:DNA测序结果证明合成的292 bp片段带有肌肉特异性表达元件;PCR鉴定显示启动子片段正确地插入到目的基因上游;RT-PCR鉴定显示肌肉内ω-3脂肪酸去饱和酶基因得到有效转录。结论:该试验为在转基因动物的肌肉中表达外源基因奠定了基础。 展开更多
关键词 合成启动子 肌肉特异表达载体 - 3 脂肪酸去饱和酶 体外验证
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来源于线虫Caenorhabditis briggssae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因的合成及其功能分析 被引量:9
9
作者 朱贵明 陈宏 +4 位作者 周艳荣 卢建申 吴晓洁 陈红星 邓继先 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期763-771,共9页
ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs... ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3PUFAs)是一类被广泛研究和关注的脂肪酸,对人类及其他哺乳动物的正常发育和保持良好的健康状况极其重要,并且对于人类的多种疾病的预防和治疗亦有着明显的作用。在人和哺乳动物体内,ω-3PUFAs的含量与ω-6PUFAs(其代谢方式和功能与前者不同,通常其作用也相反)相比很低。而对于人体,无论ω-3PUFAs的过低还是ω-6PUFAs的过高都会带来极为不利的影响。所以人们一直在努力寻求提高人体中ω-3PUFAs含量的途径或者大量生产ω-3PUFAs的方法。本研究经过密码子优化后,用化学合成的方法获得了C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1-sFat1-EGFP,通过脂质体转染了CHO细胞系并对其进行抗性筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染sFat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的GC-MS分析表明,sFat1基因完全能够在CHO细胞中表达和发挥其ω-3去饱和酶的作用,即促使ω-6系列不饱和脂肪酸转变为相应的ω-3系列不饱和脂肪酸(从十八碳到二十二碳)。ω-6不饱和脂肪酸总量从48.97%下降到35.29%,而ω-3不饱和脂肪酸总量则相应地从7.86%上升到24.02%。ω-6多不饱和脂肪酸和ω-3多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.23下降到转染细胞中的1.47。这说明C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1的合成是成功的,试验所获得的结果为今后的进一步的研究或应用其大量生产ω-3PUFAs奠定了基础。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸去饱和酶基因 多不饱和脂肪酸 基因合成 脂肪酸分析
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Antisense-Mediated Depletion of Tomato Chloroplast Omega-3 Fatty Acid Desaturase Enhances Thermal Tolerance 被引量:11
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作者 Xun-Yan Liu Jing-Hua Yang +2 位作者 Bin Li Xiu-Mei Yang Qing-Wei Meng 《Journal of Integrative Plant Biology》 SCIE CAS CSCD 2006年第9期1096-1107,共12页
A chloroplast-localized tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) ω-3 fatty acid desaturase gene (LeFADT) was isolated and characterized with regard to its sequence, response to various temperatures, and function in... A chloroplast-localized tomato (Lycopersicon esculentum Mill.) ω-3 fatty acid desaturase gene (LeFADT) was isolated and characterized with regard to its sequence, response to various temperatures, and function in antisense transgenic tomato plants. The deduced amino acid sequence had four histidine-rich regions, of which three regions were highly conserved throughout the whole ω-3 fatty acid desaturasegene family. Southern blotting analysis showed that LeFAD7was encoded by a single copy gene and had two homologous genes in the tomato genome. Northern blot showed that LeFAD7 was expressed in all organs and was especially abundant in leaf tissue. Meanwhile, expression of LeFAD7 was induced by chilling stress (4 ℃), but was inhibited by high temperature (45 ℃), in leaves. Transgenic tomato plants were produced by integration of the antisense LeFAD7DNA under the control of a CaMV35S promoter into the genome. Antisense transgenic plants with lower 18 : 3 content could maintain a higher maximal photochemical efficiency (Fv/Fm) and O2 evolution rate than wild-type plants. These results suggested that silence of the LeFAD7 gene alleviated high-temperature stress. There was also a correlation between the low content of 18 : 3 resulting from silence of the LeFAD7 gene and tolerance to high-temperature stress. 展开更多
关键词 chloroplast-localized ω-3 fatty acid desaturase gene expression thermal tolerance tomato (Lycopersicon esculentum) tomato transformation
原文传递
应用PCR-酶切连接法合成全长sFat1基因 被引量:7
11
作者 朱贵明 陈宏 +4 位作者 卢建申 周艳荣 吴晓洁 陈红星 邓继先 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2006年第9期1123-1128,共6页
人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的... 人工合成基因在生命科学研究中有着重要的意义,因此基因合成是一项常用技术。长片段基因的合成比较困难,常常因为合成中碱基序列的错配、突变等原因而导致失败。研究者们所熟知的几种现行的方法仍然难以解决该问题。本研究在作者自身的工作经验中建立了一种新的基因合成方法,即PCR-酶切连接法。应用该方法成功地将化学合成的27个寡聚核苷酸片段(每个片段长60~68bp)拼接组装起来,获得了完整的总长为1226bp的基因sFat-1。整个过程仅采用3轮PCR(共7个反应)、2轮的酶切连接(3个反应),而且未曾出现任何偏离预期基因序列的差错。该方法步骤较少,技术简单,出错极少,是合成长基因序列很好的选择。 展开更多
关键词 基因合成 聚合酶链式反应 ω-3脂肪酸去饱和酶基因
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富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪制备的关键技术研究 被引量:4
12
作者 潘登科 陈红星 +2 位作者 冯书堂 李奎 邓继先 《中国畜牧兽医》 CAS 2007年第5期22-25,共4页
作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基... 作者综述了制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪的研究意义和国内外的研究现状,并介绍了自己的研究进展。用化学合成的方法获得了Cbriggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因sFat-1,并构建了哺乳动物细胞表达载体。通过显微注射的方法制备了转基因小鼠,sFat-1基因能够在转基因小鼠中产生更多更长链的而且更有价值的DHA以及DPA。在确认sFat-1基因功能的基础上,将载体转染到猪胎儿成纤维细胞,利用阳性的细胞克隆通过核移植方式制备富含ω-3多不饱和脂肪酸克隆猪。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸去饱和酶基因 多不饱和脂肪酸 sFat1 转基因小鼠 克隆猪
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麻疯树FAD3基因的克隆及亚细胞定位研究 被引量:3
13
作者 付瑜华 陈新 王文泉 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2012年第11期2030-2034,共5页
为研究麻疯树JcFAD3的亚细胞定位,本实验从麻疯树叶片中克隆了JcFAD3基因,将其与绿色荧光蛋白基因融合构建植物表达载体。利用基因枪转化的方法将重组载体转入到洋葱表皮细胞中进行瞬时表达,通过检测融合蛋白在洋葱内表皮细胞中的分布来... 为研究麻疯树JcFAD3的亚细胞定位,本实验从麻疯树叶片中克隆了JcFAD3基因,将其与绿色荧光蛋白基因融合构建植物表达载体。利用基因枪转化的方法将重组载体转入到洋葱表皮细胞中进行瞬时表达,通过检测融合蛋白在洋葱内表皮细胞中的分布来对JcFAD3基因进行亚细胞定位,荧光显微镜检测结果表明,JcFAD3基因表达产物定位于细胞质中。 展开更多
关键词 麻疯树微粒体ω-3脂肪酸去饱和酶 绿色荧光蛋白 亚细胞定位
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莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中的表达与活性分析 被引量:3
14
作者 牛丽红 耿丽丽 +2 位作者 张蕊 孙长坡 张杰 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期96-101,共6页
采用RT-PCR方法克隆到莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因lyd15,与毕赤酵母表达载体pPIC3.5K连接,电击法转化毕赤酵母GS115。转化子经高浓度G418筛选出高抗性重组子,经PCR鉴定目的基因已整合入毕赤酵母基因组中。甲醇诱导表达,RT-PCR检测表... 采用RT-PCR方法克隆到莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因lyd15,与毕赤酵母表达载体pPIC3.5K连接,电击法转化毕赤酵母GS115。转化子经高浓度G418筛选出高抗性重组子,经PCR鉴定目的基因已整合入毕赤酵母基因组中。甲醇诱导表达,RT-PCR检测表明莱茵衣藻ω-3脂肪酸脱氢酶基因在毕赤酵母中得到了表达;毕赤酵母总脂肪酸甲酯经气相色谱(GC)分析结果显示亚油酸的含量明显降低,而α-亚麻酸的含量有所提高。 展开更多
关键词 莱茵衣藻 ω-3脂肪酸脱氢酶 Α-亚麻酸 毕赤酵母
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ω-3脂肪酸脱氢酶基因Fat-1的真核表达载体构建与表达 被引量:1
15
作者 战丽萍 刘军 +2 位作者 郑聪颖 张博伟 张涌 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期18-23,共6页
培养线虫(Caenorhabditis elegans),提取RNA并通过PT-PCR获得其ω-3脂肪酸脱氢酶基因Fat-1,整合入真核表达载体,构建了哺乳动物细胞表达载体pFat-IRES2-GFP,转染牛胎儿成纤维细胞系并对其进行G418筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染Fa... 培养线虫(Caenorhabditis elegans),提取RNA并通过PT-PCR获得其ω-3脂肪酸脱氢酶基因Fat-1,整合入真核表达载体,构建了哺乳动物细胞表达载体pFat-IRES2-GFP,转染牛胎儿成纤维细胞系并对其进行G418筛选获得稳定转染细胞株。对稳定转染Fat-1细胞株的RT-PCR分析及脂肪酸组成的HPLC分析结果表明,Fat-1基因已经整合入牛基因组中,并能够表达和发挥其ω-3脂肪酸脱氢酶的作用,促使-ω6PUFAs转变为相应的-ω3 PUFAs。ω-6脂肪酸总量从35.60%下降到25.47%,-ω3 PUFAs总量从5.75%上升到12.33%,多不饱和脂肪酸的比值从正常细胞中的6.19下降到阳性细胞中的2.07,说明Fat-1基因整合是成功的,能够在细胞中以相应的-ω6 PUFAs为底物合成-ω3 PUFAs。 展开更多
关键词 ω-3脂肪酸脱氢酶 不饱和脂肪酸 真核表达载体 牛胎儿成纤维细胞
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Mistic融合蛋白促进ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在大肠埃希菌中高效表达 被引量:1
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作者 赵艳 柳欣欣 +3 位作者 王大新 李湘鸣 陈平 王昊 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第16期2190-2193,共4页
目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化... 目的构建真核膜蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因在大肠埃希菌中的高效表达质粒。方法利用分子克隆技术构建携带Fat-1基因的重组原核表达质粒pET32a-Fat-1和插入膜蛋白表达分子伴侣Mistic基因的pET32a-Mistic-Fat-1;将两种重组质粒转化大肠埃希菌株BL21(DE3),IPTG诱导表达Fat-1蛋白和M110-Fat-1蛋白,通过十二烷基-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)灰度分析其表达量,蛋白免疫印迹法(Western blot)进一步鉴定蛋白表达。结果经酶切鉴定和测序证实成功构建了pET32a-Fat-1和pET32a-Mistic-Fat-1原核表达载体;SDS-PAGE和Western blot证实ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1在原核表达系统中没有明显诱导表达,而M110-Fat-1融合蛋白在大肠埃希菌中获得了高效表达,占全细胞蛋白总量的15%。结论ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因与Mistic基因融合表达,实现了在原核宿主中高效表达真核膜整合蛋白ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1。 展开更多
关键词 Mistic ω-3脂肪酸去饱和酶Fat-1基因 膜蛋白 高效表达
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ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶的真核表达及鉴定 被引量:1
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作者 吴静 杨利敏 +2 位作者 施振声 黄立纲 刘文军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第10期44-47,共4页
目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测... 目的:构建ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶真核表达载体,并在293T细胞(人胚肾细胞)中实现表达。方法:通过RT-PCR法扩增得到ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶基因fat1,构建重组真核表达载体pCMV-Myc-fat1,用脂质体法转染293T细胞,Western blot检测fat1的表达,并用间接免疫荧光(IFA)确定其在293T细胞中的定位情况。结果:构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,转染293T细胞后,可检测到细胞内有fat1的表达并确定其在细胞中的位置。结论:成功构建真核表达质粒pCMV-Myc-fat1,可检测出细胞内有fat1的表达并确定其在细胞膜和细胞质内均有表达,为进行fat1的功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ω-3多聚不饱和脂肪酸脱氢酶 fat1 人胚肾细胞
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牛胎儿成纤维细胞的分离培养及转染线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因 被引量:1
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作者 于永生 罗晓彤 +1 位作者 张立春 朴庆林 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2011年第23期12-16,共5页
为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导... 为利用核移植法获取转基因克隆牛提供供体细胞,体外分离培养牛胎儿成纤维细胞并进行了携带线虫ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA的表达载体转染。首先采用组织块贴壁法分离培养牛胎儿成纤维细胞,线虫ω-3脂肪酸去饱和酶基因表达载体以脂质法介导转染牛胎儿成纤维细胞,通过G418筛选获得稳定转染的细胞克隆,PCR鉴定外源基因在细胞基因组中的整合,对阳性克隆进行传代2~3次后利用RT-PCR检测外源基因的转录。结果表明,组织块贴壁后7天可获取原代成纤维细胞,基因转染后利用G418筛选9天即可获得转基因细胞,对转基因细胞进行传代,PCR检测显示CMV启动子和ω-3脂肪酸去饱和酶cDNA整合到细胞基因组中,RT-PCR检测显示ω-3脂肪酸去饱和酶mRNA在转基因传代细胞中得到有效转录,为下一步通过核移植方法获得转基因肉牛提供了基础。 展开更多
关键词 牛胎儿成纤维细胞 线虫ω-3脂肪酸去饱和酶 基因转染 脂质体
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表达sFat-1基因慢病毒载体的构建及病毒生产
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作者 朱贵明 陈宏 +2 位作者 高强 陈红星 邓继先 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2007年第6期6-10,共5页
为了建立有效地用于转基因动物生产的慢病毒表达系统,以线虫C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)为目的基因构建了慢病毒表达载体,通过与慢病毒包装载体PLP1、PLP2和PLP/VSVG一起共转染293FT细胞系生产了慢病毒颗粒,并对其感染... 为了建立有效地用于转基因动物生产的慢病毒表达系统,以线虫C.briggsae的ω-3脂肪酸去饱和酶基因(sFat-1)为目的基因构建了慢病毒表达载体,通过与慢病毒包装载体PLP1、PLP2和PLP/VSVG一起共转染293FT细胞系生产了慢病毒颗粒,并对其感染哺乳动物细胞NIH3T3细胞系的能力进行了检测。结果表明,该系统所生产的病毒滴度约为5.0×106TU/mL,这种病毒能够感染哺乳动物细胞,说明构建的慢病毒表达系统是有效的,应用其可以生产感染力良好的慢病毒颗粒,并高效地进行sFat-1基因转移。 展开更多
关键词 慢病毒载体 转基因 基因表达 ω-3脂肪酸去饱和酶基因
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麻疯树叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶的BIBAC文库筛选及其生物信息学分析
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作者 付瑜华 夏志强 +1 位作者 王海燕 王文泉 《中国农学通报》 CSCD 2012年第31期21-28,共8页
旨在建立麻疯树BIBAC文库筛选目的基因快捷高效的方法,并对其克隆的叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因进行生物信息学分析。本研究利用高密度杂交膜从麻疯树BIBAC文库中筛选到含有叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因的克隆,对其测序并用生物信息... 旨在建立麻疯树BIBAC文库筛选目的基因快捷高效的方法,并对其克隆的叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因进行生物信息学分析。本研究利用高密度杂交膜从麻疯树BIBAC文库中筛选到含有叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因的克隆,对其测序并用生物信息软件对获得全长序列及编码的蛋白质序列的特性进行分析。将筛选到的阳性克隆进行测序,并将该序列与麻疯树叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因进行比对,相似性达到99%,证实此克隆为含叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因(JcFAD7)的BIBAC克隆。麻疯树叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶基因长度为2655bp,含有8个外显子和7个内含子,编码525个氨基酸。该基因编码的蛋白质为不具有信号肽的亲水性蛋白,二级结构元件多为α-螺旋和无规则卷曲,含有2个大的跨膜区域,在麻疯树中为单拷贝。本研究建立了高密度杂交膜从BIBAC文库中筛选目的基因快速高效的方法,同时也验证了该方法的可行性并对克隆到的基因进行了生物信息学分析。 展开更多
关键词 叶绿体ω-3脂肪酸去饱和酶 高密度杂交膜 SOUTHERN杂交 生物信息学
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