期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到585篇文章
< 1 2 … 30 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
番茄SlWRKY31基因启动子的克隆与逆境应答模式分析 被引量：11
1
作者 高永峰 杨丰铭 +4 位作者 李琴中 张国燕 王丹 姚银安 刘继恺 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第12期2155-2164,共10页
该研究以野生型番茄(Solanum lycopersicum)为材料,采用PCR技术克隆得到了番茄SlWRKY31基因起始密码子ATG上游启动子序列,并利用该启动子驱动GUS基因在野生型番茄中表达,对获得的转基因番茄采用不同胁迫处理后进行GUS染色和定量分析。... 该研究以野生型番茄(Solanum lycopersicum)为材料,采用PCR技术克隆得到了番茄SlWRKY31基因起始密码子ATG上游启动子序列,并利用该启动子驱动GUS基因在野生型番茄中表达,对获得的转基因番茄采用不同胁迫处理后进行GUS染色和定量分析。结果表明:(1)序列分析显示,该启动子全长1 849bp,含有多个与非生物胁迫和激素响应相关的顺式作用元件,主要包括热胁迫响应元件HSE、干旱诱导响应元件MBS、防卫和胁迫响应元件TC-rich repeats、创伤诱导响应元件WUN-motif、脱落酸(ABA)响应元件ABRE和水杨酸(SA)响应元件TCA-element。(2)实时荧光定量PCR结果显示,SlWRKY31基因呈组成型表达模式,且在叶和果实中表达量较高,茎中较低;在NaCl、甘露醇、SA、ABA和42℃高温的胁迫处理下,其表达量显著升高。(3)构建SlWRKY31启动子和GUS基因融合的植物表达载体,并通过农杆菌介导法将其转化野生型番茄,对获得的转基因番茄进行GUS组织化学染色分析结果显示,SlWRKY31基因在番茄的各个组织(根、茎、叶、花、果实和种子)中均有表达,表明SlWRKY31启动子是组成型表达启动子。(4)对转基因番茄在不同胁迫处理后的GUS染色和定量分析显示,SlWRKY31启动子显著受到NaCl、甘露醇、SA、ABA和42℃高温的诱导表达,说明该启动子是一个可以响应多种逆境胁迫的诱导型启动子。 展开更多
关键词 番茄 SlWRKY31启动子 逆境胁迫 β半乳糖苷酶 GUS染色分析
下载PDF
穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠肝脏组织β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性的影响 被引量：6
2
作者 薛剑 朱瑞琪 +2 位作者 卢芳 刘树民 周琦 《中医药学报》 CAS 2014年第4期47-49,共3页
目的:探讨穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠肝脏组织β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性的影响。方法:取60只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、穿山龙总皂苷高、中、低剂量组和阳性药吲哚美辛组。穿山龙总皂苷和吲哚美辛... 目的:探讨穿山龙总皂苷对痛风性关节炎大鼠肝脏组织β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性的影响。方法:取60只清洁级Wistar大鼠随机分为正常组、模型组、穿山龙总皂苷高、中、低剂量组和阳性药吲哚美辛组。穿山龙总皂苷和吲哚美辛于造模前3天开始连续给药,每24h一次。正常组和模型组同时灌胃生理盐水。从给药第3天开始,灌胃给药1h后,腹腔注射10%水合氯醛麻醉后双侧膝关节注射MSU混悬液造模。共计连续给药7天,造模5天。采用β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性检测试剂盒检测肝组织中的β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性。结果:与正常组相比,模型组肝组织中β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性显著提高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,穿山龙总皂苷高、中剂量组肝组织β半乳糖苷酶活性显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,穿山龙总皂苷高、低剂量组肝组织β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性显著降低(P<0.01,P<0.05);与模型组相比,吲哚美辛组肝组织β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性亦显著降低(P<0.01,P<0.01)。结论:穿山龙总皂苷可通过对β半乳糖苷酶和β-N-乙酰氨基葡萄糖酶活性的调节,即溶酶体酶的调节作用达到治疗痛风性关节炎的目的。 展开更多
关键词 穿山龙总皂苷 痛风性关节炎 β半乳糖苷酶 β-N -乙酰氨基葡萄糖酶
下载PDF
糖耐量低减者的尿酶检测及分析 被引量：2
3
作者 胡英华 胡洪文 赵磊 《河北医药》 CAS 2010年第6期744-745,共2页
关键词 糖耐量低减 N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶 β半乳糖苷酶 尿碱性磷酸酶 早期肾损伤
下载PDF
皮下注射的骨髓间充质干细胞在正常小鼠体内的迁移分化 被引量：2
4
作者 靳建亮 苗登顺 《南京医科大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期613-617,共5页
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在正常小鼠体内从皮下向不同器官迁移的能力。方法:从β半乳糖苷酶(β-gal+)转基因小鼠分离骨髓细胞,经贴壁和传代培养获得第3代β-gal+BM-MSCs,皮下注射给正常6周龄C57BL/6J野生型小鼠。8周后通过L... 目的:探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在正常小鼠体内从皮下向不同器官迁移的能力。方法:从β半乳糖苷酶(β-gal+)转基因小鼠分离骨髓细胞,经贴壁和传代培养获得第3代β-gal+BM-MSCs,皮下注射给正常6周龄C57BL/6J野生型小鼠。8周后通过LacZ染色示踪β-gal+BM-MSCs在受体小鼠不同组织器官的分布,并对供体第3代β-gal+BM-MSCs基质金属蛋白酶(MMPs)的基因表达水平进行检测。结果:β-gal转基因小鼠来源的供体第3代BM-MSCs呈现LacZ染色阳性。第3代的β-gal阳性BM-MSCs皮下注射8周后,在受体小鼠肺、脑、心、肝、肾内检测到LacZ染色阳性的细胞。第3代β-gal+BM-MSCs表达MMPs基因。结论:皮下注射的BM-MSCs能够在正常小鼠体内经血液循环迁移到不同器官,并可能分化成为不同器官的终末分化细胞,参与正常组织的自我更新。 展开更多
关键词 β半乳糖苷酶 转基因小鼠 骨髓间充质干细胞 迁移 基质金属蛋白酶
下载PDF
棉花半乳糖苷酶基因启动子的分离及其在转基因烟草中的表达 被引量：2
5
作者 吴蔼民 刘进元 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2005年第5期389-397,共9页
β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,EC3.2.1.23)由植物中广泛分布的一类糖基水解酶组成,被认为与细胞壁多糖的代谢相关.棉花(Gossypiumhirsutum)β-半乳糖苷酶基因已被成功分离,被命名为GhGal1.RNA杂交实验显示该基因在棉花纤维发育的伸... β-半乳糖苷酶(β-galactosidase,EC3.2.1.23)由植物中广泛分布的一类糖基水解酶组成,被认为与细胞壁多糖的代谢相关.棉花(Gossypiumhirsutum)β-半乳糖苷酶基因已被成功分离,被命名为GhGal1.RNA杂交实验显示该基因在棉花纤维发育的伸长期优势表达.为了分析GhGal1基因的时空表达调控,本研究构建了GhGal1启动子区域(1770bp)与β-葡糖醛酸糖苷酶(glucuronidase,GUS)基因融合的双元载体,通过农杆菌转化烟草植株.对转基因植株分析的结果表明:此转基因果实中的GUS活性比阴性和阳性对照的活性高.GUS组织定位分析表明:β-半乳糖苷酶基因能在根组织的分生区、子叶、维管束组织、果实和表皮毛中表达.此外,调控区域的序列分析揭示该序列含有一些果实/种子特异表达以及与表皮毛表达相关的保守元件.这些结果显示了GhGal1启动子在转基因烟草植株中的时空表达特征,并提供了GhGal1基因参与棉花纤维发育的一些重要线索. 展开更多
关键词 棉花 β半乳糖苷酶 转基因烟草 启动子活性 基因表达
原文传递
腺病毒介导反义血管紧张素Ⅱ1型受体cDNA对人肺动脉平滑肌细胞生物学行为的影响 被引量：2
6
作者 涂明利 王汉琴 +6 位作者 雷怀定 罗国仕 刘先军 刘为舜 熊畅 刘玉全 任思群 《中华结核和呼吸杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期263-267,共5页
目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响。方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASM... 目的探讨腺病毒介导的反义血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)1型受体(AT1R)cDNA转染对培养的人肺动脉平滑肌细胞(PASMC)迁移、增殖和凋亡的影响。方法构建重组反义人AT1R腺病毒(AdCMVahAT1)和表达β半乳糖苷酶的对照腺病毒载体AdCMVLacZ,将培养的PASMC分为DMEM组、AdCMVLacZ组和AdCMVahAT1组,分别给予不同的干预因素干预PASMC,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT PCR)和免疫组化及彩色图像分析法检测AT1R的表达情况,并用改良的迁移小室进行细胞迁移实验。又将培养的PASMC分为DMEM组,AngⅡ组,AdCMVLacZ+AngⅡ组和AdCMVahAT1+AngⅡ组,用流式细胞仪检测各组PASMC的增殖指数和凋亡率,绘制DNA合成直方图。结果转染AdCMVahAT1后48h的PASMC,AT1RmRNA明显低于对照组[AT1R/βactin吸光度(A)比值:AdCMVahAT1组为0.48,DMEM组为0.97,AdCMVLacZ组为0.96];AdCMVahAT1组AT1R蛋白表达水平(A值为176.39±21.63)显著低于DMEM组(A值为310.21±29.82)和AdCMVLacZ组(A值为306.45±30.09),差异均有统计学意义(P均<0.01),转染AdCMVahAT1后24h的PASMC迁移距离为(40.93±9.69)μm,显著短于DMEM组的(78.23±11.79)μm和AdCMVLacZ组的(77.80±10.66)μm,差异均有统计学意义(P均<0.01)。给予AngⅡ刺激48h,AngⅡ组PASMC的增殖指数(59.69±3.46) 展开更多
关键词 血管紧张素Ⅱ1型受体 细胞生物学行为 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR) 介导反义 血管紧张素Ⅱ(AngⅡ) PASMC 肺动脉平滑肌细胞 DMEM 流式细胞仪检测 AT1R CDNA转染 β半乳糖苷酶 增殖指数 蛋白表达水平 AngⅡ介导 腺病毒介导
原文传递
多次强脉冲光照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响 被引量：1
7
作者 王瑞艳 刘玮 +3 位作者 赵小忠 袁小英 刘红梅 田燕 《中华医学美学美容杂志》 2012年第5期364-367,共4页
目的探讨多次强脉冲光（intense pulsed light．IPL）照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响，并用长波紫外线（ultraviolet A，UVA）作对比，观察多次强脉冲光照射能否造成细胞老化。方法实验分3组．一组未接受照射作为对照组，其他两组... 目的探讨多次强脉冲光（intense pulsed light．IPL）照射对皮肤成纤维细胞老化指标的影响，并用长波紫外线（ultraviolet A，UVA）作对比，观察多次强脉冲光照射能否造成细胞老化。方法实验分3组．一组未接受照射作为对照组，其他两组分别接受UVA9J／cm^2和IPL15J／cm^2照射。每天1次，连续照射5d。在第6天，收集细胞，分别进行p半乳糖舒酶（SA-β-Gal）染色及细胞周期、细胞内活性氧和端粒K度的测定。结果连续5dIPL照射后．SA-β-Gal染色和端粒长度与正常对照组相比，未见明显变化（P〉0．05）。细胞周期中G1期所占百分比下降。细胞内活性氧下降（P〈0．05）；连续jdUVA照射后，与正常对照组相比，SA-β-Gal染色阳性细胞的百分数增加，细胞周期中G1期所占百分比未见明显变化，细胞内活性氧上升，端粒长度缩短（P〈0．05）。结论多次UVA照射可诱导细胞老化，但多次IPL照射不会出现细胞老化。 展开更多
关键词 强脉冲光 β半乳糖苷酶 细胞周期 细胞内活性氧 端粒长度 长波紫外线
原文传递
一例GM1-神经节苷脂贮积症患儿的临床与GLB1基因变异分析
8
作者 程双喜 王清明 +3 位作者 陈霭信 周玲芳 洪晓纯 袁海明 《中华医学遗传学杂志》 CAS CSCD 2022年第5期537-541,共5页
目的探讨一例GM1-神经节苷脂贮积症患儿的基因型与表型的关系。方法采用全外显子测序(whole-exome sequencing,WES)对患儿家系进行检测,并应用Sanger测序对可疑变异位点进行验证。取患儿外周血白细胞利用荧光法进行β半乳糖苷酶活性分... 目的探讨一例GM1-神经节苷脂贮积症患儿的基因型与表型的关系。方法采用全外显子测序(whole-exome sequencing,WES)对患儿家系进行检测,并应用Sanger测序对可疑变异位点进行验证。取患儿外周血白细胞利用荧光法进行β半乳糖苷酶活性分析。结果先证者为一名2岁3个月女性患儿,临床表现为精神运动发育倒退,语言缺失,智力障碍和行为异常。WES检测到GLB1基因发生复合杂合错义变异NM_000404.2:c.1343A>T(p.Asp448Val)和c.1064A>C,(p.Gln355Pro)(GRCh37/hg19),分别遗传于母亲和父亲。GLB1p.Asp448Val变异未检测出β半乳糖苷酶活性,因此该变异为临床致病性变异。而p.Gln355Pro变异尚无报道,该变异位点位于β半乳糖苷酶具有催化活性的TIM barrel结构域,在正常人群数据库频率为0,多种计算机软件预测有害。先证者外周血白细胞β半乳糖苷酶活性分析结果表明酶残余活性为0,证明p.Gln355Pro变异也会导致β半乳糖苷酶活性丧失,因此该变异被评估为临床致病性变异。结论本研究丰富了GLB1基因变异谱,为家庭遗传咨询提供了指导。 展开更多
关键词 GLB1基因 精神运动发育倒退 智力障碍 GM1-神经节苷脂贮积症 β半乳糖苷酶 遗传咨询
原文传递
自制基因枪在小鼠活体转基因中的应用
9
作者 周文忠 俞顺章 《上海医科大学学报》 CSCD 1995年第5期321-323,共3页
将携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒ｐＳＶ－β－Ｇａｌ包裹在直径１～５μｍ的金微粒表面，用自行设计并构建的基因枪加速微弹轰击成年小鼠耳朵及幼鼠腹部皮肤。１～２ｄ后剪下轰击部位组织，用β－半乳糖苷酶的底物Ｘ－Ｇａｌ进行组化... 将携带有β－半乳糖苷酶基因的质粒ｐＳＶ－β－Ｇａｌ包裹在直径１～５μｍ的金微粒表面，用自行设计并构建的基因枪加速微弹轰击成年小鼠耳朵及幼鼠腹部皮肤。１～２ｄ后剪下轰击部位组织，用β－半乳糖苷酶的底物Ｘ－Ｇａｌ进行组化检测，在显微镜下看到轰击部位出现许多酶与底物特异反应所形成的深蓝色斑点，证实β－半乳糖苷酶基因转移到了小鼠体内并且获得表达。 展开更多
关键词 β半乳糖苷酶 基因 微弹轰击 转基因 基因枪
下载PDF
在日本高校开始安排基因操作实习课
10
作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1990年第10期27-28,共2页
生物技术的潮流也涌向高校教育.筑波大学附属驹场高校从去年3月将β半乳糖苷酶基因编入大肠杆菌,利用生物课进行正式的基因操作实验.今年三月开始第二次基因操作实习.编写分子生物学教材。
关键词 基因操作 操作实验 β半乳糖苷酶 月将 重组体 重组质粒 生物技术 限制酶 实习课 筑波
下载PDF
用20升培养物生产5克降钙素
11
作者 孙国凤 《生物技术通报》 CAS CSCD 1991年第11期22-23,共2页
三得利公司确立了一种基因重组法,可大量生产酰胺化的人降钙素(hCT),结果在4月东京召开的日本农艺化学会上发表.使用基因重组生产的α酰胺化酶作用于用基因重组大量生产的目的蛋白,获得活性蛋白.用20升培养物能制造4～5克酰胺化活性型h... 三得利公司确立了一种基因重组法,可大量生产酰胺化的人降钙素(hCT),结果在4月东京召开的日本农艺化学会上发表.使用基因重组生产的α酰胺化酶作用于用基因重组大量生产的目的蛋白,获得活性蛋白.用20升培养物能制造4～5克酰胺化活性型hCT.用这项技术还能大量生产由于酰胺化而产生活性的其它蛋白.三得利公司最近打算向厚生省申请批准生产hCT. hCT的生产程序如下:首先用基因重组大肠杆菌生产与融合有β半乳糖苷酶片段的蛋白,然后用蛋白酶V8切出hCTGKKR(hCT-Gly-Lys-Lys-Arg)。 展开更多
关键词 酰胺化 大量生产 基因重组法 人降钙素 三得利 重组大肠杆菌 厚生省 β半乳糖苷酶 酶作用 培养物
下载PDF
质谱多反应监测技术建立质谱相对定量分析β半乳糖苷酶方法
12
作者 金昌博 李洪涛 +3 位作者 臧宁 李翠萍 周怡 何敏 《中国预防医学杂志》 CAS 2014年第3期161-165,共5页
目的利用质谱多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）技术,建立不依赖抗体的质谱定量检测蛋白的方法。方法通过skyline软件选择β半乳糖苷酶（Beta-Galactosidase,BG）定量的肽段及母-子离子对并优化;通过5次重复实验计算方法... 目的利用质谱多反应监测（multiple reaction monitoring,MRM）技术,建立不依赖抗体的质谱定量检测蛋白的方法。方法通过skyline软件选择β半乳糖苷酶（Beta-Galactosidase,BG）定量的肽段及母-子离子对并优化;通过5次重复实验计算方法的相对标准偏差RSD（%）（relative standard deviation,RSD）;将BG加入到酵母提取物酶切产物中建立复杂背景下标准曲线。结果在多次实验中反复被鉴定的可用于蛋白定量分析的BG 3个唯一肽段分别为：VDEDQPFPAVPK,IDPNAWVER,GDFQFNISR;5次重复实验MRM检测BG积分峰面积的RSD均小于6%;3个肽段在0-50×10^-6fmol/L的浓度范围内线性相关良好,标准曲线R2值为0.998 52-0.999 55,3个肽段在浓度为0.625×10^-6fmol/L时依然可以检测到稳定的质谱峰,显示了方法的高灵敏度。结论建立了MRM质谱相对定量检测BG的方法,为MRM质谱定量检测血清标志物奠定了基础。 展开更多
关键词 β半乳糖苷酶 质谱多反应监测 定量检测
原文传递
尿微量白蛋白联合尿酶测定在诊断急性脑梗死早期肾损伤中的应用 被引量：5
13
作者 胡英华 胡红文 赵磊 《河北医药》 CAS 2010年第14期1857-1858,共2页
目的探讨尿微量白蛋白(mALB)联合尿酶测定在诊断急性脑梗死早期肾损伤中的应用价值。方法急性脑梗死组101例,合并高血压61例,合并糖尿病18例,两者均合并者12例,无合并症者34例。对照组为52例健康体检者,留空腹晨尿离心后取上清液分别检... 目的探讨尿微量白蛋白(mALB)联合尿酶测定在诊断急性脑梗死早期肾损伤中的应用价值。方法急性脑梗死组101例,合并高血压61例,合并糖尿病18例,两者均合并者12例,无合并症者34例。对照组为52例健康体检者,留空腹晨尿离心后取上清液分别检测其中的mALB、尿N-乙酰-β-D-氨基酸葡萄糖苷酶(NAG)及尿β-半乳糖苷酶(GAL),同时测定尿肌酐值,对检测数据进行综合分析。结果急性脑梗死组的mALB、NAG、GAL与对照组比较明显升高(P<0.05或<0.01)。急性脑梗死有合并症者尿mALB、NAG及GAL水平高于无合并症者,差异有统计学意义(P<0.01)。结论 mALB联合尿酶检测可作为诊断急性脑梗死早期肾脏损伤的灵敏可靠的实验室指标。 展开更多
关键词 尿微量白蛋白 尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶 尿β半乳糖苷酶 急性脑梗死 早期肾损伤
下载PDF
沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB靶基因trpE的鉴定 被引量：5
14
作者 潘永 杨阳 +2 位作者 李晨 刘丽娟 杨琦 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第9期1777-1782,共6页
trpE基因在鼠伤寒沙门菌中编码邻氨基苯甲酸合酶Ⅰ并参与氨基酸生物合成和代谢。为鉴定鼠伤寒沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB所调控的基因trpE,本研究基于前期鼠伤寒沙门菌Hfq基因敲除株及gcvB基因敲除株转录组分析基础上,利用Red同源重组... trpE基因在鼠伤寒沙门菌中编码邻氨基苯甲酸合酶Ⅰ并参与氨基酸生物合成和代谢。为鉴定鼠伤寒沙门菌Hfq依赖型小RNA GcvB所调控的基因trpE,本研究基于前期鼠伤寒沙门菌Hfq基因敲除株及gcvB基因敲除株转录组分析基础上,利用Red同源重组系统构建trpE基因lac融合菌株,并利用P22噬菌体转导技术构建gcvB和Hfq基因单缺失和双缺失菌株,通过β半乳糖苷酶试验检测trpE基因在不同情况下蛋白表达活性,结合生物信息学系统TargetRNA2预测GcvB R1区与trpE mRNA的作用位点。结果表明,与野生型菌株相比,gcvB基因敲除导致trpE基因蛋白表达量增加1.2倍,Hfq基因敲除后表达量增加1.1倍,而双敲除增加量仅为0.5倍。Target RNA2预测trpE mRNA与GcvB R1区可形成8个连续或18个不连续的碱基互补。以上结果表明trpE基因受GcvB和Hfq调控,且极大可能受GcvB直接调控。本研究为鼠伤寒沙门菌GcvB的作用机理研究奠定理论基础,丰富了GcvB的靶基因数目。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 小RNA HFQ β半乳糖苷酶试验 trpE基因
原文传递
提高重组腺病毒载体提纯和滴定效率的研究 被引量：4
15
作者 邓祥发 郭灵 +4 位作者 林丹 曾庆堂 磨洁琳 韦力 蓝玲 《广西医学》 CAS 2006年第1期23-25,共3页
目的 探讨提取、纯化和滴定重组腺病毒表达载体的有效方法。方法将已用含报告基因β-半乳糖苷酶基因（IacZ）的重组5型腺病毒载体（Ad5 CMVLacZ）转染的人胚肾293细胞从-70℃转移至37℃，反复冻融使细胞发生破溃，病毒从细胞内释放至上... 目的 探讨提取、纯化和滴定重组腺病毒表达载体的有效方法。方法将已用含报告基因β-半乳糖苷酶基因（IacZ）的重组5型腺病毒载体（Ad5 CMVLacZ）转染的人胚肾293细胞从-70℃转移至37℃，反复冻融使细胞发生破溃，病毒从细胞内释放至上清液。在上清液中加入氯化铯，进行密度梯度超速离心，收集和透析病毒液，用空斑形成实验确定病毒的滴度。结果经提取和纯化的Ad5 CMVLacZ病毒液清晰无色，用系列稀释法将其配制成10^-2～10^-13的稀释度，分别转染100％汇合的293细胞，连续追踪观察空斑的形成及其数目变化，直至转染后第10天，10^-10稀释度的空斑数不再增加为止，计数其空斑。从而确定出mL病毒的滴度，即空斑形成单位（pfu），最终测定得到的结果是3．0×10^10 pfu/mL。结论 用上述方法能制备出优质的重组腺病毒载体，后者足以达到对中枢神经系统损伤和疾病进行基因治疗的要求。 展开更多
关键词 腺病毒载体 β半乳糖苷酶基因 病毒提取 病毒纯化 空斑形成单位
下载PDF
依托泊苷诱导的人小肠类器官衰老模型的构建及鉴定
16
作者 武凤云 王应归 +4 位作者 肖春 李玉芳 金蕊 程龙 牛畅 《中国药理学与毒理学杂志》 CAS 北大核心 2023年第3期191-196,共6页
目的 用依托泊苷(etoposide)诱导类器官发生DNA损伤构建人小肠类器官衰老模型。方法 临床活检小肠组织,体外无菌分离获得小肠隐窝,在培养基中培养成为类器官。类器官用依托泊苷10μmol·L^(-1)处理7 d,倒置相差显微镜观察类器官表... 目的 用依托泊苷(etoposide)诱导类器官发生DNA损伤构建人小肠类器官衰老模型。方法 临床活检小肠组织,体外无菌分离获得小肠隐窝,在培养基中培养成为类器官。类器官用依托泊苷10μmol·L^(-1)处理7 d,倒置相差显微镜观察类器官表面形态变化,Western印迹法检测DNA损伤标志物磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)水平;衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)活性染色检测类器官SA-β-gal阳性细胞面积百分率,Western印迹法检测衰老标志物p16^(INK4A)蛋白表达水平。结果 人小肠隐窝体外成功培养成球。依托泊苷诱导的人小肠类器官衰老模型表面皱缩,类器官部分死亡,整体表面积变小;类器官中γH2AX蛋白表达显著上调(P<0.01);SA-β-gal阳性细胞面积百分率显著增加(P<0.01),约90%细胞呈SA-β-gal阳性;p16^(INK4A)蛋白表达显著增加(P<0.01)。结论 依托泊苷处理可诱导人小肠类器官发生DNA损伤,从而诱导人小肠类器官衰老。 展开更多
关键词 人小肠类器官 依托泊苷 衰老相关β半乳糖苷酶 p16^(INK4A)A
下载PDF
模拟微重力诱导PC12细胞衰老的初步探讨 被引量：1
17
作者 汪丹丹 李呼伦 +5 位作者 王菁华 刘怡希 王广友 孙博 刘希君 穆莉莉 《现代生物医学进展》 CAS 2011年第1期52-55,共4页
目的:构建模拟微重力条件下PC12细胞的培养体系,探讨模拟微重力对PC12细胞衰老的影响。方法:用Cytodex-3型微载体作为PC12细胞的贴附载体,旋转细胞培养系统所提供10-2g的微重力环境进行模拟微重力条件下的细胞培养。在倒置显微镜下观察P... 目的:构建模拟微重力条件下PC12细胞的培养体系,探讨模拟微重力对PC12细胞衰老的影响。方法:用Cytodex-3型微载体作为PC12细胞的贴附载体,旋转细胞培养系统所提供10-2g的微重力环境进行模拟微重力条件下的细胞培养。在倒置显微镜下观察PC12细胞的生长情况;用扫描电镜观察PC12细胞超微结构的变化;衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)特异性染色对衰老的PC12细胞进行评估。结果:光镜下模拟微重力培养的PC12细胞表现出类衰老细胞的形态,扫描电子显微镜下观察发现其微绒毛增多。SA-β-gal染色的结果显示在模拟微重力的作用下,PC12细胞SA-β-gal的活性升高。结论:模拟微重力可以引起PC12细胞衰老样的形态变化,以及SA-β-gal的活性升高。 展开更多
关键词 细胞衰老 衰老相关β半乳糖苷酶 模拟微重力 PC12细胞
原文传递
衰老标志物在大肠腺瘤和大肠癌中的表达及意义 被引量：1
18
作者 谢丹阳 吴斌文 李东风 《广东医学》 CAS 北大核心 2017年第24期3803-3808,共6页
目的探讨衰老标志物衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)及P16^(INK4A)在大肠腺瘤及大肠癌中的表达及其临床意义。方法应用SA-β-gal染色法和免疫组织法分别检测30例大肠腺瘤及腺瘤旁正常组织、48例大肠癌组织及癌旁组织中SA-β-gal及P16^(... 目的探讨衰老标志物衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-gal)及P16^(INK4A)在大肠腺瘤及大肠癌中的表达及其临床意义。方法应用SA-β-gal染色法和免疫组织法分别检测30例大肠腺瘤及腺瘤旁正常组织、48例大肠癌组织及癌旁组织中SA-β-gal及P16^(INK4A)的表达。分析和比较不同病理特征的大肠腺瘤及大肠癌中SA-β-gal和P16^(INK4A)的表达情况。结果大肠腺瘤组织中SA-β-gal和P16^(INK4a)的表达明显高于大肠癌组织及腺瘤旁正常组织,大肠癌组织中SA-β-gal和P16^(INK4a)的表达明显低于癌旁正常组织。SA-β-gal在绒毛管状腺瘤、>1 cm的腺瘤、进展期腺瘤中低表达,在低分化腺癌、有远处转移、Ⅳ期的大肠癌中低表达。P16^(INK4a)在无淋巴结转移、Ⅰ、Ⅱ期大肠癌中高表达。结论 SA-β-gal及P16^(INK4a)在不同大肠组织中的表达情况提示细胞衰老可能作为抑制途径参与到腺瘤发生癌变的过程中。推测SA-β-gal的检测可能作为预警高风险癌前病变的标志物,P16^(INK4a)可作为大肠癌预后良好的指标。 展开更多
关键词 细胞衰老P16INK4a 衰老相关β半乳糖苷酶 大肠腺瘤 大肠癌
下载PDF
原子转移自由基聚合(ATRP)阳离子化菊粉作为非病毒基因载体的研究 被引量：1
19
作者 王静云 付雪 包永明 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第10期2124-2130,共7页
利用原子转移自由基聚合(ATRP)将聚甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯[P(DMAEMA)]偶联到菊粉多糖(Inulin)上,合成了新型基因载体PDIN.利用核磁共振仪、动态光散射分析仪、透射电子显微镜和凝胶电泳对PDIN及其与质粒pDNA的复合物进行了表征.凝... 利用原子转移自由基聚合(ATRP)将聚甲基丙烯酸N,N-二甲氨基乙酯[P(DMAEMA)]偶联到菊粉多糖(Inulin)上,合成了新型基因载体PDIN.利用核磁共振仪、动态光散射分析仪、透射电子显微镜和凝胶电泳对PDIN及其与质粒pDNA的复合物进行了表征.凝胶阻滞实验结果表明,PDIN可以通过静电相互作用稳定结合pDNA.噻唑蓝(MTT)细胞毒性测试、溶血实验、绿色荧光蛋白表达质粒(pGFP)及β半乳糖苷酶表达质粒(pβgal)转染实验结果表明,PDIN对MCF-7,Hela,COS7和HepG2细胞的毒性较小;其溶血率低,具有良好的血液相容性;载体PDIN能有效将pGFP和pβgal带入COS7细胞并表达,在N/P为1时转染效率最高,其β半乳糖苷酶的酶活为(3.36±0.74)U/mg蛋白,比Lipo2000转染效率[(4.33±0.77)U/mg蛋白]略低.因此,所合成的载体PDIN是一种有潜在应用价值的非病毒基因载体. 展开更多
关键词 菊粉多糖 原子转移自由基聚合(ATRP) 绿色荧光蛋白表达质粒(pGFP) β半乳糖苷酶表达质粒(pβgal) 非病毒基因载体
下载PDF
衰老海马神经元的体外鉴定
20
作者 耿义群 傅玉才 徐小虎 《汕头大学医学院学报》 2008年第2期76-77,共2页
目的:鉴定培养的海马神经元衰老状况。方法:利用SD新生鼠进行海马神经元原代培养,分别取培养6、12和20d的神经元进行衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-GAL)的细胞化学染色。结果:随着培养时间的延长,SA-β-GAL阳性率增加(P<0.01)。结论:... 目的:鉴定培养的海马神经元衰老状况。方法:利用SD新生鼠进行海马神经元原代培养,分别取培养6、12和20d的神经元进行衰老相关β半乳糖苷酶(SA-β-GAL)的细胞化学染色。结果:随着培养时间的延长,SA-β-GAL阳性率增加(P<0.01)。结论:海马神经元可能随着培养时间的延长而衰老细胞增加。 展开更多
关键词 神经元 衰老 衰老相关β半乳糖苷酶
下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 30 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部