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人β干扰素基因重组腺病毒载体的构建及在骨髓间充质干细胞的表达 被引量：5
1
作者 田道锋 陈谦学 +3 位作者 吴立权 蔡强 陈治标 袁先厚 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期216-218,共3页
目的构建人β干扰素（hIFN—β）基因重组腺病毒，观察重组腺病毒介导的hIFN-β转染大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）后，细胞内hIFN—β表达情况以及重组腺病毒对MSCs生长的影响。方法利用细菌内同源重组技术快速构建Ad—hIFN-β腺病毒重... 目的构建人β干扰素（hIFN—β）基因重组腺病毒，观察重组腺病毒介导的hIFN-β转染大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）后，细胞内hIFN—β表达情况以及重组腺病毒对MSCs生长的影响。方法利用细菌内同源重组技术快速构建Ad—hIFN-β腺病毒重组质粒，经酶切及测序鉴定正确后转染人胚肾细胞HEK293包装成为重组Ad—hIFN—β腺病毒，并进行滴度测定。转染的MSCs行逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）检测细胞内hIFN—βmRNA的表达；酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测培养液上清hIFN—β的分泌情况；噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞活力并绘制转染后MSCs生长曲线。结果经限制性内切酶检测、基因测序及和绿色荧光观察证实成功的构建了携带hIFN—β基因的重组腺病毒，且重组腺病毒滴度高达1×10^9pfu／ml。Ad—hIFN—β转染MSCs后在荧光显微镜下证实有绿色荧光；RT—PCR证明转染的MSCs内有hIFN-βmRNA的表达；ELISA检测转染组1、3、5、7、10、15、20d上清液中hlFN—β蛋白分泌量分别为192、273、436、957、605、472、279ng／L，明显高于对照组（P〈0．01）；Ad-hIFN-β转染的MSCs生长曲线与正常培养MSCs差异无统计学意义（P〉0．05）。结论成功构建了携带hIFN-β基因的重组腺病毒载体，重组腺病毒转染对MSCs的增殖能力无明显影响，而且Ad—hIFN-β转染大鼠MSCs能够表达并分泌hIFN—β蛋白。 展开更多
关键词 骨髓间充质干细胞 β干扰索 腺病毒载体 基因治疗
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