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代谢工程改造热带假丝酵母高效合成中链ω-羟基脂肪酸 被引量:2
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作者 王世杰 张海冰 +4 位作者 沈微 杨海泉 夏媛媛 曹钰 陈献忠 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期77-89,共13页
【目的】ω-羟基脂肪酸(ω-hydroxyfatty acid,ω-HFAs)是一种绿色安全无毒,具有良好生物相容性的理想生物降解材料,广泛应用于化工、食品、药学等方面,微生物发酵法生产ω-羟基脂肪酸具有重要的研究意义和应用前景。【方法】为了得到... 【目的】ω-羟基脂肪酸(ω-hydroxyfatty acid,ω-HFAs)是一种绿色安全无毒,具有良好生物相容性的理想生物降解材料,广泛应用于化工、食品、药学等方面,微生物发酵法生产ω-羟基脂肪酸具有重要的研究意义和应用前景。【方法】为了得到高产ω-羟基脂肪酸的代谢工程菌株,通过同源重组技术,连续敲除二倍体热带假丝酵母β-氧化途径中酰基辅酶A氧化酶基因(ACO)的同工酶POX基因,考察基因缺失对细胞生长以及合成ω-羟基脂肪酸能力的影响。【结果】基于脂肪醇氧化酶(FAO)基因缺陷菌株,成功构建了重组菌株F4PT(ΔPOX4,ΔPOX5),在碳源为葡萄糖的培养基中,重组菌株出现生长减缓,但在碳源为脂肪酸甲酯(C12–C14)的培养基中生长明显减缓,说明删除POX4、POX5基因使脂肪酸甲酯的代谢能力降低,其次通过摇瓶发酵实验,12-羟基十二酸和14-羟基十四酸的产量分别为3.01 g/L和8.69 g/L,转化率分别为11.44%和33.14%,达到积累ω-羟基脂肪酸的目的,并且代谢十四酸甲酯的能力是明显强于代谢十二酸甲酯。【结论】FAO、POX基因双缺失的热带假丝酵母可以明显积累ω-羟基脂肪酸,不同碳链的积累效率有差异,其中14-羟基十四酸的产量及转化率更高,重组菌株有定向转化十四酸甲酯为14-羟基十四酸的潜能。 展开更多
关键词 热带假丝酵母 β-氧化 ω-氧化 ω-羟基脂肪酸 精细化工品
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代谢工程改造大肠杆菌利用脂肪酸合成己二酸 被引量:1
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作者 李洋 闫亚楠 +4 位作者 赵春雷 郭亮 高聪 刘立明 陈修来 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期16-28,共13页
己二酸作为生产尼龙、化纤和工程塑料等聚合物的单体,在食品、医药、塑料和化工行业具有广泛的应用。目前,己二酸的生物合成主要利用可食用原料,碳原子损失较多,造成己二酸产率较低。为解决上述问题,设计和重构以脂肪酸为原料的己二酸... 己二酸作为生产尼龙、化纤和工程塑料等聚合物的单体,在食品、医药、塑料和化工行业具有广泛的应用。目前,己二酸的生物合成主要利用可食用原料,碳原子损失较多,造成己二酸产率较低。为解决上述问题,设计和重构以脂肪酸为原料的己二酸合成新路径,提高己二酸的理论得率;其次,强化本源的β-氧化路径和引入异源的ω-氧化路径;增强细胞对脂肪酸的利用能力;再次,借助系统代谢工程策略,进一步优化己二酸合成路径。最后,经发酵条件优化,最优工程菌Escherichia coli AA0304能够产生1.32 g/L己二酸。上述研究结果为利用废弃脂肪酸类化合物生产高价值化学品奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 代谢工程 β-氧化路径 ω-氧化路径 棕榈酸 大肠杆菌 己二酸
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有氧运动联合黑果枸杞色素补充对非酒精性脂肪肝病小鼠肝脏脂肪酸氧化功能的干预效果 被引量:7
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作者 陈伊琳 谢军 +3 位作者 陈嘉勤 朱彦 陈锐 屈红林 《中国运动医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第3期201-210,共10页
目的:观察7周有氧运动联合黑果枸杞色素补充对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂肪酸氧化相关因子表达、线粒体氧化速率及抗氧化能力的影响,探讨有氧运动和补充黑果枸杞色素在NAFLD良性转归中的干预作用、交互效应及可能机制。方法:3周... 目的:观察7周有氧运动联合黑果枸杞色素补充对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)小鼠肝脏脂肪酸氧化相关因子表达、线粒体氧化速率及抗氧化能力的影响,探讨有氧运动和补充黑果枸杞色素在NAFLD良性转归中的干预作用、交互效应及可能机制。方法:3周龄KM种雄性小鼠48只,随机分为空白组(n=8)和高糖高脂组(n=40)。高糖高脂组采用高糖高脂膳食灌服7周建立NAFLD模型。建模成功后,随机分为模型组(MX组)、有氧运动组(E组)、黑果枸杞色素组(C组)和有氧运动联合黑果枸杞色素组(EC组),E、EC组的有氧运动干预采用中等强度跑台运动,坡度0°,速度12 m/min,时间60 min,每周6次,共7周。C、EC组每日补充黑果枸杞色素(200 ml/kg体重),MX、E组灌服同等体积生理盐水,共7周。干预结束后,测定体重、肝湿重、血脂水平、血清转氨酶活性,肝组织切片观察肝脏组织结构,ELISA检测肝脏TG含量,比色法监测线粒体β氧化速率、TARBS、GSH-px含量,羟胺法测定SOD活性,SABC法检测肝脏PPARα、TNFα蛋白阳性表达水平,RT-PCR检测肝脏PPARα、TNFα、LCAD、CPT1、AOX、CYP4A10、CYP4A12 mRNA表达。结果:(1)镜下显示,MX组小鼠肝脏结构紊乱,细胞核畸形变位于细胞边缘,肝细胞中出现大量脂滴空泡样变,各干预组肝索较清晰,肝细胞脂滴空泡样变减少,细胞核圆居中,脂质变性程度下降。(2)与MX组相比,E、EC组体重、肝湿重下降(P<0.01),C组体重无显著性差异,肝湿重下降(P<0.01);E、C、EC组血清TG、TC、LDL-C、ALT、AST水平下降(P<0.01或P<0.05),HDL-C水平升高(P<0.01);肝脏TG、TBARS含量下降(P<0.01),GSH-px、SOD含量、肝线粒体β氧化速率上升(P<0.01或P<0.05)。对于上述血清和肝脏检测指标,除血清AST水平以外,有氧运动与黑果枸杞色素间均存在协同效应。(3)与MX组相比,E、C、EC组肝脏脂肪酸氧化调控基因TNFα基因表达、蛋白阳性表达水平下降,PPARα基因表达、蛋� 展开更多
关键词 NAFLD 线粒体β氧化 微粒体ω氧化 氧化物酶体β氧化 有氧运动 黑果枸杞色素
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Candida cloacae长链脂肪酸醇氧化酶基因的克隆与表达 被引量:3
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作者 葛正龙 Antoni R.SLABAS 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期264-267,共4页
The cDNA encoding long-chain fatty-acid alcohol oxidase(FAO) was isolated by using RT-PCR method from Candida cloacae grown in a medium containing oleic acid. The cDNA of fatty-acid alcohol oxidase was cloned into exp... The cDNA encoding long-chain fatty-acid alcohol oxidase(FAO) was isolated by using RT-PCR method from Candida cloacae grown in a medium containing oleic acid. The cDNA of fatty-acid alcohol oxidase was cloned into expression plasmid pET17b under T7 promoter and then transformed into E.coli BL21/DE3. The molecular weight of the expressed protein was estimated to be approximately 64 kD by SDS-PAGE. The expressed protein had a specific catalytic activity of fatty-acid alcohol oxidase and its activity was 1090±116 U/ml medium. Northern blotting revealed that there was high expression of fao mRNA in Candida cloacae yeast grown in a medium containing oleic acid. 展开更多
关键词 工业酵母 Candida-cloacae 长链脂肪酸醇氧化 基因克隆 基因表达 ω氧化通路
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