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小麦品种陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆、原核表达与功能鉴定 被引量：5
1
作者 王明霞 高翔 +4 位作者 陈其皎 董剑 赵万春 李艳亮 李敏 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期79-86,共8页
利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626)。序列分析表明,该基因编码产物的II区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基。构建了GQ857626的原核表达... 利用设计合成的特异γ-醇溶蛋白基因引物,采用PCR方法从小麦品种陕253克隆获得一个γ-醇溶蛋白基因(GenBank登录号为GQ857626)。序列分析表明,该基因编码产物的II区由于碱基转换产生一个额外的半胱氨酸残基。构建了GQ857626的原核表达载体并转入表达菌株E.coli Rosetta gami B(DE3),IPTG诱导其成功表达。使用HisTrap HP组氨酸标记亲和层析柱纯化该基因的表达产物,并使用4 g粉质仪分析其功能。结果显示,将此纯化蛋白通过氧化还原反应整合到基础面粉后,面团的形成时间缩短,稳定时间减少,弱化度增加,导致主要的粉质指数明显下降,说明该亚基对面团流变学性质整体表现不利。 展开更多
关键词 普通小麦 γ-醇溶蛋白 原核表达 粉质参数
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簇毛麦(Dasypyrum villosum L.)中一个γ-醇溶蛋白基因序列的研究 被引量：1
2
作者 吴卫东 赵峰 +2 位作者 陈晓燕 陈凡国 夏光敏 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期4-6,共3页
目的:研究簇毛麦中一个新的γ-醇溶蛋白基因序列及结构特点,为小麦品质育种和该类基因的进化分析提供资料。方法:利用基因组PCR技术从簇毛麦基因组中克隆到1个γ-醇溶蛋白基因(Dv-γ)的全编码序列,利用生物信息学研究其序列结构特点。结... 目的:研究簇毛麦中一个新的γ-醇溶蛋白基因序列及结构特点,为小麦品质育种和该类基因的进化分析提供资料。方法:利用基因组PCR技术从簇毛麦基因组中克隆到1个γ-醇溶蛋白基因(Dv-γ)的全编码序列,利用生物信息学研究其序列结构特点。结果:该序列与已知的γ-醇溶蛋白有着很高的相似性。推导的氨基酸序列包含5个典型的结构域,其中含有8个保守半胱氨酸残基,高变重复区Ⅱ中的重复单元与其他物种来源基因有较大区别。γ-醇溶蛋白中常见的乳糜泄抗原决定簇在其内部也有发现。进化分析表明,此基因与亚家族Ⅰ中的γ-醇溶蛋白基因有着较近的亲缘关系。结论:获得了一个新的γ-醇溶蛋白基因。 展开更多
关键词 簇毛麦 γ-醇溶蛋白 基因组PCR 乳糜泄抗原决定簇
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陕253γ-醇溶蛋白基因的克隆与序列分析 被引量：1
3
作者 王明霞 高翔 +8 位作者 陈其皎 董剑 赵万春 李艳亮 李敏 陈瑞佶 庞红喜 李哲清 刘俊 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期526-532,共7页
针对γ-醇溶蛋白基因家族成员,设计了覆盖其启动子及全长编码区的3对特异引物,从强筋小麦品种陕253中克隆了8条1000bp左右的片段(GenBank登录号为GQ871770～GQ871777)。该片段群包含典型醇溶蛋白亚基的完整编码序列,并在重复区存在丰富... 针对γ-醇溶蛋白基因家族成员,设计了覆盖其启动子及全长编码区的3对特异引物,从强筋小麦品种陕253中克隆了8条1000bp左右的片段(GenBank登录号为GQ871770～GQ871777)。该片段群包含典型醇溶蛋白亚基的完整编码序列,并在重复区存在丰富的插入/缺失(InDel);推导的氨基酸序列显示,8个基因均具有γ-醇溶蛋白亚基的典型结构特征,其中GQ871771为假基因,4条序列(GQ871770、GQ871772、GQ871776和GQ87177)具有9个半胱氨酸残基;启动子区序列分析表明,GQ871770、GQ871772、GQ871774和GQ871776在胚乳框存在6处SNP变异,其中两处变异发生于GCN4基序内,利用WebLogo3在线构建了储藏蛋白更具代表意义的30bp保守胚乳盒模式。进化分析证实克隆序列属于γ-醇溶蛋白基因家族成员。 展开更多
关键词 普通小麦 γ-醇溶蛋白 基因克隆 序列分析
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一个普通小麦γ-醇溶蛋白基因的分子标记
4
作者 陈其皎 袁中伟 +3 位作者 张连全 相志国 颜泽洪 刘登才 《四川农业大学学报》 CSCD 2006年第2期135-138,共4页
运用生物信息学方法,根据已知的黑麦75Kγ-黑麦碱DNA序列设计引物,对8份不同类型的普通小麦材料进行PCR扩增,均获得一条约400 bp的特异扩增带。对新中长和99L2的扩增带分别进行克隆测序,序列登录号为:DQ432029和DQ432030。分析表明,DQ43... 运用生物信息学方法,根据已知的黑麦75Kγ-黑麦碱DNA序列设计引物,对8份不同类型的普通小麦材料进行PCR扩增,均获得一条约400 bp的特异扩增带。对新中长和99L2的扩增带分别进行克隆测序,序列登录号为:DQ432029和DQ432030。分析表明,DQ432029和DQ432030序列完全一致,由377个碱基组成。BLAST分析发现,该序列与普通小麦γ-醇溶蛋白基因的同源性最高,相似性达92%,表明它是一个小麦γ-醇溶蛋白基因。同时,此序列与所有已知γ-醇溶蛋白基因序列存在显著差异,因而可以认为它是普通小麦γ-醇溶蛋白基因家族的一个新序列。所有不同类型的小麦材料都扩出一条同样大小的清晰、明亮带,此扩增带可以作为普通小麦该γ-醇溶蛋白新基因的特异分子标记。 展开更多
关键词 黑麦 普通小麦 γ-醇溶蛋白 γ-黑麦碱 分子标记
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玉米蛋白环(组氨酸-脯氨酸)二肽前体的制备及其鉴定（英文）
5
作者 张艳荣 樊红秀 +1 位作者 刘鸿铖 董欣 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第22期52-59,共8页
以玉米蛋白为原料,制备活性环（组氨酸-脯氨酸）二肽（cyclo（His-Pro））前体——His-Pro和Pro-His二肽。分别采用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对提取的玉米γ-醇溶蛋白进行单酶和双酶分步水解,筛选出最佳酶解工艺... 以玉米蛋白为原料,制备活性环（组氨酸-脯氨酸）二肽（cyclo（His-Pro））前体——His-Pro和Pro-His二肽。分别采用碱性蛋白酶、复合蛋白酶、风味蛋白酶和木瓜蛋白酶对提取的玉米γ-醇溶蛋白进行单酶和双酶分步水解,筛选出最佳酶解工艺。采用碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解的水解产物中cyclo（His-Pro）前体的含量比其他水解产物要高。采用响应面和L16（4-5）正交试验对碱性蛋白酶和风味蛋白酶分步水解γ-醇溶蛋白的工艺进行了优化,最佳水解条件为：底物质量浓度32 mg/m L,先加入12 100 U/g的碱性蛋白酶水解6.5 h,再加入17 000 U/g的风味蛋白酶于p H7.5、55℃条件下水解6 h。采用超高效液相色谱法和电喷雾质谱法对cyclo（His-Pro）前体进行定量和定性分析,结果表明水解产物中含有较高含量的脯氨酸-组氨酸二肽（6.88 mg/g）。 展开更多
关键词 玉米蛋白 酶解 环(组氨酸-脯氨酸)二肽前体 γ-醇溶蛋白
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郑麦366γ-醇溶蛋白基因的克隆、系统进化和乳糜泻毒性分析
6
作者 李黎 李玉阁 李锁平 《河南大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第5期545-552,共8页
采用基因组PCR法,从强筋优质小麦品种郑麦366中克隆得到12个具有独特编码区的γ-醇溶蛋白新基因(命名为ZH366R-1-ZH366R-12,GenBank注册序列号为JN849083-JN849089和JX828391-JX828395),其中,ZH366R-5、ZH366R-8、ZH366R-11和ZH366R-12... 采用基因组PCR法,从强筋优质小麦品种郑麦366中克隆得到12个具有独特编码区的γ-醇溶蛋白新基因(命名为ZH366R-1-ZH366R-12,GenBank注册序列号为JN849083-JN849089和JX828391-JX828395),其中,ZH366R-5、ZH366R-8、ZH366R-11和ZH366R-12有完整的开放阅读框,除ZH366R-8存在一个额外的半胱氨酸(C)外,其他3个基因均具有γ-醇溶蛋白的典型分子特征,含有8个保守的半胱氨酸残基.克隆基因与42个来源于强筋优质小麦品种或代表普通小麦起源的二倍体祖先供体种的γ-醇溶蛋白的聚类分析和已知免疫多肽的分布分析表明,γ-醇溶蛋白在整个推断氨基酸序列和主要免疫肽的分布上均存在一定的基因组特异性.在重复区II含有1个额外半胱氨酸残基的γ-醇溶蛋白通常是由Gli-B1位点编码的,且在优质强筋小麦品种中均有分布,推测Gli-B1位点编码的γ-醇溶蛋白可能对面筋品质有独特贡献,而由Gli-D1位点编码的γ-醇溶蛋白,通常在重复区II分布有较多种类和数量的免疫多肽,乳糜泻(CD)毒性最强. 展开更多
关键词 郑麦366 γ-醇溶蛋白 基因克隆 系统进化 乳糜泻
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小麦内源特异参照基因的查找与定性PCR和实时荧光PCR验证 被引量：6
7
作者 栾凤侠 张洪祥 白月 《生物技术》 CAS CSCD 2006年第6期50-52,共3页
目的:先从理论上查找和比对了小麦属(Triticum)γ-醇溶蛋白基因(GAG56D)为小麦特异的内源基因,并用定性PCR和实时荧光PCR方法从实验特异性上进行了验证。方法:选择小麦基因组中部分基因序列在NCBI中进行同源性分析,查找在小麦中存在的... 目的:先从理论上查找和比对了小麦属(Triticum)γ-醇溶蛋白基因(GAG56D)为小麦特异的内源基因,并用定性PCR和实时荧光PCR方法从实验特异性上进行了验证。方法:选择小麦基因组中部分基因序列在NCBI中进行同源性分析,查找在小麦中存在的内源特异参照基因,找到小麦属(Triticum)特异的γ-醇溶蛋白基因(GAG56D),设计并合成该基因的引物和探针序列,同时用定性PCR和实时荧光PCR方法进行检测,并优化了实验条件。结果:不仅在理论上查找和比对了γ-醇溶蛋白基因为小麦特异的内源基因,并用定性PCR和实时荧光PCR方法进行了实验特异性的验证。定性PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳分析后,只在小麦属中可以检测到328bp的目的片段,而在其它作物中未扩增出目的片断。同样实时荧光PCR验证的结果小麦属内各个种均有扩增曲线出现,而在其它作物没有扩增曲线出现中。结论:该基因与方法可用作检测小麦属(唯一小麦种是栽培作物)内源特异参照基因。 展开更多
关键词 小麦 内源参照基因 小麦γ-醇溶蛋白 GAG56D PCR REAL-TIME PCR
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