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南丰蜜橘β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆和序列分析 被引量：11
1
作者 冯唐锴 李思光 +1 位作者 汪艳璐 罗玉萍 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期238-243,共6页
以南丰蜜橘[Citrus reticulata Blanco var.kinokuni(Tanaka)H.H.Hu]基因组DNA为模板,根据已报道的柑橘β-胡萝卜素羟化酶基因保守序列设计4对引物,进行PCR扩增,得到4条长度为470、761、294和991 bp的片段.将这些片段克隆到pMD18-T载体... 以南丰蜜橘[Citrus reticulata Blanco var.kinokuni(Tanaka)H.H.Hu]基因组DNA为模板,根据已报道的柑橘β-胡萝卜素羟化酶基因保守序列设计4对引物,进行PCR扩增,得到4条长度为470、761、294和991 bp的片段.将这些片段克隆到pMD18-T载体,并进行测序.测序结果拼接成1条2 326 bp的序列.分析发现该序列含6个内含子,7个外显子.内含子两侧有典型的GT-AG保守序列.该序列中预测的编码序列与温州蜜柑、拟南芥等植物的β-胡萝卜素羟化酶基因序列保守性达80%以上,表明该序列确实为β-胡萝卜素羟化酶基因.该基因编码了1个含311个氨基酸的蛋白.将该序列递交到GenBank数据库,序列号为AM408552. 展开更多
关键词 南丰蜜桔 β-胡萝卜素羟化酶基因 基因克隆 β-隐黄素
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毛竹β-胡萝卜素羟化酶基因的分子特征及其功能 被引量：10
2
作者 孙化雨 陈颖 +4 位作者 赵韩生 董丽莉 王丽丽 娄永峰 高志民 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第10期53-59,共7页
【目的】β-胡萝卜素羟化酶(BCH)是催化β-胡萝卜素经中间产物β-隐黄素合成玉米黄质的关键酶,玉米黄质在植物光保护过程中发挥着重要作用。通过研究毛竹β-胡萝卜素羟化酶基因(Pe BCH)的结构特点、表达特征和功能,为揭示强光胁迫条件下... 【目的】β-胡萝卜素羟化酶(BCH)是催化β-胡萝卜素经中间产物β-隐黄素合成玉米黄质的关键酶,玉米黄质在植物光保护过程中发挥着重要作用。通过研究毛竹β-胡萝卜素羟化酶基因(Pe BCH)的结构特点、表达特征和功能,为揭示强光胁迫条件下PeBCH在竹子光保护中的作用提供证据,为培育抵抗强光胁迫的植物新品种提供新的基因资源。【方法】以毛竹为对象,通过同源克隆的方法分离PeBCH,利用生物信息学软件分析其结构特点,采用实时荧光定量PCR技术分析基因的组织表达特性,构建PeBCH基因的过量表达载体,并在拟南芥中异位表达,通过对转基因拟南芥植株的表型和生理变化来鉴定PeBCH基因的功能。【结果】从毛竹中获得了1个BCH同源基因序列,命名为PeBCH;该基因的全长1 385 bp,编码区为927 bp,编码区对应的基因组序列为1 566 bp,包含5个内含子、6个外显子,内含子完全符合GT-AG剪接原则。PeBCH编码1个308个氨基酸的蛋白,PeBCH蛋白具有BCH家族的特征结构域PD095142和PD011050,存在4个跨膜结构,二级结构含有无规则卷曲、延伸链和α螺旋3种,其中以无规则卷曲覆盖的氨基酸残基最多。组织表达特异性分析表明,PeBCH基因在毛竹的根、幼茎、叶片、叶鞘、节中均检测到表达,但表达丰度存在着显著差异,其中在叶片中的相对表达丰度最高。不同光照处理影响PeBCH基因的表达,随着光强的增大该基因的表达丰度呈现先上升后下降的趋势,其中光强1 000μmol·m-2s-1处理后基因的表达丰度最高,约为对照的1.5倍,但光强1 500μmol·m-2s-1处理后,PeBCH基因的表达丰度显著下降,仅为对照的5%,明显受到强光的抑制。利用PeBCH基因转化拟南芥后,RT-PCR分析表明PeBCH基因在转基因植株中得到表达;与野生型拟南芥相比,转PeBCH基因拟南芥植株生长健壮,叶绿素、类胡萝卜素、胡萝卜素和叶黄素含量均有所增加;� 展开更多
关键词 毛竹 β-胡萝卜素羟化酶基因 拟南芥 色素含量 叶绿素荧光参数
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烟草β-胡萝卜素羟化酶基因的特征分析 被引量：3
3
作者 焦芳婵 曾建敏 +3 位作者 吴兴富 李文正 宋中邦 李永平 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期1831-1837,共7页
β-胡萝卜素羟化酶基因在植物类胡萝卜素的合成代谢过程中起着关键的作用。烟草中的类胡萝卜素是烟叶香气物质的主要前体物之一。本研究克隆了烟草4个β-胡萝卜素羟化酶基因。烟草β-胡萝卜素羟化酶基因与其它作物的BCH基因具有相似的结... β-胡萝卜素羟化酶基因在植物类胡萝卜素的合成代谢过程中起着关键的作用。烟草中的类胡萝卜素是烟叶香气物质的主要前体物之一。本研究克隆了烟草4个β-胡萝卜素羟化酶基因。烟草β-胡萝卜素羟化酶基因与其它作物的BCH基因具有相似的结构,由7个外显子和6个内含子组成。其编码的蛋白包含BCH蛋白的保守结构域,即脂肪酸羟化酶超家族保守域。进化分析表明,烟草Nt BCH蛋白与番茄、枸杞、辣椒等茄科作物的BCH蛋白遗传距离较近。组织特异性表达分析表明,Nt BCH1和Nt BCH2基因主要在叶和花中表达,Nt BCH3和Nt BCH4主要在根和花中表达。从本研究结果推断,可以通过调控Nt BCH1和Nt BCH2基因的表达控制烟叶中类胡萝卜素的含量。 展开更多
关键词 烟草 β-胡萝卜素羟化酶基因 特征分析
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芹菜β-胡萝卜素羟化酶基因AgBCH1的克隆及表达特性分析 被引量：3
4
作者 王雨薇 郝建楠 +5 位作者 罗鑫 李静文 段奥其 刘洁霞 冯凯 熊爱生 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期14-22,共9页
胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase, BCH)在植物类胡萝卜素生物合成中起着重要的作用。芹菜是伞形科一种重要的叶菜类蔬菜作物,含有丰富的类胡萝卜素。本文以芹菜‘六合黄心芹’为实验材料,从中克隆获得编码芹菜β-胡萝卜素羟化... 胡萝卜素羟化酶(β-carotene hydroxylase, BCH)在植物类胡萝卜素生物合成中起着重要的作用。芹菜是伞形科一种重要的叶菜类蔬菜作物,含有丰富的类胡萝卜素。本文以芹菜‘六合黄心芹’为实验材料,从中克隆获得编码芹菜β-胡萝卜素羟化酶的基因AgBCH1。序列分析结果显示,该基因全长933 bp,编码310个氨基酸。进化树分析表明,芹菜AgBCH1蛋白的进化高度保守,与同科的胡萝卜DcBCH1蛋白的进化关系最为相近。序列比对分析显示,植物BCH1氨基酸序列具有较高的同源性,芹菜与同科的胡萝卜BCH1氨基酸序列一致性达到87.94%。Ag BCH1蛋白相对分子质量34 505.73,理论等电点9.10,为亲水性蛋白。芹菜Ag BCH1蛋白三级蛋白结构包括5个α螺旋及6个β折叠,无序化比例为14.84%。利用实时定量PCR对经过低温(4°C)、高温(38°C)、盐(0.2mol·L-1 Na Cl)、干旱(200 g·L-1 PEG) 4种非生物胁迫处理的60 d芹菜叶片中Ag BCH1基因的相对表达量进行检测,发现Ag BCH1基因对这4种逆境胁迫均有响应,尤其对高温胁迫响应明显,且高温处理8 h后表达量最高。 展开更多
关键词 芹菜 β-胡萝卜素羟化酶基因 克隆 非生物胁迫 基因表达
原文传递
南丰蜜橘β-萝卜素羟化酶的生物信息学分析 被引量：2
5
作者 汪艳璐 罗玉萍 +1 位作者 李思光 冯唐锴 《江西科学》 2007年第6期688-692,共5页
利用多种在线软件对本实验室克隆测序的南丰蜜橘（Citrus reticulata Blanco var.kinokuni（Tanaka）H.H.Hu）β-胡萝卜素羟化酶（chy，蛋白序列号CAL63739）的理化性质、亲水性、跨膜区及空间结构进行了预测。理化性质分析显示其含311... 利用多种在线软件对本实验室克隆测序的南丰蜜橘（Citrus reticulata Blanco var.kinokuni（Tanaka）H.H.Hu）β-胡萝卜素羟化酶（chy，蛋白序列号CAL63739）的理化性质、亲水性、跨膜区及空间结构进行了预测。理化性质分析显示其含311个氨基酸分子量为34 785.4，pI值为9.03。该酶定位于类囊体膜上，TMpred跨膜分析显示它含有4个显著的跨膜螺旋区，这些区域与ProtScale预测的疏水区基本重叠。该酶二级结构以α-螺旋为主，且含多种磷酸化位点。结构域分析显示该酶含β-羟化酶家族的特征结构域PD095142（99-156aa）和PD011050（157-280aa）。借助HHpred三级结构预测结果，分析了该酶的结构特征及可能的膜定位方式。本文为进一步研究该酶结构和功能的关系打下了基础。 展开更多
关键词 南丰蜜桔 β-胡萝卜素羟化酶基因 基因克隆 β-隐黄素
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羽衣甘蓝β-胡萝卜素羟化酶基因的克隆及表达分析 被引量：2
6
作者 王玉书 王欢 +3 位作者 郭宇 周明慧 陈璐 陈阳 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2019年第1期80-85,共6页
以羽衣甘蓝(Brassica oleracea L. var. acephala)为试验材料,采用同源克隆和RT-PCR技术,克隆得到羽衣甘蓝β-胡萝卜素羟化酶的c DNA全长,命名为Bo BCH(Gen Bank登录号为MH016242)。序列分析表明,该c DNA序列长906 bp,编码301个氨基酸,... 以羽衣甘蓝(Brassica oleracea L. var. acephala)为试验材料,采用同源克隆和RT-PCR技术,克隆得到羽衣甘蓝β-胡萝卜素羟化酶的c DNA全长,命名为Bo BCH(Gen Bank登录号为MH016242)。序列分析表明,该c DNA序列长906 bp,编码301个氨基酸,分子量33. 8 ku,理论等电点为9. 67。保守结构域分析表明,Bo BCH属于FA_hydroxylase蛋白超家族。系统发育分析结果表明,羽衣甘蓝与结球甘蓝处于同一分支,其亲缘关系最近。TMHMM和Wolf-Psort进行跨膜区分析及亚细胞定位,结果表明Bo BCH蛋白有4个跨膜区域,可能定位于叶绿体中发挥作用。q RT-PCR检测结果表明,Bo BCH在紫叶羽衣甘蓝DH系D07的根、茎、叶中均有表达,在叶片中表达量最高,茎次之,根中表达量最低;不同发育时期的检测结果表明,Bo BCH在观赏期叶片中表达最高,在幼苗期和莲座期表达水平较低。 展开更多
关键词 羽衣甘蓝 β-胡萝卜素羟化酶基因 克隆 表达分析
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Bkt基因和crtR-B基因在集胞藻PCC 6803中的重组表达及功能分析
7
作者 刘亚铭 王康 +2 位作者 崔玉琳 陈高 秦松 《集成技术》 2021年第5期96-103,共8页
将雨生红球藻中的β-胡萝卜素酮化酶基因(bkt)和β-胡萝卜素羟化酶基因(crtR-B)经密码子优化后,通过自然转化法分别转入集胞藻PCC 6803基因组中。高效液相色谱分析显示:转入bkt基因的细胞产生角黄质的同时,海胆酮含量减少;转入crtR-B基... 将雨生红球藻中的β-胡萝卜素酮化酶基因(bkt)和β-胡萝卜素羟化酶基因(crtR-B)经密码子优化后,通过自然转化法分别转入集胞藻PCC 6803基因组中。高效液相色谱分析显示:转入bkt基因的细胞产生角黄质的同时,海胆酮含量减少;转入crtR-B基因的细胞产生金盏花黄质的同时,玉米黄素含量减少。实验结果表明,外源的β-胡萝卜素酮化酶基因将海胆酮转化为角黄质,外源的β-胡萝卜素羟化酶基因将玉米黄素转化为金盏花黄质。该文利用代谢工程策略,在集胞藻PCC 6803中构建类胡萝卜素生物合成途径,为通过代谢工程在集胞藻PCC 6803中生产虾青素奠定了基础。 展开更多
关键词 集胞藻PCC 6803 β-胡萝卜素酮化酶基因(bkt) β-胡萝卜素羟化酶基因(crtR-B) 代谢过程
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普通烟草β-胡萝卜素羟化酶2基因克隆与生物信息学分析 被引量：1
8
作者 雷波 丁福章 +3 位作者 赵会纳 卢坤 蔡凯 潘文杰 《贵州农业科学》 CAS 2015年第2期24-28,共5页
β-胡萝卜素羟化酶(beta-carotene hydroxylase,BCH)是植物类胡萝卜素合成代谢中的关键限速酶,为获得烟草β-胡萝卜素羟化酶2(NtBCH2)基因序列,采用同源克隆法从烟草中分离NtBCH2的基因组DNA序列,基因登录号为JX101477。结果表明:1)同... β-胡萝卜素羟化酶(beta-carotene hydroxylase,BCH)是植物类胡萝卜素合成代谢中的关键限速酶,为获得烟草β-胡萝卜素羟化酶2(NtBCH2)基因序列,采用同源克隆法从烟草中分离NtBCH2的基因组DNA序列,基因登录号为JX101477。结果表明:1)同源克隆法从烟草中克隆出NtBCH2基因,NtBCH2基因组DNA全长2131bp,cDNA为1 083bp,含7个外显子和6个内含子。2)NtBCH2蛋白有309个氨基酸,分子量为34.79kD,具有7个糖基化位点,11个磷酸化位点,4个跨膜域。3)系统发育树与BLAST分析表明,NtBCH2是番茄的SlBCH和辣椒CaBCH2的同源基因;GENEVESTIGATOR数据库芯片结果表明,NtBCH2在幼嫩的茎和子叶中表达量最高。 展开更多
关键词 烟草 β-胡萝卜素羟化酶2基因 香气 克隆
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